清肝降壓膠囊對實驗性眼壓升高的抑制作用

劉宏偉，馬科，宋思悅

清肝降壓膠囊是治療高血壓的中藥口服制劑[1-2]，成份包括：制何首烏、桑寄生、夏枯草、槐花(炒)、小薊、丹參、葛根、川牛膝、澤瀉(鹽炒)、遠志(去心)。臨床使用中發(fā)現(xiàn)，該藥不僅有降低血壓的作用，還有降低眼壓的作用[3]。為驗證清肝降壓膠囊降低眼壓作用，我們用大鼠進行實驗性眼壓升高的造模，并進行降低眼壓的實驗研究。

1 材料與方法

1.1 藥品

清肝降壓膠囊 （北京洪天力藥業(yè)有限公司），用蒸餾水配制成 20 mg/ml，40 mg/ml和 80 mg/ml的濃度；陽性對照為醋甲唑胺片（杭州澳醫(yī)保靈藥業(yè)有限公司），用蒸餾水配制成0.9 mg/ml濃度。陰性對照為蒸餾水。

1.2 實驗材料

麻醉藥戊巴比妥鈉（Merck），新鮮配制成3%的濃度；大鼠灌胃針（北京東西儀科技有限公司），使用18號彎針；一次性使用無菌胰島素注射器（Ultra-Fine）；聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(sigma)；硅油（博士倫），型號為OxaneR5700；局麻藥為0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液 （SANTEN）；ICARE眼壓計（ICAREFINLAND）。

1.3 實驗動物

69只Wister大鼠（北京維通利華實驗動物技術有限公司），體質(zhì)量 250～300 g，SPF級，全部為雄性。

1.4 乳化硅油的制備

量取硅油10 ml，加入乳化劑聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯5 ml，充分混勻，緩慢加入蒸餾水85 ml,加熱至60℃，并不斷攪拌，液體變?yōu)椴煌该鞯娜閯瞥扇榛栌蛡溆谩?/p>

1.5 眼壓升高模型的建立

造模前測定大鼠雙眼眼壓。然后，大鼠按0.1 ml/100g體質(zhì)量，腹腔注射新鮮配制的3%戊巴比妥鈉，右眼滴加局麻藥0.4%鹽酸奧布卡因滴眼液眼，用一次性使用無菌胰島素注射器，將20 μl乳化硅油注入右眼前房中。

1.6 分組并治療

造模后第2天，測定眼壓，根據(jù)眼壓值進行分組，使每組平均眼壓大致相同。第1組為蒸餾水對照組，第2組為低劑量清肝降壓膠囊組（20 mg/ml），第3組為中劑量清肝降壓膠囊組（40 mg/ml），第4組為高劑量清肝降壓膠囊組（80 mg/ml），第5組為醋甲唑胺組（0.9 mg/ml）。分組后立刻開始治療，每天給藥1次，按1 ml/100 g體質(zhì)量灌胃給藥。第15天停藥。

1.7 眼壓測定

從第3天開始，在每次給藥后的1 h，進行眼壓的測定，測定時間分別為第3、5、8、12天。第15天停藥后測定眼壓。

1.8 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 造模前后的眼壓變化

模型眼：造模前眼壓（6.28±1.42）mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），造模后眼壓（7.46±1.88）mm Hg，較造模前升高，前后差異有統(tǒng)計學意義（配對t檢驗，t=4.491，p＜0.001）。

正常對照眼：造模前眼壓（6.03±1.40）mm Hg，造模后眼壓（5.91±1.41）mm Hg，前后差異無統(tǒng)計學意義（t=0.525，P=0.601）。

2.2 藥物對眼壓升高眼的作用

對于模型眼，分別測定給藥前及給藥后第3、5、8、12天的眼壓，以及第15天停藥后的眼壓。結(jié)果顯示，20 mg/ml清肝降壓膠囊組在第5、12天，眼壓低于蒸餾水對照組 （p＜0.05）；40 mg/ml清肝降壓膠囊組在第5、12天，眼壓低于蒸餾水對照組（p＜0.05）；80 mg/ml清肝降壓膠囊組在第 3、5、8、12，眼壓低于蒸餾水對照組（p＜0.05）；醋甲唑胺組在第 3、5、8、12天，眼壓低于蒸餾水對照組（p＜0.05）。第15天，各處理組眼壓數(shù)值均與蒸餾水對照組接近，組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（表 1）。

3 討論

青光眼是我國主要的致盲性眼病之一[4]，眼壓升高是青光眼的主要危險因素。雖然眼壓升高的機制還未完全清楚，但通過藥物或手術降低眼壓，可減緩青光眼造成的視神經(jīng)的損害。目前，人們一直對治療青光眼新藥進行研究，從眼壓升高的新的機理尋找新的藥物。Rho激酶可對肌動球蛋白進行調(diào)節(jié)，控制細胞外基質(zhì)的功能。研究表明，抑制Rho激酶可增加小梁網(wǎng)的間隙，打破細胞間的屏障，增加房水的流出，降低眼壓[5]。Rho激酶拮抗劑有望成為新型抗青光眼藥。另外，從中藥中發(fā)現(xiàn)降低眼壓的藥物，也可為青光眼的治療提供多種選擇。

Cibis在1962年首先報道了硅油在玻璃體視網(wǎng)膜手術中的應用[6]。硅油是目前視網(wǎng)膜玻璃體手術中常用的玻璃體替代物，特別是在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變及牽引性視網(wǎng)膜脫離中的作用明顯。但是，硅油乳化導致的并發(fā)癥也較為常見，眼壓升高是其中較嚴重的并發(fā)癥[7]。原因是，乳化的硅油阻塞房角，引起了眼壓的升高。我們從中得到啟發(fā)，將乳化硅油注射入大鼠的前房中，得到眼壓升高的動物模型。我們的實驗顯示，造模后大鼠平均眼壓從6.3 mm Hg升高到7.5 mm Hg。

口服降眼壓的藥物較少，臨床常用的為唑胺類藥物，它們是碳酸酐酶抑制劑。眼內(nèi)的碳酸酐酶主要分布于睫狀體的上皮細胞中，其作用是將二氧化碳和水合成為碳酸，碳酸分解為碳酸氫根離子和氫離子，同時將水帶入房水中，促進房水的生成。碳酸酐酶抑制劑可阻止此酶的作用，減少房水的生成，達到降低眼壓的目的[8]。本實驗的陽性藥物為醋甲唑胺，是一種口服的碳酸酐酶抑制劑。

我們根據(jù)清肝降壓膠囊的臨床使用的劑量，算出大鼠的每天的劑量是40 mg/100 g，根據(jù)醋甲唑胺片的臨床使用的劑量，算出大鼠每天的劑量是0.9mg/100 g。選用20 mg、40 mg和80 mg/100 g的劑量治療14 d，第15天停藥。分別測定了治療前和治療后的各組的眼壓，結(jié)果顯示清肝降壓膠囊對眼壓升高模型眼有降低眼壓的作用。清肝降壓膠囊與醋甲唑胺一樣，其降低眼壓作用在停藥后消失。

表1 各組大鼠眼壓升高模型眼的眼壓變化情況（m Hg）

表1 各組大鼠眼壓升高模型眼的眼壓變化情況（m Hg）

注：1 mm Hg=0.133 kPa。單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，與蒸餾水組比較，ap＜0.05

組別 眼數(shù)(只) 治療前治療后3 d 5 d 8 d 12 d 15 d蒸餾水對照組 14 7.50±2.35 8.64±2.73 9.00±5.88 6.71±1.54 6.86±1.23 5.57±1.34 20 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 7.50±2.68 7.79±2.69 6.43±1.70a 6.00±1.24 5.71±0.91a 5.93±1.44 40 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 7.50±1.51 8.21±3.26 5.64±1.22a 6.00±0.96 5.79±1.05a 5.71±0.99 80 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 7.50±1.29 6.21±1.63a 4.57±0.85a 4.43±0.85a 5.14±1.10a 5.21±0.80醋甲唑胺組 13 7.30±1.44 5.77±1.24a 5.08±1.50a 4.46±1.51a 5.15±1.07a 5.77±0.93 F值 0.026 3.641 4.958 9.268 5.805 0.794 P 值 0.999 0.010 0.002 ＜0.001 ＜0.001 0.533

表2 各組大鼠正常對照眼的眼壓變化情況（，mm Hg）

表2 各組大鼠正常對照眼的眼壓變化情況（，mm Hg）

注：1 mm Hg=0.133 kPa。單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法，與蒸餾水組比較，ap＜0.05。

組別 眼數(shù)(只) 治療前治療后3 d 5 d 8 d 12 d 15 d蒸餾水對照組 14 6.00±1.36 5.86±1.03 6.07±1.07 6.07±1.44 6.21±1.19 5.93±1.33 20 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 6.07±1.14 6.07±2.06 5.86±0.95 6.00±1.36 5.79±1.21 5.93±1.00 40 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 6.00±1.71 6.64±0.93 6.00±1.24 6.00±1.30 5.64±0.74 5.64±1.15 80 mg/ml清肝降壓膠囊組 14 5.36±1.22 6.00±1.24 6.00±1.62 5.64±0.74 6.07±0.62 5.64±0.84醋甲唑胺組 13 6.15±1.63 5.15±1.14 5.38±0.65 4.46±0.66a 5.00±1.00a 6.00±0.71 F值 0.695 2.121 0.766 4.550 3.250 0.381 P值 0.598 0.088 0.551 0.003 0.017 0.821

清肝降壓膠囊降低眼壓的機理，不很明確。文獻報道，MGP基因表達于動脈壁中層的平滑肌中，與血壓升高有關。MGP基因還存在于小梁網(wǎng)中，抑制其表達可增加房水的外流[9]。清肝降壓膠囊的降低眼壓的作用是否與降低血壓有關，需進一步研究。

與醋甲唑胺不同的是，清肝降壓膠囊對正常眼壓無影響。清肝降壓膠囊對實驗性眼壓升高有抑制作用，對正常眼無降眼壓作用。醋甲唑胺對實驗性眼壓升高和正常眼都有降眼壓作用。