重癥肺炎支原體肺炎患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平及其對(duì)預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值*

張 慶,柴 航,李曉慧△,何 東

1.陜西省榆林市星元醫(yī)院新生兒科,陜西榆林 719000;2.陜西省榆林市星元醫(yī)院兒科,陜西榆林 719000;3.陜西省人民醫(yī)院兒科,陜西西安 710068

肺炎支原體肺炎(MPP)是指由于肺炎支原體感染引發(fā)的肺部急性炎癥反應(yīng)。有研究發(fā)現(xiàn),MPP在各種社區(qū)獲得性肺炎中約占20%,一般表現(xiàn)為鼻塞、咽部充血、流涕等,10%～15%的患者可出現(xiàn)胸腔積液,個(gè)別嚴(yán)重病例可能死亡[1]。重癥MPP(SMPP)患兒預(yù)后不良發(fā)生率為22.50%,包括心肌損害、多器官功能障礙綜合征、死亡等[2]。另有資料顯示,SMPP患兒病死率為2.89%,但目前常用的肺功能檢查、血常規(guī)等指標(biāo)對(duì)此類患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值并不理想[3]。微小RNA(miRNA)是一類單鏈RNA分子,約包含22個(gè)核苷酸,可參與大量病理生理改變[4-5]。有研究表明,微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)可調(diào)節(jié)人輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)的功能進(jìn)而影響肺炎支原體在機(jī)體內(nèi)生長(zhǎng),從而參與MPP的發(fā)展,推測(cè)其可預(yù)測(cè)MPP患兒的病情發(fā)展及預(yù)后,但在SMPP患兒外周血中miR-199a-3p的表達(dá)水平及其是否可預(yù)測(cè)患兒預(yù)后尚未可知。本研究選擇了168例SMPP患兒和165例輕癥MPP患兒,并招募了150例健康兒童對(duì)此進(jìn)行了研究,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2019年2月至2020年10月陜西省榆林市星元醫(yī)院收治的168例SMPP患兒作為重癥組,165例輕癥MPP患兒作為輕癥組,150例健康兒童(招募方式分別為醫(yī)院內(nèi)體檢中心宣傳、兒科門診就診經(jīng)檢查健康、就診患兒的家屬推薦等)作為健康組。重癥組發(fā)病至入院時(shí)間1～5 d,平均(2.50±0.33)d;入院時(shí)急性生理和慢性健康狀況評(píng)分Ⅱ(APACHEⅡ)評(píng)分15～62分,平均(27.99±3.62)分;入院時(shí)呼吸頻率18～67次/分,平均(28.75±4.65)次/分;入院時(shí)血氧飽和度85%～96%,平均(90.10±4.04)%。輕癥組發(fā)病至入院時(shí)間1～3 d,平均(1.55±0.26)d;入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分9～33分,平均(18.75±2.96)分;入院時(shí)呼吸頻率18～46次/分,平均(22.04±4.17)次/分;入院時(shí)血氧飽和度>96%～99%,平均(98.15±2.16)%。3組一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。見表1。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)符合以下所有標(biāo)準(zhǔn)即可確診為輕癥MPP,即一般情況好,無(wú)拒食或脫水征,無(wú)意識(shí)障礙,呼吸頻率正常或略增快,無(wú)發(fā)紺,無(wú)呼吸困難(呻吟、三凹征、鼻翼扇動(dòng)),肺浸潤(rùn)≤1/3肺部,無(wú)胸腔積液,血氧飽和度>96%,無(wú)肺炎并發(fā)癥等;(2)符合以下任意一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)即可確診為SMPP[6],即一般情況差,有拒食或脫水征,有意識(shí)障礙,呼吸頻率>50次/分,有發(fā)紺,有呼吸困難(呻吟、三凹征、鼻翼扇動(dòng)),多肺葉受累或≥2/3肺部,有胸腔積液,血氧飽和度≤96%,有肺外并發(fā)癥等;(3)經(jīng)檢測(cè)明確致病微生物為肺炎支原體;(4)年齡5～13歲。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有其他類型致病微生物感染所致的肺部炎癥反應(yīng);(2)意識(shí)或精神障礙、先天性發(fā)育障礙等;(3)患有其他類型感染性疾病,如泌尿系感染等;(4)患有器質(zhì)性疾病;(5)患有其他類型可能影響外周血miR-199a-3p表達(dá)水平的疾病,如惡性腫瘤等;(6)轉(zhuǎn)院、入院前有MPP治療史、有藥物濫用史等。所有研究對(duì)象均了解本研究并簽訂知情同意書。本研究經(jīng)榆林市星元醫(yī)院倫理委員會(huì)審批(審批號(hào)為201901-003)。

表1 3組研究對(duì)象一般資料比較[n(%)或

1.2方法

1.2.1外周血miR-199a-3p表達(dá)水平檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)miR-199a-3p表達(dá)水平。采集空腹外周血3 mL,用二步法離心分離,即1 500 r/min離心10 min,離心半徑10 cm;12 000 r/min離心2 min,離心半徑108 cm。取上清液用Trizol試劑盒(美國(guó)Invitrogen公司)抽提總RNA,提純后鑒定。反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系共20 μL,利用Mastercycler nexus flat型PCR儀(Eppendorf 中國(guó)有限公司)檢測(cè)。反應(yīng)流程:16 ℃ 30 min、42 ℃ 30 min、85 ℃ 5 min。內(nèi)參為U6,PCR反應(yīng)體系共8 μL,引物序列:正向引物5′-ATCGCGATAGCTAGAGCTAG-3′,反向引物5′-TCGATAGCTAGAGGGACTAG-3′,特異引物序列委托寶生物(大連)公司合成。PCR反應(yīng)條件:95 ℃ 3 min、95 ℃ 15 s、60 ℃ 20 s、72 ℃ 20 s,共40個(gè)循環(huán),最終78 ℃ 20 s。繪制熔解曲線,目的基因相對(duì)表達(dá)水平采用2-ΔΔCt法進(jìn)行計(jì)算。

1.2.2治療方法及預(yù)后不良判斷標(biāo)準(zhǔn) 重癥組和輕癥組均參照《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)(第8版)》[7]實(shí)施常規(guī)治療,輕癥組主要包括祛痰、平喘、止咳、抗感染、降溫、調(diào)節(jié)水電解質(zhì)紊亂等,重癥組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上還包括氧療、通氣支持、改善循環(huán)、臟器支持與保護(hù)等。治療28 d后判斷預(yù)后情況,治愈且無(wú)后遺癥者為預(yù)后良好,有后遺癥(包括壞死性肺炎、支氣管擴(kuò)張、閉塞性細(xì)支氣管炎和肺纖維化)、并發(fā)循環(huán)障礙、并發(fā)多器官功能障礙綜合征、死亡等為預(yù)后不良。

除了政府的政策支持外，物流企業(yè)應(yīng)當(dāng)不斷改進(jìn)配送體系，充分發(fā)揮互聯(lián)網(wǎng)的優(yōu)勢(shì)，建立云物流體系，充分運(yùn)用大數(shù)據(jù)的優(yōu)勢(shì)，對(duì)不同產(chǎn)品、不同客戶進(jìn)行分析歸類，為其提供個(gè)性的物流服務(wù)[5]，從而大大節(jié)約運(yùn)輸成本和時(shí)間成本，使物流體系能夠跟上電子商務(wù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展速度。

2.4外周血miR-199a-3p表達(dá)水平對(duì)重癥組患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值 外周血miR-199a-3p表達(dá)水平預(yù)測(cè)重癥組預(yù)后不良的最佳截?cái)嘀禐?.25,靈敏度、特異度、曲線下面積(AUC)分別為94.12%(16/17)、97.35%(147/151)、0.984。

2.3重癥患兒預(yù)后不良的影響因素分析 重癥組預(yù)后不良患兒發(fā)病至入院時(shí)間>3 d、入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分>30分者占比均高于預(yù)后良好患兒,預(yù)后不良患兒發(fā)病至入院時(shí)間長(zhǎng)于預(yù)后良好患兒,入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分高于預(yù)后良好患兒,外周血miR-199a-3p表達(dá)水平低于預(yù)后不良患兒,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。將單因素分析結(jié)果中P<0.05的因素作為自變量,將重癥組預(yù)后情況作為因變量(變量賦值見表3)進(jìn)行多因素Logistic回歸分析(逐步向前法),結(jié)果顯示,發(fā)病至入院時(shí)間>3 d、入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分>30分、外周血miR-199a-3p表達(dá)水平降低均為重癥組患兒預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

2 結(jié) 果

2.2重癥組與輕癥組患兒預(yù)后不良發(fā)生率比較 重癥組患兒治療28 d后預(yù)后不良17例,其中有后遺癥12例(壞死性肺炎3例、支氣管擴(kuò)張3例、閉塞性細(xì)支氣管炎2例、肺纖維化4例),均有不同程度氣促、氣喘、肺不張等表現(xiàn),并發(fā)心肌損害2例,并發(fā)多器官功能障礙綜合征1例(呼吸衰竭、心力衰竭合并急性腎損傷),休克后搶救無(wú)效死亡1例,并發(fā)多器官功能障礙綜合征搶救無(wú)效死亡1例(呼吸衰竭、急性心力衰竭合并急性腎衰竭),預(yù)后不良發(fā)生率為10.12%(17/168);輕癥組患兒2周內(nèi)治愈出院162例,治療28 d后預(yù)后不良3例,均有后遺癥(肺纖維化,均有不同程度氣促、氣喘表現(xiàn)),預(yù)后不良發(fā)生率為1.82%(3/165)。重癥組患兒預(yù)后不良發(fā)生率高于輕癥組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.743,P=0.003)。

2.13組研究對(duì)象外周血miR-199a-3p表達(dá)水平比較 重癥組患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平(0.44±0.07)均低于輕癥組(0.89±0.12)、健康組(1.19±0.22),輕癥組又低于健康組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3、有關(guān)宏觀決策，廢水、廢氣、固體廢物、噪聲、區(qū)域生態(tài)、土壤環(huán)境等污染控制技術(shù)、清潔生產(chǎn)技術(shù)和工藝、環(huán)境監(jiān)測(cè)與分析技術(shù)、環(huán)境經(jīng)濟(jì)、環(huán)境影響評(píng)價(jià)、環(huán)境管理等的最新研究成果的論文；

SMPP患者病情嚴(yán)重,預(yù)后差,死亡風(fēng)險(xiǎn)高[8]。本研究結(jié)果顯示,SMPP患兒預(yù)后不良發(fā)生率為10.12%,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于輕癥組的1.82%,提示SMPP相對(duì)于輕癥MPP患兒預(yù)后不良發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。本研究SMPP患兒預(yù)后不良發(fā)生率高于國(guó)外學(xué)者OKUMURA等[9]報(bào)道的7.46%,可能是由于患兒病情、診治方案差異等所致。

表2 重癥組中預(yù)后不良與預(yù)后良好患兒一般資料比較[n(%)或

表3 變量賦值

表4 重癥患兒預(yù)后不良影響因素的Logistic回歸分析

1.3觀察指標(biāo) (1)對(duì)比3組研究對(duì)象外周血miR-199a-3p表達(dá)水平;(2)對(duì)比重癥組和輕癥組患兒預(yù)后不良發(fā)生率;(3)分析外周血miR-199a-3p表達(dá)水平與重癥組患兒預(yù)后不良的關(guān)系;(4)分析外周血miR-199a-3p表達(dá)水平對(duì)重癥組患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值。

3 討 論

有經(jīng)銷商向記者反映，目前西南地區(qū)集中用肥季節(jié)已經(jīng)基本結(jié)束。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)冬儲(chǔ)備肥已開啟漲價(jià)模式，在成本居高利好支撐下，個(gè)別肥企已調(diào)漲報(bào)價(jià)。上游原料價(jià)格上漲，氮磷鉀的價(jià)格均有不同程度上漲，導(dǎo)致復(fù)合肥成本略有增加，業(yè)內(nèi)漲價(jià)預(yù)期強(qiáng)烈。下游經(jīng)銷商仍處在在回籠資金階段，詢價(jià)雖有增多，但是磷復(fù)肥產(chǎn)銷會(huì)召開在即，廠價(jià)價(jià)格尚不明朗，短期內(nèi)復(fù)合肥靜觀其變態(tài)度占主流。預(yù)計(jì)待產(chǎn)銷會(huì)之后，復(fù)合肥冬儲(chǔ)報(bào)價(jià)將會(huì)陸續(xù)出臺(tái)。

蔣浩德有些內(nèi)疚，慌忙表示歉意：“紫云啊，這些年真虧了你！海峰當(dāng)年糊涂，現(xiàn)在也后悔了。我也比以前差遠(yuǎn)了，自從你伯母走后，我孤身一人，活得一點(diǎn)意思都沒有。”

有相關(guān)報(bào)道證實(shí)miRNA可參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)等病理過程[10-12]。本研究重癥組患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平均低于輕癥組和健康組,且輕癥組又低于健康組,表明MPP患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平下降,且重癥者表達(dá)水平更低。miR-199a-3p可調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞成熟、分化,在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β與白細(xì)胞介素-6共同作用下初始CD4+T淋巴細(xì)胞可分化為Th17細(xì)胞,而Th17細(xì)胞與免疫、炎癥反應(yīng)均密切相關(guān)[13]。有研究表明,miR-199a-3p表達(dá)水平下降主要是通過負(fù)向調(diào)控IκB激酶β,進(jìn)而影響白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8水平,參與了囊性纖維化氣道炎癥反應(yīng)[14-15],本研究結(jié)果與其相符,推測(cè)外周血miR-199a-3p表達(dá)水平下降很可能也能夠參與MPP的發(fā)生和發(fā)展。另有研究表明,MPP患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平下降,且SMPP患兒表達(dá)水平更低,而Th17細(xì)胞分化檢測(cè)結(jié)果的變化趨勢(shì)正好相反,且主要由Th17細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-6等促炎性細(xì)胞因子水平也升高,參與了炎性疾病的發(fā)生和發(fā)展[16]。

綜上所述，年輕女性較之上一代在產(chǎn)褥期飲食行為方面有所變遷，但仍存在一些不合理的飲食攝入和禁忌，可能會(huì)影響產(chǎn)婦及嬰兒的健康。應(yīng)給予產(chǎn)婦及其家屬相關(guān)知識(shí)的科學(xué)指導(dǎo)，倡導(dǎo)正確的飲食行為，糾正不合理的飲食禁忌，以提高產(chǎn)婦健康水平。

另外,本研究結(jié)果還顯示,外周血miR-199a-3p表達(dá)水平降低是重癥組患兒預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,且其表達(dá)水平預(yù)測(cè)重癥組患兒預(yù)后不良的靈敏度、特異度、AUC分別為94.12%、97.35%、0.984,證實(shí)外周血miR-199a-3p表達(dá)水平下降能夠促進(jìn)SMPP向更嚴(yán)重的方向發(fā)展,推測(cè)主要是因?yàn)榇龠M(jìn)Th17細(xì)胞分化、加重炎癥反應(yīng)所致的肺損傷所致,且該指標(biāo)對(duì)重癥組患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值較高。本研究結(jié)果顯示,外周血miR-199a-3p表達(dá)水平預(yù)測(cè)SMPP患兒預(yù)后不良的AUC高達(dá)0.984,可能是因?yàn)閙iR-199a-3p可通過調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞分化、影響免疫應(yīng)答、參與并加重炎癥反應(yīng)、誘導(dǎo)肺組織炎癥浸潤(rùn)和病理改變等多種途徑加重病情,還可通過上述作用機(jī)制損害機(jī)體臟器功能和整體健康狀況。因此,miR-199a-3p水平與SMPP患兒預(yù)后不良的關(guān)系緊密,對(duì)預(yù)后不良的預(yù)測(cè)效能也理想。

本研究還發(fā)現(xiàn),發(fā)病至入院時(shí)間>3 d、入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分>30分均是SMPP患兒預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,發(fā)病至入院時(shí)間越長(zhǎng)患兒入院時(shí)病情越嚴(yán)重,臨床治療難度增加,且患兒預(yù)后不良的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)越高;入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分>30分表明患兒一般狀況差,預(yù)后不良發(fā)生率也越高,與WU等[17]研究結(jié)果一致。另有研究表明,入院時(shí)呼吸頻率加快、血氧飽和度下降均是重癥肺炎患兒預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素[18]。本研究未分析入院時(shí)呼吸頻率與血氧飽和度對(duì)SMPP患兒預(yù)后不良的影響,主要是因?yàn)锳PACHEⅡ評(píng)分包含對(duì)呼吸頻率、血氧飽和度等結(jié)果的評(píng)價(jià),該評(píng)分與呼吸頻率、血氧飽和度并不相互獨(dú)立。

綜上所述,SMPP和MPP患兒外周血miR-199a-3p表達(dá)水平均低,且前者低于后者,SMPP患兒中預(yù)后不良者外周血miR-199a-3p表達(dá)水平低于預(yù)后良好者,發(fā)病至入院時(shí)間>3 d、入院時(shí)APACHEⅡ評(píng)分>30分、外周血miR-199a-3p表達(dá)水平降低均可增加SMPP患兒預(yù)后不良的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),外周血miR-199a-3p表達(dá)水平對(duì)SMPP患兒預(yù)后不良的預(yù)測(cè)價(jià)值較高。但本研究仍存在不足:如何利用外周血miR-199a-3p表達(dá)水平指導(dǎo)SMPP患兒的個(gè)體化治療尚不清楚,且miR-199a-3p表達(dá)水平下降參與MPP發(fā)生和加重的具體機(jī)制并不明確,均應(yīng)作為后期研究的重點(diǎn)。