無償獻血者乙肝病毒核酸檢測分析

李小容 譚寒玉 朱 林 淳 靜

（四川省綿陽市紅十字中心血站，四川綿陽 621000）

輸血是臨床急救及手術治療等的重要環節，也是挽救傷病者的關鍵，而輸血安全則是保障傷病者生命安全的重中之重，其中，輸血相關性傳染病的預防是臨床關注的重點，血液篩查也是各地血站安全工作的核心。一直以來，血清免疫學檢測都是血液篩查的主要手段，檢測的陽性率高，但是HBV、HCV及HIV這3種液傳播疾病病毒檢測的窗口期均較長，仍具有一定的安全風險。而核酸檢測應用的逐漸廣泛，有效彌補了血清免疫檢測的不足[1]。本研究就核酸檢測在無償獻血者乙肝病毒空窗期篩查中的應用價值進行探究，效果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年8月至2017年12月本院采集的且經過血清免疫檢測合格的無償獻血者的血樣標本為研究樣本，共有107 465例，均進行核酸檢測。無償獻血者均經過嚴格篩選，均身體健康，滿足衛生部頒布的現行的《獻血者健康檢查要求》的相關標準。采集血液后，同時留取用以血清免疫檢測和核酸檢測的樣本，先進行血清免疫檢測，合格后，再行核酸檢測，血清免疫檢測及核酸檢測全程中，血樣的采集、存取及處理操作，皆由專業人員嚴格依照衛生部的技術要求規范進行。

1.2 試劑與儀器

（1）血清免疫檢測。使用全自動酶聯免疫分析儀（生 產 廠 家：HUMAN Gesellschaft fürBiochemica und DiagnosticambH）全自動加樣儀（生產廠家：嘉興凱實生物科技有限公司）；乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAG）酶聯免疫診斷試劑盒、丙型肝炎病毒抗體（HCV）酶聯免疫試劑盒以及人類免疫缺陷病毒HIV（1+2）抗體酶聯免疫檢測試劑盒均購自北京萬泰生物藥業有限公司，具體操作，皆嚴格依照產品使用說明書進行。

（2）核酸檢測。使用羅氏COBASS201檢測系統，使用配套試劑，具體操作步驟，皆嚴格依照產品使用說明書進行。

1.3 方法

（1）標本采集及處理方法。EDTA-K2真空抗凝管，留取10mL血液，分2管裝存，其中，應用帶分離膠的真空抗凝管保存核酸檢測標本。全部標本在血樣采集后4 h內進行離心處理，運輸或保存待檢時，應將樣本置于4℃環境內，需保證在采集血樣24 h內進行檢測。需要追蹤檢測的獻血者的血樣，使用帶分離膠的真空抗凝管留樣，5 mL即可，核酸初檢為陽性的標本，需取血袋血漿，實施核酸拆分實驗。

（2）核酸檢測方法。先進行單人份聯合檢測，若為核酸單獨反應性標本，則進一步采取分項鑒別試驗。

1.4 檢測結果判定標準

兩種檢測行平行檢測。血清免疫檢測結果低于設定的Cut off值，則可判定為陰性，而若大于或等于設定的Cut off值，則可判定為陽性[2]。

在核酸檢測中，核酸單獨反應性判定由系統自動完成，以樣本S/CO值≥1為判定標準，初檢時同時檢測3種病毒，出現反應性結果便是存在1 ～ 3種陽性病毒核酸；初檢陽性者，取血袋血漿，分別進行3種病毒核酸反應試驗，無反應，則為陰性，有反應，為陽性，

1.5 統計學分析

采用SPSS21.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用（±s）表示，行t檢驗；計數資料用（%）表示，行χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 核酸單獨反應性檢測結果

在本組107 465例無償獻血者中，出現核酸單獨反應性的樣本有331例，陽性檢出率為0.31%，核酸初檢單陽性例數有223例，單陽性率為0.21%。

2.2 核酸鑒別試驗陽性檢出結果

進一步核酸鑒別試驗中，有97例為反應性樣本，總陽性率為29.31%；而其中，HCV-NRA的鑒別陽性檢出率顯著高于HCV-DRA和 HIV-NRA，差異有統計學意義（P ＜ 0.05），見表 1。

表1 HBV-DNA、 HCV-DRA和 HIV-NRA核酸鑒別情況比較[例（%）]

3 討論與結論

一直以來，臨床都以血清免疫學檢查為血液篩查的主要手段，陽性檢出率高，但若患者處于窗口期、合并病毒變異或處于免疫靜默期間，均容易出現漏診[3]。近年來，隨著分子流行病學的的發展以及分子生物科學技術的不斷進步，核酸檢測在血液篩查，尤其是HBV、HCV以及HIV等病毒的篩檢中，應用逐漸廣泛，現如今，其應用幾乎已經覆蓋了全國各地的血站。

相比于血清免疫學監測，核酸檢測的最顯著優勢就是能夠縮短病原體檢測的窗口期，其檢測的靈敏度很高，能夠直接對血液中的病原體進行篩查，可以準確檢測出血清免疫檢測不到的隱匿病毒，從而有效提升輸血安全。

核酸檢測基于TMA技術，其基本原理如下：借助特異性的磁微珠以及目標捕獲試劑，將被檢測的病毒核酸分子進行分離和純化，再借助TMA技術，實現對HBV-DNA、HCV-RNA以及HIV-RNA的核酸片段進行擴增，最后，再利用HPA法對擴增產物進行檢測，所用試劑中，具有內標分子，在整個反應過程中都起到嚴密監測的作用，可以有效避免假陰性結果的出現。

現階段，臨床將核酸檢測引入到無償獻血者的血液篩查中，其目的就在于對血清免疫檢測遺漏的血樣進行再次篩查，而血清免疫檢測漏診的發生，主要集中于以下兩種原因，其一，獻血者正處于血清免疫檢測的窗口期，其二則是獻血者屬于隱匿性HBV病毒感染；后一種現象的出現，多是由于病毒變異或者患者自身免疫系統發生變化導致，感染者體內的乙肝表面抗原的合成降低或者出現結構變化，在進行血清HBsAg檢測時，結果呈陰性，但是患者肝組織中還是可以檢出HBV-DNA。而核酸檢測則正好能彌補這一不足。但有研究證實，核酸檢測的總檢出率相比于血清免疫檢測較低，且成本較高，因此，在實踐應用中，均先行血清免疫檢測，再行核酸檢測進行二次篩查，以確保安全性。

本研究中，針對107 465例血清免疫檢測合格的無償獻血者的血樣進行核酸檢測，先行單人份聯合檢測，成功發現有331例血樣存在核酸單獨反應性，進行核酸單陽性確定有223例，進一步實施核酸鑒別反應試驗，最終確定有97例血樣存在病毒感染，而其中有94例HBV-DNA陽性檢出，HCV-DRA以及HIV-DRA陽性檢出則分別為2例和1例。證實了核酸檢測能夠有效彌補血清免疫檢測的缺漏，將兩者聯合應用，效果突出。將陽性檢出率進行兩兩交叉對比，結果顯示，HBV-DNA陽性檢出與其它兩種的陽性檢出率差異有統計學意義（P＜0.05），證實目前輸血安全風險主要為乙肝病毒感染，所以應將其作為防控重點。

綜上所述，核算檢測可以與血清免疫檢測聯合應用于無償獻血者血液安全檢查中，能有效提升輸血安全，另外，臨床應加強對乙肝病毒感染的篩查和防控。