凱氏定氮-氣相色譜法測定藍莓利口酒中微量甲醇的含量

◎ 熊建軍，楊 坤，張建煬，鄒大維

（貴州省黔東南苗族侗族自治州食品藥品檢驗檢測中心，貴州 凱里 556000）

隨著人們生活水平的不斷提高，果酒為越來越多的人所喜愛，成為人們提高生活品味的消費品。藍莓利口酒用新鮮的濃縮藍莓汁，加入茅臺優質的醬香基酒等后，經特殊工藝制成，營養豐富，呈天然寶石紅色，澄清透明，酒香濃郁，甘甜醇厚，具有野生漿果的獨特風格。藍莓利口酒成分復雜，除含有水、乙醇、蛋白質、糖、無機鹽、有機酸、果膠和微量元素外，還存在一定量的有毒有害甲醇。因此，甲醇是飲料酒中重要的衛生質量控制指標之一。

甲醇對人體的危害在于甲醇在人體中隨新陳代謝氧化成毒性更強的甲酸和甲醛，主要危害人體的神經系統。輕度中毒表現為胸悶、惡心等，中度中毒表現為神志模糊、失明等，重度中毒表現為雙目失明、昏迷甚至因呼吸衰竭而死亡[1-5]。國家標準GB 5009.266-2016中規定用蒸餾瓶方法蒸餾發酵酒和配制酒操作復雜，蒸餾速度慢，重復性差等，不適用于大批量酒樣分析[6]。本文研究采用凱氏定氮儀蒸餾藍莓利口酒，用白酒專用柱CP-WAX57CB柱分離，經氣相色譜儀分析摸索出快速檢測藍莓利口酒中甲醇含量的條件，為果酒、配制酒大批量分析甲醇提供檢測參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

樣品：悠蜜藍莓利口酒（酒精度12%vol），貴州茅臺（集團）生態農業產業發展有限公司生產。

儀器設備：GC-2010plus型氣相色譜儀，（配FID氫火焰離子檢測器，自動進樣器，氫氣發生器）日本島津公司；CP-Wax57CB毛細管分析柱（50 m×0.25 mm×0.2 μm），美國安捷倫公司；Milli-Q型純水系統，美國Millipore公司；KDN-103F型自動定氮儀，上海纖檢儀器有限公司。

試劑：甲醇（色譜純，99.7%），中國計量科學研究院；叔戊醇（色譜純，99.5%），Dr.Ehrenstorfer GmbH；無水乙醇（色譜純99.7%），天津市科密歐化學試劑有限公司；去離子水，電阻率＞18.0 MΩ·cm。

1.2 色譜條件

色譜柱：CP-Wax57CB（50 m×0.25 mm×0.2 μm）；載氣N2；柱流速：1.20 mL/min；進樣口溫度220 ℃，柱溫35 ℃，程序升溫：35 ℃，保持4 min；5 ℃/min升至80 ℃；25 ℃/min升至200 ℃，保持3 min，檢測器溫度260 ℃?？刂颇Ｊ剑壕€速；分離比：50∶1；進樣量：1.0 μL。

1.3 甲醇標準溶液的配制

1.3.1 甲醇標準儲備液的配制

準確吸取0.5 g（精確至0.000 1 g）甲醇至100 mL容量瓶中，用40%的乙醇溶液定容至刻度，混勻，在0～4 ℃低溫冰箱密封保存。

1.3.2 甲醇系列標準工作液的配制

分別吸取0.5、1.0、2.0、4.0 mL和5.0 mL甲醇標準儲備液，于5個25 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，依次配制成甲醇含量為100、200、400、800 mg/L和1 000 mg/L系列標準溶液，混勻。

1.4 內標物標準溶液的配制

準確稱取2.0 g（精確至0.000 1 g）叔戊醇至100 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至100 mL，混勻，0～4 ℃低溫冰箱密封保存。

1.5 樣品的測定

準確吸取100.0 mL試樣于250 mL消化管中，用少量去離子水清洗容量瓶后倒入消化管中蒸餾5 min，接口用冷水浴的100 mL容量瓶接收，當接近刻度時，取下容量瓶，待溶液冷卻至室溫后，用去離子水定容至刻度，混勻。吸取10.0 mL蒸餾后的溶液于試管中，準確加入100 μL叔戊醇內標物標準溶液，混勻，上機分析，結果見圖1。

圖1 藍莓利口酒色譜分析圖

2 結果與討論

2.1 方法的線性方程和檢出限

準確吸取甲醇標準使用液各10.0 mL于試管中，準確加入100 μL叔戊醇內標物標準溶液，搖勻，分別進樣1.0 μL，測得標準樣品色譜圖，結果見圖2。以甲醇與叔戊醇峰面積比為縱坐標，甲醇濃度為橫坐標繪制標準曲線（見圖3），用Orign7.5軟件對標準系列進行線性回歸得甲醇（100.0～1 000.0 mg/L）的回歸方程為Y=3.42×10-3X-4.152×10-2，R=0.999 37，結果表示該方法的線性非常好。以3倍信噪比對應的含量定義方法檢出限，以10倍信噪比相對應的含量定義為定量限，該方法的檢出限為1.2 mg/L，定量限為4.0 mg/L。

圖3 內標標準曲線法分析甲醇的標準曲線圖

2.2 方法的精密度和加標回收實驗

在樣品中加入已知濃度的標準物質，通過和樣品完全相同的前處理方法上機測試，測得的值減去原樣品的值后與理論加標的比值的百分數為加標回收率?；厥章?（加標后測量值-樣品中的含量值）/理論加標量×100%。

本實驗通過添加3個不同濃度水平的標準品，每個水平重復測試6次，測得甲醇的回收率范圍和相對標準偏差。實驗結果表明，該方法的加標回收率為88.72%～96.99%，相對標準偏差（RSD，n=6）為0.65%～3.24%，具體數據見表1。這表明所建立的分析方法的準確度均滿足檢測要求。

表1 加標回收實驗結果表

2.3 樣品檢測

本次研究一共對62批次藍莓利口酒進行分析檢測，結果發現其按100%酒精度擇算甲醇含量在0.4～0.5 g/L，均小于國家標準GB 2757-2012規定的限量值2.0 g/L。

3 結論

本實驗通過優化藍莓利口酒蒸餾處理環節，減少能源消耗，降低實驗過程中操作的復雜性，大大節約了樣品處理過程時間，為大批量發酵酒和配制酒檢測提供了技術方案。該方法準確可靠，完全適用于藍莓利口酒中微量甲醇的測定。