兩種檢測系統檢測CRP的可比性研究

肖利 張易

（1自貢市第一人民醫院檢驗科 四川 自貢 643000）

（2西南醫科大學檢驗系 四川 瀘州 646000）

1.前言

目前，CRP的檢測方法甚多，主要有單向免疫擴散法、乳膠凝集法、散射比濁法、透射比濁法等。快速定量檢測CRP在門急診得到較好的應用，能夠給臨床醫生及時提供定量結果，為是否使用抗生素提供了依據[1]。快速CRP檢測儀具有小巧、快速、定量的特點，是近幾年興起的一種小型CRP檢測儀器，在臨床實驗室中逐漸被廣泛使用。上海艾瑞德生物科技有限公司CRP快速定量檢測系統能夠在數分鐘內獲得CRP定量結果，可以滿足臨床早期診斷和及時判斷療效的需要。為評估兩種不同檢測系統對CRP測定的一致性，本文參照美國臨床檢驗修正法規（CLIA,88)和EP9文件，對本科室快速CRP檢測儀與日立自動生化分析儀進行了比對試驗。

2.材料與方法

2.1 材料

2.1.1 檢測系統1 日立7600-020全自動生化分析儀、德賽診斷系統（上海）有限公司提供C-反應蛋白免疫透射比濁法測定試劑盒（2～8℃避光保存可穩定24個月，開瓶上機后2～8℃穩定30天。）及配套校準品（特定蛋白校準品，德賽診斷系統上海有限公司提供。水平1批號：19732，水平2批號：19733，水平3批號：19734，水平4批號：19735，水平5批號19736）、質控品(倍樂特定蛋白質控品水平2和水平3分裝后，-20℃保存，需測定時候解凍）、反應杯；

2.1.2 檢測系統2 POCT自動進片機（RP-1000）以、超敏C-反應蛋白測定試劑盒(上海艾瑞德生物科技有限公司)檢測系統及其配套試劑(批號)、含不同批號試劑標準曲線的磁卡及質控品（倍樂特定蛋白質控品水平3）。

實驗前完成儀器維護、校準以及室內質控等準備工作。

2.2 檢測原理

2.2.1 全自動生化分析儀檢測CRP使用免疫透射比濁法 人體CRP與相應的抗血清在液相中反應，生成抗原-抗體復合物，并產生濁度，濁度的高低與抗原含量相關，與經過同樣處理的校準液進行比較，計算出樣品中CRP含量。

2.2.2 快速CRP檢測儀使用免疫層析法檢測 將稀釋的測試液從測試孔滴下。樣本落到樣本墊上。樣本從樣品墊留到膠體金墊（含有標記鼠抗人超敏C-反應蛋白單克隆抗體膠體金物質和標記兔IgG膠體金物質），并滲析出抗體，到達膜，在吸水墊發生毛細現象。此時，樣本中若存在C-反應蛋白，則與膠體金墊中的標記抗人C-反應蛋白單克隆抗體膠體金物質形成復合體。然后與T部的（測試部位）標記抗人C-反應蛋白單克隆抗體膠體金物質反應，產生紅色的線。另外，不論是否存在C-反應蛋白，膠體金墊中的標記兔IgG膠體金物質都會與羊抗兔IgG多克隆抗體發生反應，在C1及C2出現質控線。

2.3 標本來源

本實驗室自動生化分析儀檢測CRP使用的標本是分離膠采血管采集的靜脈血血清。快速CRP檢測儀檢測CRP使用的標本是EDTA抗凝采血管采集的指尖血或靜脈全血。為降低實驗成本，簡化實驗程序，選用患者標本程序如下：（1）選出當天在全自動生化分析儀上檢測過CRP的患者并做好記錄。（2）在已記錄的患者中篩選出當天同時做過血液分析的患者為最終選定的患者。（3）找出最終選定患者的兩個標本為實驗所用標本。在此次試驗選用2017年3月在自貢市第一人民醫院就診的患者40例。參照CLSI(NCCLS)EP9-A,收集住院患者血清。收集高中低值血清做比對試驗標本40例。將測定范圍分為高、中、低三段。要求低段濃度占25%，中段濃度占50%、高段濃度占25%；每8個（高中低濃度各2個、4個、2個）標定為一組。

2.4 方法

兩種檢測系統精密度評價變異系數(CV)值均小于7%，因檢測系統l日立7600-020全自動生化分析儀.精密度評價試驗好。且參加衛生部和四川省實驗室質評結果均為優秀，故以檢測系統1作為目標檢測系統比較方法(X)，檢測系統2為試驗方法(Y)，進行方法間CRP檢測的比較試驗。實驗前對儀器進行常規維護和保養，對各檢測系統按常規方法進行校準和質控，室內質控在控時對樣本進行檢測。醫學決定水平對CRP濃度的分類為高值3～10mg/L中值11～30mg/L、低值30～200mg/L。標本選擇連續測試5d，每天檢測8例，其濃度含有高、中、低等不同水平，其中高值2例、中值4例、低值2例，每例標本檢測2次，檢測順序為：第1次檢測按標本隨機編號1、2，3、4.5、6、7、8的順序，第2次檢測按編號8、7、6、5、4、3、2、1順序進行檢測[2]。所有數據均采用excel軟件處理。

3.結果

圖1 CRP比對圖（所有值）

圖2 CRP比對圖（高值）

圖3 CRP比對圖（中值）

圖4 CRP比對圖（低值）

表1 兩種檢測系統檢測CRP的線性回歸分析

試驗檢測系統與目標檢測系統CRP結果的相關分析以目標檢測系統作為X，試驗檢測系統Y分別與其進行相關與回歸分析，結果為y=1.0044X-0.0266。檢測系統間相關系數為0.9931，見圖1。高值部分，結果為y=1.0094X+0.0035，檢測系統間相關系數為0.9981，見圖2；中值部分，結果為y=0.9940X+0.0205，檢測系統間相關系數為0.9933，見圖3；低值部分，結果為y=1.0866X+0.0286，檢測系統間相關系數為0.9898,見圖4。以上數據可以得出，待評系統與目標檢測系統具有可比性[3]。相關性由強到弱依次為：高值＞中值＞低值。

4.討論

CRP作為一種人體重要的急性時相反應蛋白，具有諸多生物學功能，包括識別外來物質，激活補體系統，增強調理作用，增強吞噬細胞吞噬作用，與血小板激活因子（RAF)結合，降低炎癥反應，與染色體結合，清除壞死組織里的細胞DNA。由此可見CRP的測定在感染性疾病的輔助檢查中具有至關重要的作用。若在感染早期能快速及時發現CRP的變化，側回為臨床診療和患者康復贏得更早的機會。近幾年來，隨著技術的發展，市面上出現了一些快速CRP檢測儀，并得到各實驗室的青睞。隨即，實驗室同時擁有至少兩個檢測系統檢測CRP。

快速CRP檢測儀的使用特別適應兒科需求，用手指末梢微量全血。克服了兒童靜脈采血的困難，患兒及家長均更容易接受，且快速報告定量CRP結果，操作簡便，整個過程僅需5min，以更早地為臨床提供具有診斷價值的依據。

同一實驗室內不同檢測系統檢測相同項目時，結果經常出現不一致，造成臨床判斷病情困難，導致臨床醫生和患者對檢驗科投訴，嚴重影響檢驗科信譽度[4]。如何實現同一實驗室內不同檢測系統檢測同一項目的結果具有可比性顯得尤為重要，在實驗室內部，可對不同檢測系統檢測相同項目進行定期比對試驗。并根據比對結果進行相應的整改，確保不同檢測系統檢測結果的一致性。

同一實驗室內部儀器檢測相同項目時必須嚴格做好比對工作，目標儀器參加室間質評成績優秀，通過比對的方式來驗證新購進儀器的準確性是否滿足要求，當兩檢測系統可比性滿足要求時且在室內質控合格的前提下可以正常運行檢測患者標本；如果兩檢測系統可比性較差，不能滿足質目標的要求，且會對臨床診斷產生不良影響時，應該以目標儀器為參考儀器，對試驗儀器進行校準，如果由于儀器性能原因在校準后依然無法達到質量日標的要求，應該與廠家聯系或者拒絕使用該儀器。

本文中，上海艾瑞德快速CRP測試儀是目前興起的袖珍式儀器，具有檢測速度快、穩定性好、占用空間小、操作簡便等優點，雖然是半自動儀器，但室內質控精密度較好，能夠滿足臨床檢測要求。本文通過實驗室內部比對分析發現，該儀器與日立7600-020全自動生化分析儀檢測系統問具有很好的可比性。本文采用EP9-A文件方法進行比對。線性同歸方程中斜率系數r2為0.9931，截距為0.0266，表明兩種檢測系統間間系統誤差很小。

5.結論

上海艾瑞德快速CRP檢測儀與日立7600-020全自動生化分析儀在測定CRP上，兩種檢測系統之間具有可比性。