H5N1亞型禽流感滅活疫苗對黃羽肉雞的免疫效果研究

陳永忠 ，蒲常廷 ，孟茹

（1.西寧市畜牧獸醫站，青海 西寧 810003；2.湟中常綠養殖合作社，青海 湟中 811607）

近年來,高致病性禽流感在世界上許多國家暴發流行 ,給養禽業造成了巨大的經濟損失。同時由于禽流感病毒有感染人的能力 ,也給人類的身體健康造成巨大的威脅[1]。疫苗免疫是預防禽流感暴發流行的重要途徑之一，為探討H5N1亞型禽流感滅活疫苗對黃羽肉雞的免疫效果 ,本研究采用不同劑量不同免疫途徑免疫黃羽肉雞，監測抗體的消長規律 ,以制定合理的免疫程序。

1 材料和方法

1.1 試驗動物 1周齡黃羽肉雞，購自寧夏肉雞場。

1.2 疫苗及試劑 禽流感病毒H5N1亞型滅活疫苗，批號為2014038，哈藥集團生物疫苗有限公司生產。禽流感病毒H5亞型HI試驗抗原，批號為20150702，青島易邦生物工程有限公司生產。標準陽性血清，批號為20151004，青島易邦生物工程有限公司生產。0.1M PBS(pH7.2)阿氏液，1%的雞紅細胞懸液（現用現配）。

1.3 儀器 一次性V型血凝板，微量移液器，微量振蕩器，離心機。

1.4 分組和免疫操作 將新購進的1周齡黃羽肉雞隨機分成6組，每組20只。待雞禽流感母源抗體衰減到2log2以下時，第一、二、三組均用禽流感疫苗免疫接種，胸部肌肉注射，劑量分別為第一組 0.3ml/頭、第二組 0.4ml/頭、第三組 0.5ml/頭、第四組用禽流感苗飲水免疫，劑量為1ml/只，第五組對照。免疫后每2周翅靜脈采血（1ml/只）并分離血清。

1.5 抗體測定 按照“禽流感病毒H5N1亞型滅活疫苗制造及檢驗試行規程”中血凝抑制（HI）試驗操作技術進行。

2 結果

禽流感疫苗可有效刺激雞產生HI抗體。免疫后2周，抗體平均效價分別達到:第一組4.2log2，第二組4.1log2，第三組 4.4log2，第四組 2.9log2。第4周免疫注射組HI抗體效價達到最高，均值分別為第一組9.7log2、第二組9.8log2、第三組 9.5log2、第四組4.6log2，各組抗體效價從第6周開始下降，第8周以后下降相對較緩慢。18周內能夠維持較高的抗體水平，20周以后抗體效價均值降低到4log2以下。各免疫組抗體合格率在4～10周內維持較高水平，第10周以后緩慢下降，18周內維持在70%以上，之后下降到70%以下。飲水免疫組第8周以后抗體均值在4.0log2以下。飲水免疫組抗體水平自始至終不合格。不同滴度、不同免疫途徑的禽流感疫苗免疫雞只后的抗體滴度和合格率見表1。

表1 禽流感疫苗不同劑量、不同免疫途徑的抗體滴度和合格率統計表

3 分析和討論

3.1 禽流感疫苗免疫后2周后可產生抗體，第4周抗體效價最高，各組抗體效價從第6周開始下降，第8周以后下降相對較緩慢。18周內能夠維持較高的抗體水平，20周以后抗體效價均值降低到4log2以下；各免疫組抗體合格率18周內維持在70%以上，之后下降到70%以下。此時不足以抵御外界病毒侵襲，由于肉雞4個月可出欄，建議普通肉雞免疫一次即可，蛋雞每4個月免疫1次，劑量以0.3ml為宜。

3.2 注射免疫第三組，有2只肉雞死亡，這是由于疫苗注射劑量過大，發生應激反應死亡，這和于桂陽等[2]研究結果相符合。

3.3 禽流感疫苗注射免疫效果較好，飲水免疫不但浪費大量疫苗，而且免疫效果較差，同時養殖場(戶)無法及時監測免疫效果，有疫病發生的風險，因此，建議養殖戶在對雞只進行禽流感疫苗免疫時不要用飲水免疫，注意在日常免疫操作中應避免大劑量使用疫苗和隨意改變免疫途徑的做法。