結直腸癌組織中DEK蛋白的表達及意義

邢維山 張錦輝 夏榮鈞 鄭琳琳 林黎娟

結直腸癌(CRC)是1種常見的惡性腫瘤，手術切除是較有效的治療手段。

原癌基因DEK是由急性髓系白血病亞型中以DEK-CAN 融合蛋白的形式分離出來的[1]，它在很多實體腫瘤如肺癌、膀胱癌、肝癌、子宮頸癌以及黑色素瘤中呈現過表達方式[2]。近些年來，DEK在腫瘤細胞的發生發展中的作用研究日益增多。研究普遍認為DEK與細胞凋亡有密切聯系[3]。我們的前期研究[4]證實了DEK與子宮頸癌細胞增殖密切相關，與增殖細胞標記Ki-67蛋白的表達密切相關，兩者的聯合檢測對于宮頸癌及其癌前病變的診斷具有重要的指導意義；另外，我們的研究也發現DEK與乳腺癌和卵巢癌細胞的發生、發展密切相關[5-6]。本研究利用檢測109例結腸癌及癌旁正常結腸粘膜組織中DEK蛋白的表達，并分析了DEK蛋白過表達與臨床病理學參數及患者生存情況之間的關系。

1 材料與方法

1.1 組織標本

隨機選取丹東市第一醫院2006至2009年期間手術治療的CRC患者109例，其中包括87例男性、22例女性，中位年齡48.6歲(34～76歲)。術后經病理證實均為原發性CRC，所有患者術前均未經化療，無遠處臟器轉移；109例癌旁正常結腸粘膜組織及12例轉移淋巴結組織也被納入本研究。109例患者全部進行跟蹤隨訪5年或者至死亡，隨訪結束時有77位患者生存。本研究經得到當地倫理委員會許可。

腫瘤部位：結腸和回盲部57例，直腸52例；腫塊直徑≤ 5 cm者61例、>5 cm者48例；有淋巴結轉移者49例；侵及漿膜者52例；高分化49例，中、低分化60例；按AJCC分期標準，Ⅰ期14例、Ⅱa期38例、Ⅱb 期4例、Ⅲa期7例、Ⅲb期28例、Ⅲc期15例。

1.2 免疫組化染色

SP法進行免疫組化染色。組織芯片脫蠟、水化，檸檬酸鹽抗原修復液中修復，PBS漂洗，置入30 ml/ L H2O210 min，正常血清37 ℃孵育15 min，加入抗 DEK 單克隆抗體(美國BD公司，1∶50 稀釋)后在4 ℃冰箱內孵育并過夜，再加入生物素標記抗IgG抗體和辣根過氧化物酶標記抗IgG抗體(北京中杉公司)經過37 ℃孵育60 min后，用DAB進行顯色以及蘇木精復染，最后中性樹膠封片。由光學顯微鏡判斷結果著色情況，DEK表現為核染色。

1.3 統計學分析

所得數據應用SPSS 19.0軟件進行統計學分析。DEK蛋白表達率與臨床病理學參數間的關系由卡方檢驗；術后生存率用Kaplan-Meier和Cox比例風險模型進行分析。P<0.05視為差異有顯著性。

2 結果

2.1 DEK 蛋白表達與結直腸組織類型的關系

53例CRC(48.6% )、10例(9.2%)癌旁正常組織、8例(66.7%)轉移淋巴結組織，采用免疫組化染色檢測可見細胞核DEK表達。結直腸癌組織中DEK蛋白表達與癌旁良性組織、轉移淋巴結組織及癌周組織比較均有明顯差異(P均<0.001)，癌組織與淋巴結組織之間比較無相關性(P=0.237)。

2.2 DEK表達與臨床病理學及預后的關系

將DEK表達與臨床病理因素的關系見表1，DEK蛋白表達與腫瘤大小、組織分化程度、淋巴結轉移、漿膜侵犯和腫瘤分期有相關性(P分別為 0.029、0.009、0.006、0.031和0.010)，但與年齡、性別及部位無關。另外，DEK呈陽性表達的CRC與陰性表達的CRC相比，生存率明顯降低，P=0.025(圖1)。

表1 DEK蛋白表達與結直腸癌臨床病理學參數的關系/例

圖1 Kaplan-Meier方法分析圖

2.3 DEK表達與組織分級、漿膜侵犯及淋巴結轉移共同對CRC預后的影響

為了進一步證實DEK表達在CRC進展中的重要作用，比較了它與其它影響CRC進展的因素在評估預后中的作用，其中年齡、組織分級、漿膜浸潤、淋巴結轉移以及腫瘤分期都與患者5年生存率有相關性(P分別為0.002、0.016、0.003、0.002和<0.001)。通過聯合分析發現，組織分級低且伴DEK表達的CRC比組織分級高但不伴DEK表達的CRC 5年生存率高(P<0.001)；有漿膜浸潤且伴DEK表達的CRC比有漿膜浸潤但不伴DEK表達CRC的5年生存率低(P=0.005)；有淋巴結轉移CRC 5年生存率與是否伴DEK表達有相關性(P=0.009)。

2.4 DEK表達與腫瘤分期對CRC預后的影響

腫瘤分期是CRC最重要的組織學預后影響因素，運用Cox進行的多變量生存分析顯示(表2)，腫瘤分期是CRC總生存率獨立影響因素(P=0.0042)。高分期且伴DEK表達的CRC5年生存率最低，明顯低于低分期且伴DEK表達的CRC (P=0.001)；同是高分期的CRC，伴有和不伴有DEK表達的5年生存率顯著不同(P=0.035)。

表2 多因素分析109例CRC患者的獨立風險因素

3 討論

DEK蛋白是1種核磷酸化蛋白，DEK的磷酸化是1種重要的翻譯后修飾，且磷酸化水平高低與細胞凋亡程度密切相關。有研究表明，誘導細胞凋亡時DEK 的磷酸化水平明顯降低[7]。Wise-Draper等[8]認為，DEK過表達可以抑制HeLa細胞的衰老，當HeLa細胞內的DEK敲除后會抑制增殖、誘導凋亡。DEK作為原癌基因在許多惡性腫瘤組織中呈高表達，且其表達水平明顯影響患者的預后狀況，可以用來評估膠質瘤和子宮頸癌的分化程度[9]。

CRC是世界范圍內常見的致死性的惡性腫瘤，其5年總生存率約65%，腫瘤分期是影響預后的最重要的因素。盡管外科手術為CRC提供了較有效的治療，但CRC患者的前景仍然很值得擔憂，因此，認識更多預見不良預后的分子標志物有利于提高患者的治療效果。本研究中我們發現DEK在近二分之一的CRC中呈高表達，且其表達與組織分級、腫瘤大小、漿膜侵犯、腫瘤分期及淋巴結轉移有關。我們的結果證實DEK表達情況聯合這些指標的檢查更加有利于CRC預后的評估。

腫瘤分期是CRC預后不良的重要的組織學特征之一，我們證實高分期中的DEK表達比低分期的CRC接近3倍，且分期高的CRC 5年生存率較低，更重要的是，細胞分期高且伴有DEK表達的CRC 5年生存率較不伴有DEK表達的CRC低，這些結果說明，腫瘤分期與DEK表達共同預示患者的生存情況。另外，腫瘤分期是一個獨立的預后影響因素，我們也證明DEK表達與高分期CRC的不良預后有關。因此可以推測DEK 蛋白對評估CRC預后有一定的參考價值，相信通過進一步研究 DEK 在腫瘤發生、發展中的作用及機制，將會為臨床CRC的預后評估及分子靶向治療提供有價值的依據。