復方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產性能、免疫及抗氧化能力的影響

胡 健，王 燕

（江蘇奧邁生物科技有限公司，南京 211225）

在現代養豬生產中，為了提高母豬的生產效率和畜欄的利用率，普遍采用的是早期斷奶技術（一般采用3～5周齡斷奶）。但由于仔豬的消化系統和免疫器官發育尚不完善。早期斷奶后，來自于外界環境因素的改變，可引起仔豬消化能力不足和免疫力下降，因而會出現食欲下降、消化不良、煩躁不安、腹瀉、飼料轉化率低、生長緩慢等一系列問題，被稱之為“早期斷奶綜合征”。如何提高仔豬的免疫功能，減少仔豬腹瀉是提高斷奶仔豬生產性能中亟待解決的一大課題。單純應用抗生素防治可以降低斷奶仔豬的發病率，但是抗生素長期、大量使用或濫用會導致抗藥性、耐藥性和藥物殘留，并可能會通過食物鏈危及到食品安全和人類健康。因此尋找安全、無污染的抗生素替代品作為飼料添加劑已是當務之急。中草藥飼料添加劑作為一種純天然的“綠色”添加劑，其中含有的氨基酸、揮發油、多糖類、維生素、生物堿等生物活性成分能有效預防細菌和病毒性疾病的發生，并且能夠緩解畜禽的應激反應、提高機體的免疫力，是一種既無抗藥性和耐藥性，也無藥害殘留、無污染的一類天然產品。

本試驗結合仔豬斷奶時期特殊的生理特點和中草藥的功能特性，研發針對解決斷奶仔豬生長緩慢和腹瀉率高等問題的中草藥添加劑配方，通過測定仔豬的生產性能、腹瀉率以及對血清中免疫球蛋白、細胞因子和抗氧化酶活性，來驗證該配方的有效性，以期提高養殖戶的經濟效益。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與飼養管理

選擇平均體重相近8±0.5 kg、健康狀況良好的（32±2）日齡斷奶的大白仔豬90頭。按照豬場常規的飼養管理程序和免疫程序進行，豬舍采用的是半開放式、地面是漏縫地板結構，獨立可調式料槽，按壓乳頭式飲水器，仔豬基礎日糧為玉米-豆粕型全價配合飼料，粉料型。每日添料兩次，保證自由采食，自由飲水。每日早晚各清掃豬舍兩次，觀察豬的采食、生長發育、腹瀉等情況。

1.2 試驗設計

將90頭仔豬隨機分為5組，每組3個重復，每個重復6頭豬。5個組分別為：空白對照組（基礎日糧），中草藥組Ⅰ（基礎日糧+0.1%中草藥），中草藥組Ⅱ（基礎日糧+0.3%中草藥添加劑）；中草藥組Ⅲ（基礎日糧+0.5%中草藥添加劑）；抗生素組（基礎日糧+0.5%金霉素+0.5%吉他霉素）。

1.3 試驗時間及地點

試驗于2017年5月～6月于江蘇沭陽禾嘉牧業有限公司進行，試驗期28 d。

1.4 中草藥復方添加劑配方

本產品是由江蘇奧邁生物科技有限公司研制，配方已獲得發明專利（申請號：201710367538.X），按重量份數計，主要由以下中草藥原料組成：麥冬8～14份、牛至4～8份、冬青葉6～16份、銀杏葉3～7份、益母草8～14份、艾葉10～20份、馬鞭草7～13份、鴨跖草8～16份、魚腥草6～12份、忍冬9～13份、甘草3～7份、淮山藥4～8份、麥芽3～7份、枳實5～10份、蒲公英4～6份、山楂10～20份、板藍根8～16份。經低溫超微粉碎步驟粉碎至粒徑為10～12 μm的超微顆粒并采用噴霧干燥法得到的粉末狀復方中草藥添加劑。

1.5 飼糧組成

基礎飼糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平 DM

1.6 樣品采集

于試驗的0、7、14和28 d每天7:00～8:00，保證仔豬空腹情況下，采用前腔靜脈法采血，每個重復組隨機選擇3頭采樣，采血5 mL，待凝血后，使用超低溫離心機于3 000 r·min-1時，離心15 min，使分離血清，分裝、備用。用于檢測仔豬血清中免疫指標和抗氧化指標。

1.7 測定指標及方法

1.7.1 生產性能的測定

試驗開始后記錄各處理每個重復組每周采食量,并分別于試驗開始后0、7、14和28 d空腹稱重，計算出各階段以及全期平均日增重、日采食量和料重比。

每日仔細觀察斷奶仔豬糞便情況，以重復為單位進行一記錄腹瀉情況，根據腹瀉仔豬耳標號進行持續天數統計，以便進行腹瀉率的統計計算。腹瀉率計算公式見式1。豬腹瀉發生的時間與次數，1 d 1頭仔豬發生腹瀉記為1頭次。

1.7.2 血清免疫球蛋白的測定

利用免疫透射比濁法測定血清樣本中的lgG、lgM、lgA濃度，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。利用CX4型自動血液分析儀進行測定。

1.7.3 血清中細胞因子的測定

利用ELISA法測定血清樣本中的白介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的濃度，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.7.4 血清中抗氧化酶活性的測定

利用ELISA法測定血清樣本中的丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和總抗氧化能力（T-AOC），試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.8 統計分析

試驗數據采用SPSS 16.0軟件One Way ANOVA進行統計分析，并進行Duncan's多重比較，結果以“平均值±標準誤”表示。

2 結果與分析

2.1 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產性能的影響

復方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產性能的影響見表2。

由表2可知，在初始體重保持一致的條件下，中草藥Ⅱ組（0.3%）28 d后的末重顯著高于空白對照組（P＜0.05），而中草藥Ⅰ組（0.1%）、中草藥Ⅲ組（0.5%）及抗生素組與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05），且這幾組也無顯著的組間差異。中草藥Ⅱ組（0.3%）和中草藥Ⅲ組（0.5%）的平均日增重和平均日采食量均顯著高于空白對照組和中草藥Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05），而中草藥組Ⅰ組（0.1%）和抗生素組的平均日增重和平均日采食量與空白對照組相比均無顯著差異；通過對料肉比的計算結果可見，中草藥Ⅱ組（0.3%）的料肉比最低。中草藥Ⅱ組（0.3%）和中草藥Ⅲ組（0.5%）的第2和4周采食量均顯著高于空白對照組和中草藥組Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05）。

復方中草藥添加劑對斷奶仔豬腹瀉率的影響見表3。

由表3可知，與空白對照組相比，中草藥Ⅲ組（0.5%）和抗生素組的腹瀉率均顯著降低（P＜0.05），而中草藥Ⅰ組（0.1%）和中草藥Ⅱ組（0.3%）與空白對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

2.2 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白水平及細胞因子濃度的影響

復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白濃度的影響見表4。

由表4可見，中草藥Ⅲ組（0.5%）的仔豬血清中的IgG濃度顯著高于空白對照組（P＜0.05）和中草藥Ⅰ組（0.1%）（P＜0.05）。空白對照組、中草藥Ⅰ組（0.1%）和抗生素組的仔豬血清中的IgG濃度差異不顯著（P＞0.05）。IgA和IgM在各組間均無顯著差異。

表2 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬生產性能的影響

表3 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬腹瀉率的影響

表4 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中免疫球蛋白濃度的影響 mg·dL-1

復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中細胞因子水平的影響見表5。由表5可知，對仔豬血清中的TNF-α和IL-6水平的測定發現，抗生素組的仔豬血清中的IL-6水平在數值上最高，但與其他組相比差異不顯著。各組的TNF-α水平均無顯著差異（P＞0.05）。

表5 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中細胞因子水平的影響mg·dL-1

2.3 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA含量及抗氧化酶活性的影響

復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA及抗氧化酶活性的影響見表6。

由表6可知，空白對照組的仔豬血清中的脂質過氧化標志物-MDA的濃度顯著高于抗生素對照組（P＜0.05），而與中草藥的3個濃度梯度組相比并無顯著差異（P＞0.05）。中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）仔豬血清中的GSH-Px活性均顯著高于空白對照組（P＜0.05）。SOD活性在幾組之間差異不顯著（P＞0.05），而T-AOC的活性在中草藥Ⅲ組（0.5%）最高，但與其他組相比無顯著差異（P＞0.05）。

表6 復方中草藥添加劑對斷奶仔豬血清中MDA含量及抗氧化酶活性的影響

3 討論

試驗的中草藥配方中，艾葉和魚腥草具有健胃、解毒、退熱、鎮痛、止血等功效，對豬流感的治療具有明顯效果[1-2]。卞榮星等對牛至的研究表明，牛至精油具有很好的控制仔豬腹瀉和促生長的效果[3]。江山等利用含益母草的中草藥飼喂斷奶仔豬，可顯著提高仔豬的生產性能和降低腹瀉率[4]。馬鞭草、冬青葉對治療仔豬白痢的效果明顯[5-6]。黃其春等發現，銀杏葉提取物可提高斷奶仔豬的生長性能，降低料肉比，顯著降低斷奶仔豬血清尿素氮和血糖濃度，提高血清堿性磷酸酶活性和提高生長相關激素即血清生長激素和三碘甲腺原氨酸水平，促進仔豬生長，并可提高提高斷奶仔豬血液紅細胞數、淋巴細胞數、血紅蛋白質量濃度和淋巴細胞百分率，促進血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA和補體C3、C4的生成以及細胞因子IL-2、IFN-γ的分泌[7]。研究表明，銀杏提取物能增強斷奶仔豬的免疫功能[8]。鴨拓草具有治療仔豬水腫病等功效[9]。華瑩等研究表明，在斷奶仔豬日糧中添加山楂粉可提高仔豬白細胞參數、降低血清中脂質過氧化標志物MDA濃度，減少由斷奶應激造成的氧化應激，具有提高日增重，減少腹瀉率等作用[10]。唐才果研究表明，板藍根可提高仔豬生產性能、增強免疫力、降低仔豬腹瀉[11]。本試驗研究結果表明，與空白對照組相比，按照0.3%和0.5%添加本復合中草藥添加劑產品，可顯著提高斷奶仔豬的平均日增重和平均日采食量，且和抗生素組相比也顯著差異，這說明該中草藥的添加，有利于促進仔豬采食量的增加，提高增重和飼料轉化效率，且0.3%～0.5%的添加效果最佳，可顯著提高飼料轉化率，提高仔豬抵抗疾病能力，減少仔豬腹瀉現象的發生，作用效果與添加抗生素相當。

血清中的SOD可能催化自由基的歧化反應，GSH-Px可清除脂質過氧化物，而T-AOC代表著血清中氧化酶系統的活性，這些抗氧化酶活性可有效保護細胞膜結構和功能完整性，是機體內重要的抗氧化系統的主要構成[12]。MDA是生物體內自由基作用于脂質發生過氧化反應的終產物，MDA的大量堆積會引起蛋白質、核酸等生命大分子的交聯聚合，且具有細胞毒性。體內MDA含量可間接反應機體的氧化應激狀態[13]。試驗結果表明，抗生素組中的MDA水平顯著低于空白對照組，而中草藥的3個不同濃度試驗組中的MDA水平和抗生素組相比無顯著差異，說明中草藥起到了與抗生素類似的作用，可緩解機體的氧化應激水平。另外，中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）血清中的GSH-Px活性均顯著高于空白對照組，卻與抗生素對照組相比，無顯著差異，且中草藥Ⅱ組（0.3%）和Ⅲ組（0.5%）之間也無顯著差異。說明中草藥具有提高血清抗氧化酶活性的作用，增強斷奶仔豬對機體內自由基的清楚能力，減少自由基對機體的損傷，且按照0.3%～0.5%的添加量來添加，可發揮最優效果。但是，這些中草藥成分對自由基的清除機理尚需要進一步的探索。

免疫球蛋白指具有抗體活性的動物蛋白，主要存在于血清中，可以在一定程度上反映其對外界病原菌和病毒的抵抗能力[14]。IgA、IgG、IgM是機體內幾種主要免疫球蛋白，可保護機體免受外界病原菌和病毒等的感染，并降低動物腸道疾病的發生率[15]。IgG是斷奶仔豬血清中初級免疫應答中最持久、最重要的抗體類型，是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，在抗感染中起到主力軍的作用，可促進巨噬細胞的吞噬作用的發揮、可與病毒抗原結合使其失去對宿主細胞結合的能力[16]。本研究表明，中草藥Ⅲ組（0.5%）的仔豬血清中的IgG濃度顯著高于空白對照組和中草藥Ⅰ組（0.1%），且中草藥Ⅲ組與抗生素組相比，IgG濃度差異不顯著，這說明按照0.5%的添加量，可顯著提高仔豬血清的免疫球蛋白水平，并可以與使用抗生素達到同等水平，這也證實了該中草藥可替代部分抗生素，可增強仔豬的免疫能力。本產品中含有多糖、黃酮等生物活性成分，均具有免疫增強作用，可能是中草藥飼料添加劑中的有效成分具有多個發揮作用的靶點有關。而血清中的細胞因子IL-6和TNF-α均可反應機體的免疫機能，其中，IL-6可反應機體的的體液免疫水平，而TNF-α則TNF-α是一種參與機體免疫反應的促炎癥細胞因子，主要由單核/巨噬細胞產生，是一種多功能的多肽類細胞因子，可參與機體多種生理和免疫過程[17]。本研究中雖然未發現這兩種細胞因子在幾個組中存在顯著差異，但是根據以往的研究來看，中草藥添加劑對于提高仔豬的免疫能力方面起到非常重要的作用，通過提升豬瘟抗體水平、提高血清總蛋白濃度、免疫球蛋白IgG及補體C3水平發揮作用[18-19]。后續試驗也將重點關注中草藥對提高仔豬免疫能力的影響。

4 結論

試驗結果表明，在飼糧中添加中草藥飼料添加劑提高了斷奶仔豬的平均日增重、平均日采食量，提高了仔豬血清免疫球蛋白，降低仔豬腹瀉率，以添加量0.5%效果最好。