鐵皮石斛醇提取物對自發性高血壓大鼠降壓作用的研究*

趙文慧 馬津真 聶曉靜 吳 悅 陳 宇 陳 璇 吳人照#

1 浙江中醫藥大學 浙江 杭州 310053 2 浙江省中醫藥研究院 浙江 杭州 310007

我國高血壓病患病率為29.6%[1]。高血壓病是引起諸如中風、心肌梗死、心衰等疾病的重要危險因素之一。現代醫學的降壓治療均為對癥治療，目前常用的降壓藥包括鈣離子通道阻滯劑（CCB）、血管緊張素轉化酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑（ARB）、利尿劑和β阻滯劑5種[2]，尚不能完全阻止高血壓病以及其繼發病變的進展，大多數高血壓患者需要2種或2種以上的降壓藥方可達到目標血壓[3]。多數患者需要終身服藥，因長療程用藥而藥物療效逐漸降低，產生毒副作用，還有隨著壽命的延長而這些問題更加突出。目前高血壓治療依然需要深入研究和完善，中醫藥對于體質和血壓的調節作用，具有整體調理的優勢。鐵皮石斛乙醇提取物對自發性高血壓大鼠（SHR）血壓的影響尚未發現有研究，為充分利用鐵皮石斛資源，尋找更有效的鐵皮石斛降壓用法，本實驗研究鐵皮石斛醇提取物的降血壓作用，并探索其降壓機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物：10周齡SHR大鼠24只，Wistar大鼠8只，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格證：SCXK(京)2016-0011。

1.2 實驗藥物：鐵皮石斛藥材批號：160509，購自華東醫藥股份有限公司。鐵皮石斛醇提取樣品：加5倍總生藥量的75%乙醇55～60℃浸提24小時，提取2次，合并提取物，濃縮，滅菌。對照藥品：絡活喜（苯磺酸氨氯地平片），5mg/片，批號：R78401，輝瑞制藥。

1.3 主要試劑：RNAisoPlus9109：批號：AKA6402，PrimeScript? RT Master Mix（Perfect Real Time）RR036A：批 號 ：AK5101，SYBR? Premix Ex Taq? II(Tli RNaseH Plus)RR820A：批號：AK9301，均購自寶生物工程（大連）有限公司，激素檢測試劑：天津博奧賽斯高血壓系列。

1.4 主要儀器：無創尾動脈血壓測量儀BP-98A型，日本軟融株式會社；DK-S型數顯電熱恒溫水浴鍋：上海浦東榮豐科學儀器有限公司；SW-CJ-1FD凈化工作臺：上海博迅實業有限公司醫療設備廠；PCR儀：美國ABI Veriti；熒光定量PCR儀：美國ABI StepOnePlus；核酸蛋白質定量儀：美國Thermofisher NanoDrop 2000。

1.5 實驗分組：大鼠適應性飼養1周后測量血壓及體重，隨機將24只SHR大鼠分為3組：鐵皮石斛醇提物組(0.8g/kg·d）、絡活喜組(0.5mg/kg·d)、模型組、每組8只，雌雄各半。正常Wistar大鼠8只為正常對照組，雌雄各半。各組大鼠灌胃容量為1.33ml/100g體重，正常對照組和模型組均灌胃等量飲用水。實驗療程8周，每周測量1次給藥2小時及24小時血壓，觀察收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）的1天中的波動變化。

1.6 血壓的測量：將大鼠38℃預熱5～10min，將BP-98A型無創尾動脈血壓測量儀的加壓感應器放在大鼠尾根部，并通過配套軟件獲取數據。每只大鼠清醒安靜時測量3次，均值為測量值。

1.7 相關mRNA的表達量檢測：大鼠4只/組麻醉處死后取腎臟組織，置于液氮中速凍后-80℃保存。用于檢測組織mRNA的表達。使用試劑RNAisoPlus9109提取總RNA，測量濃度和OD260/OD280。用試劑盒PrimeScript? RT Master Mix（Perfect Real Time）RR036A進行逆轉錄，cDNA產物稀釋5倍后用于qPCR。用試劑盒SYBR?Premix Ex Taq? II(Tli RNaseH Plus)RR820A檢測腎臟血管緊張素Ⅱ1型受體（Angiotensin II Type I Receptors，AT1R）、內皮素(endothelin-1，ET-1)mRNA的表達量，內參引物為β-actin。基因的引物序列見表1。

表1 基因的引物序列

1.9 統計學處理：數據資料用SPSS17.0統計軟件處理，采用單因素方差分析（ANOVA），以及LSD-t和Dunnett T3檢驗方法；數據描述以均數±標準差（±s）表示，P＜0.05和（或）P＜0.01為有統計學意義，差異顯著。

2 結果

2.1 鐵皮石斛醇提取物對SHR大鼠血壓的影響：治療前鐵皮石斛醇提物組、絡活喜組與模型組血壓無顯著差異（P＞0.05），組間有可比性；正常對照組大鼠血壓低于同期各組，差異顯著（P＜0.01）。

2.1.1 對收縮壓（SBP）的影響：兩個治療組給藥后2小時SBP從第1次治療到治療8周，均顯著低于同期模型組（P＜0.01）。在治療8周、停藥3天，兩個治療組給藥后24小時SBP均顯著低于模型組（P＜0.01）。鐵皮石斛醇提物(0.8g/kg·d)的給藥后2小時、24小時SBP降壓作用與絡活喜相近。數據見表2、表3。

2.1.2 對舒張壓（DBP）的影響：兩個治療組給藥后2小時DBP從第1次治療到治療8周，均顯著低于同期模型組（P＜0.01）。在治療8周及停藥3天，兩個治療組給藥后24小時DBP均顯著低于模型組（P＜0.01）；在治療完成停藥3天，鐵皮石斛醇提物組給藥后24小時DBP顯著低于絡活喜組（P＜0.05）。鐵皮石斛醇提物(0.8g/kg·d)的給藥后2小時、24小時DBP降壓作用與絡活喜相近，部分時間點的降壓作用還顯著高于絡活喜。數據見表4、表5。

表2 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥2小時SBP的影響（±s，mmHg）

表2 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥2小時SBP的影響（±s，mmHg）

注：與模型組比較，▲P＜0.01；與絡活喜組比較，●P＜0.01。

療 程正常組例數 鐵皮石斛醇提組 絡活喜組 模型組治療前第1次治療治療4周治療8周141.29±3.44▲●140.25±3.51▲●139.21±3.37▲●143.54±3.62▲●8 8 8 8 207.36±6.66 179.54±2.93▲181.58±4.39▲178.00±4.42▲209.75±8.92 181.13±7.38▲175.67±5.54▲178.13±2.86▲208.42±8.80 205.21±10.58●210.17± 7.15●212.33± 5.75●

表3 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥24小時SBP的影響（±s，mmHg）

表3 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥24小時SBP的影響（±s，mmHg）

注：與模型組比較，▲P＜0.01；與絡活喜組比較，●P＜0.01。

療 程正常組例數 鐵皮石斛醇提組 絡活喜組 模型組治療前第1次治療治療4周治療8周停藥3天141.29±3.44▲●139.38±4.23▲●139.54±3.38▲●141.83±2.58▲●142.17±2.48▲●8 8 8 8 4 207.36±6.66 207.58±5.23 207.08±6.73 202.00±4.39▲202.08±1.40▲209.75±8.92 203.71±9.18 208.96±7.09 201.96±5.88▲205.42±1.85▲208.42±8.80 205.67±7.52 211.04±9.15 216.96±6.39●214.17±3.57●

表4 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥2小時DBP的影響（±s，mmHg）

表4 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥2小時DBP的影響（±s，mmHg）

注：與模型組比較，▲P＜0.01；與絡活喜組比較，●P＜0.01。

療 程模型組例數 鐵皮石斛醇提組 絡活喜組正常組治療前第1次治療治療4周治療8周157.13±6.72 156.42±3.64 163.88±7.88●159.71±5.86▲●8 8 8 8 157.35±6.36 142.83± 4.47▲141.50±13.07▲141.67± 2.05▲156.03±4.47 143.33±10.97▲146.21± 8.50▲144.71± 3.66▲103.56±7.50▲●106.75±4.98▲●101.25±2.82▲●100.75±4.57▲●

表5 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥24小時DBP的影響（±s，mmHg）

表5 鐵皮石斛醇提取物對大鼠給藥24小時DBP的影響（±s，mmHg）

注：與模型組比較，▲P＜0.01；與絡活喜組比較，○P＜0.05，●P＜0.01。

療 程模型組例數 鐵皮石斛醇提組 絡活喜組正常組治療前第1次治療治療4周治療8周停藥3天157.13±6.72 162.83±8.61 164.13±6.11 165.38±4.16●165.92±5.50○8 8 8 8 4 157.35±6.36 158.38±6.95 158.71±6.11 156.04±8.39▲149.58±3.45▲○156.03±4.47 158.88±8.34 161.25±7.00 154.33±5.50▲158.67±2.79▲103.56±7.50▲●104.96±6.41▲●102.29±5.30▲●107.54±4.87▲●101.75±7.03▲●

表6 腎臟AT1R、ET-1 mRNA的相對表達量（±s）

表6 腎臟AT1R、ET-1 mRNA的相對表達量（±s）

注：與模型組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01；與絡活喜組比較，○P＜0.05，●P＜0.01。

ET-1mRNA 0.000718±0.000116▲○0.001097±0.000242 0.001287±0.000241 0.000944±0.000101△分組鐵皮石斛醇提組絡活喜組模型組正常組AT1RmRNA 0.020360±0.002184△●0.004760±0.001083▲0.016201±0.001676●0.013121±0.002459●

2.2 鐵皮石斛醇提取物對AT1R、ET-1mRNA相對表達量的影響：如表6所示：模型組AT1R mRNA表達高于正常組，但無統計學意義（P＞0.05），鐵皮石斛醇提物組AT1R mRNA表達顯著高于模型組（P＜0.01）；絡活喜AT1R mRNA表達水平顯著低于模型組（P＜0.01）；模型組ET-1 mRNA表達顯著高于正常組（P＜0.05），鐵皮石斛醇提物組ET-1 mRNA表達顯著低于模型組（P＜0.01）。實驗結果初步說明，鐵皮石斛醇提物下調了ET-1 mRNA表達，上調了AT1R mRNA表達。

3 討論

高血壓病屬中醫學“眩暈”“頭痛”范圍，病因多與陰虛陽亢有關，治療原則為滋陰潛陽。鐵皮石斛性微寒，具有滋陰清熱作用。有研究表明，鐵皮石斛水提取物對易卒中型自發性高血壓大鼠具有持久的降血壓作用，可有效提高生存率，預防中風[4-6]。有文獻報告，不同濃度的石斛乙醇提取物對豚鼠正常血壓有顯著的降血壓作用[7]，但該文獻未報告對高血壓的治療作用。本研究表明，鐵皮石斛醇提取物可顯著降低SHR大鼠血壓，降壓作用達到了與西藥絡活喜相近，部分時間點的給藥后24小時舒張壓低于西藥絡活喜，說明鐵皮石斛醇提取物降壓比西藥絡活喜降壓更穩定。

鐵皮石斛醇提物上調腎臟AT1R mRNA表達，下調腎臟ET-1 mRNA的表達。其中下調腎臟ET-1 mRNA的表達可能與其降壓作用機制有關。