HPLC法測(cè)定琥乙紅霉素中游離紅霉素的含量

于穎

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了琥乙紅霉素片中紅霉素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6 mm×250 mm，5um），以0.01mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.0）-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。紅霉素在50～600μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。紅霉素的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于琥乙紅霉素片中紅霉素的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：琥乙紅霉素片；紅霉素；含量

琥乙紅霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，為紅霉素的琥珀酸乙酯，對(duì)軍團(tuán)菌屬，胎兒彎曲菌，某些螺旋體，立克次體屬和衣原體屬和衣原體也有抑制作用。琥乙紅霉素可作為青霉素過(guò)敏患者治療下列感染的替代用藥：溶血性鏈球菌所致猩紅熱、蜂窩織炎；厭氧菌所致的口腔感染；衣原體屬、支原體屬所致泌尿生殖系感染；沙眼衣原體結(jié)膜炎；放線菌病；梅毒；白喉及白喉帶菌者；氣性壞疽、炭疽、破傷風(fēng)；李斯特菌病等。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）又稱“高壓液相色譜”，可分為“高壓輸液泵”、“色譜柱”、“進(jìn)樣器”、“檢測(cè)器”、“餾分收集器”以及“數(shù)據(jù)獲取與處理系統(tǒng)”等部分。本文采用高校液相測(cè)定了琥乙紅霉素片中紅霉素的含量。

1儀器與試藥

HWP-5實(shí)驗(yàn)室蒸餾水器（鄭州澤銘科技有限公司）；上海 721G可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海圣科儀器設(shè)備有限公司）；上海雷磁 WZS-180A型臺(tái)式濁度計(jì)（上海圣科儀器設(shè)備有限公司）；上海越平FA1004B電子天平（上海圣科儀器設(shè)備有限公司）；Sail（賽爾）1000液相色譜儀（月旭科技（上海）股份有限公司）；Histoon Lab I-05實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（科爾頓（中國(guó)）有限公司）；10升數(shù)控型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）。紅霉素對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。冰醋酸（蘇州市萬(wàn)隆化學(xué)試劑有限公司）、磷酸氫二鈉（蘇州市萬(wàn)隆化學(xué)試劑有限公司）、乙腈（德國(guó)默克MERCK原裝進(jìn)口）、磷酸（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）、甲醇（德國(guó)默克MERCK原裝進(jìn)口）、三乙胺（武漢強(qiáng)松精細(xì)化學(xué)品有限公司）。

2含量測(cè)定

2.1色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果 ，確定色譜條件如下[1-6]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6 mm×250 mm，5um）；以0.01mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.0）-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，梯度，0-10min，乙腈由10%上升到30%，10-15 min乙腈由30%上升到40%，15-20min，乙腈100%） ；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。理論板數(shù)按紅霉素峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2供試品溶液的制備

取琥乙紅霉素片，研細(xì)，精密稱取，加5毫升磷酸鹽緩沖液（pH6.5）超聲處理10分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液置10毫升量瓶中，加磷酸鹽緩沖液（pH6.5）至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3對(duì)照品溶液的制備

精密稱取紅霉素對(duì)照品約5mg，用磷酸鹽緩沖液（pH6.5）溶解并稀釋成每1ml中含200μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4陰性溶液的制備

按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在紅霉素出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600μg·mL-1的對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，紅霉素對(duì)照品在50～600μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取紅霉素對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.86%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的琥乙紅霉素片樣品6份，測(cè)定含量并計(jì)算RSD值，結(jié)果RSD為0.85%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0，2，4，8小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，供試品紅霉素峰面積積分值的RSD為0.83%。結(jié)果表明紅霉素至少在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的紅霉素對(duì)照品，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.86%。

2.10樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定琥乙紅霉素片三批樣品中紅霉素的含量，含量為琥乙紅霉素的4.1%、3.1%、3.6%。

3討論

分別考察以乙腈-0.02mol·L-1乙酸銨溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至4.0）；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至5.0）；0.083mmol/L乙酸胺溶液（pH值5.4）-乙腈-甲醇（45∶35∶20）；水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01）；乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80）；0.01mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.0）-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫；0.05mol·L-1磷酸二氫鈉溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.7）-乙腈（54∶46）；0.02 mol·L-1磷酸二氫鉀（氫氧化鈉調(diào)pH至6.5）-乙腈（5∶1）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以0.01mol/L磷酸二氫銨溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH6.0）-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，供試品各峰分離效果最好。此方法可用于琥乙紅霉素片中紅霉素的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)：

[1]羅意文，姚苑梅，李成.高效液相色譜法測(cè)定紅霉素眼膏的含量[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥.2006（06）

[2]李成，徐玉紅，吳芳，陳連劍，陳欽鎊，魏怡雯. HPLC測(cè)定復(fù)方紅霉素洗劑中紅霉素的含量[J]. 現(xiàn)代食品與藥品雜志.2006（03）

[3]常一丁，劉艷紅，欒國(guó)華.HPLC法測(cè)定紅霉素腸溶片中紅霉素的含量[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)（學(xué)術(shù)版）.2008（02）

[4]闞家義，屈建.HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方羅紅霉素片中鹽酸氨溴索與羅紅霉素的含量[J].中國(guó)新藥雜志.2009（02）

[5]鄧水德.高效液相色譜法與微生物法測(cè)定羅紅霉素軟膏含量的比較[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué).2003（05）

[6]陳瑩，陳輝，林谷園，林荊，江濱煒，吳文凡.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)鰻魚中大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留量的同時(shí)測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào).2008（05）