血清顆粒溶素對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值研究

高娟 彭裕萍 張昌明 柳林整 申江江

我國(guó)南部地區(qū)鼻咽癌（nasopharyngeal,NPC）發(fā)病率相對(duì)較高，且由于早期NPC缺乏特異性臨床表現(xiàn)，與鼻咽炎（nasopharyngitis，NPT）表現(xiàn)相似，常常誤診[1]。目前臨床診斷NPC主要依靠病理學(xué)和CT檢查，但是病理學(xué)檢查需要有創(chuàng)的組織活檢，CT檢查在NPC早期無(wú)明顯特異性[2]。因此，NPC的早期診斷難度較大。NPC的發(fā)病與EB病毒感染有關(guān)，因此檢測(cè)血清抗EB病毒衣殼免疫球蛋白A（EBV-VCA-IgA）[3]和EB病毒核糖核酸（EBV DNA）[4]等生物標(biāo)志物可用于疑似NPC患者的早期初步篩查。顆粒溶素（Granulysin，GNLY）是一種促細(xì)胞溶解顆粒蛋白，主要由細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌[5]。GNLY主要發(fā)揮細(xì)胞毒性（促進(jìn)細(xì)胞溶解）和促炎作用，可參與機(jī)體的排異反應(yīng)，具有抗菌性和抗腫瘤性[6]。有研究認(rèn)為GNLY可作為病毒感染的生物標(biāo)志物[7]，也有研究指出腫瘤（乳腺癌[8]和胃癌[9]）患者存在GNLY異常表達(dá)的情況?；诖?，本研究綜合分析NPC患者血清GNLY水平的變化，探討GNLY對(duì)NPC的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 連續(xù)納入2016年1月至2017年3月榆林市第一醫(yī)院收治住院的NPC患者109例（NPC組），均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡18～80 歲；（2）無(wú)合并其它惡性腫瘤；（3）非孕產(chǎn)婦；（4）無(wú)嚴(yán)重肝腎功能不全；（5）無(wú)合并其他部位感染。另?yè)裢谑罩蔚腘PT患者68例設(shè)為NPT組，包括扁桃體炎26例、急慢性咽炎25例、鼻前庭囊腫17例；非NPC、非NPT的體檢者60例作為對(duì)照組。3組受檢者一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

表1 3組患者一般資料比較

1.2 血清NPC標(biāo)志物、GNLY水平檢測(cè) 3組患者均空腹抽取肘靜脈血約12ml，于4℃下離心20min（3 000r/min），留取上清液置于-80℃冰箱中凍存。選擇血清EBV DNA和EBV-VCA-IgA作為NPC標(biāo)志物，其中EBV DNA采用熒光定量PCR法檢測(cè)，EBV-VCA-IgA、GNLY采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)。EBV-VCA-IgA滴度超過(guò)1∶40為陽(yáng)性，EBV DNA滴度超過(guò)1×103拷貝/ml為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察并比較3組受檢者血清NPC標(biāo)志物（EBV DNA、EBV-VCA-IgA）陽(yáng)性率及GNLY水平；比較不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平；比較血清GNLY、EBV-VCA-IgA對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件；計(jì)量資料以表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用ROC曲線分析血清GNLY、VCAIgA對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組受檢者血清NPC標(biāo)志物陽(yáng)性率、GNLY水平比較 見(jiàn)表2。

由表2可見(jiàn)，3組受檢者血清NPC標(biāo)志物陽(yáng)性率、GNLY水平比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＜0.05）。NPC組患者血清EBV DNA陽(yáng)性率、EBV-VCA-IgA陽(yáng)性率均高于NPT組與對(duì)照組（均P＜0.05），血清GNLY水平低于NPT組與對(duì)照組（P＜0.05）。NPT組患者血清EBVVCA-IgA陽(yáng)性率、血清GNLY水平均高于對(duì)照組（均P＜0.05）。

表2 3組受檢者血清NPC標(biāo)志物陽(yáng)性率、GNLY水平比較

2.2 不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平比較 見(jiàn)表3。

由表3可見(jiàn)，血清GNLY水平與NPC患者性別、年齡和有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均無(wú)明顯關(guān)系（均P＞0.05）。TNM分期Ⅳ期患者血清GNLY水平明顯高于Ⅰ期、Ⅱ期患者（均 P＜0.05），T3～T4期患者高于 T1～T2期患者 （P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。

2.3 血清GNLY、EBV-VCA-IgA對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值比較 見(jiàn)表4。

由表4可見(jiàn)，血清GNLY水平對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml為界時(shí)，血清GNLY水平對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷靈敏度為0.852，特異度為0.797。

表3 不同臨床特征NPC患者血清GNLY水平比較（n=109）

表4 血清GNLY、EBV-VCA-IgA對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值比較（n=177）

3 討論

GNLY是一種重要的腫瘤免疫細(xì)胞因子，其水平可反映腫瘤患者的免疫應(yīng)答狀態(tài)。GNLY參與細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞對(duì)于腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者血清GNLY水平明顯下降，NK細(xì)胞功能抑制和數(shù)量減少，提示患者處于免疫抑制狀態(tài)[11]。本研究選擇NPC患者為研究對(duì)象，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NPC組患者血清GNLY水平明顯低于NPT組與對(duì)照組。

本研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)，血清GNLY水平對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷價(jià)值高于EBV-VCA-IgA。以血清GNLY水平≤9.64ng/ml為界時(shí)，血清GNLY水平對(duì)鼻咽部病變患者NPC的診斷靈敏度為0.852，特異度為0.797。這提示，對(duì)于鼻咽部病變患者，血清GNLY水平檢測(cè)有助于區(qū)別良惡性病變。GNLY作為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)顆粒中的天然抗菌肽，早期研究多集中于GNLY的殺菌作用，如結(jié)合桿菌等[12]，而后逐步發(fā)現(xiàn)GNLY具有抗腫瘤作用。如Alwasaby等[13]學(xué)者發(fā)現(xiàn)重組GNLY可以促進(jìn)體外實(shí)驗(yàn)中的肝癌細(xì)胞凋亡，而體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)重組GNLY可以明顯提高腫瘤組織中浸潤(rùn)的NK細(xì)胞數(shù)量，激活一系列凋亡通路，抑制腫瘤細(xì)胞過(guò)度增殖。本研究結(jié)果提示，NPC患者血清GNLY水平下降，腫瘤免疫應(yīng)答能力減弱。

本研究還發(fā)現(xiàn)，雖然NPC組患者血清GNLY水平低于對(duì)照組，而隨著TMN分期的不斷加重，NPC組患者的血清GNLY水平也是不斷升高的。通過(guò)對(duì)TMN分期單項(xiàng)指標(biāo)分析發(fā)現(xiàn)，T3～T4期患者高于 T1～T2期患者（P＜0.05），N3期患者高于 N0期患者（P＜0.05）。這提示 NPC患者血清GNLY水平與腫瘤浸潤(rùn)程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移存在一定關(guān)系。進(jìn)展期的NPC患者相對(duì)較高水平的血清GNLY可能與腫瘤后期補(bǔ)體途徑的不斷激活NK細(xì)胞有關(guān)，這提示患者體內(nèi)保護(hù)性的抗腫瘤免疫反應(yīng)程度逐步提高。在NPC的病理生理過(guò)程中，體內(nèi)EBV相關(guān)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞和腫瘤相關(guān)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞水平被抑制，但是NK細(xì)胞被補(bǔ)體途徑激活[14]。因此可以猜測(cè)NPC患者體內(nèi)隨著病情進(jìn)展逐步升高的血清GNLY水平主要來(lái)源于NK細(xì)胞，但尚需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)。

綜上所述，NPC患者血清GNLY水平異常降低，血清GNLY水平檢測(cè)有助于判斷鼻咽部的良惡性病變。