銀耳幼耳停止生長的原因研究*

張琪輝 ，賴春芬 ，金珊珊 ，林 鈴 ，朱傳進 ，王麗芬 ，胡開輝 ，3，孫淑靜 ，3**

（1.古田縣食用菌研發中心，福建 古田 352200；2.福建農林大學生命科學學院，福建 福州 350002；3.福建農林大學 （古田） 菌業研究院，福建 古田 350000）

銀耳（Tremella fuciformis Berk.）是我國特色珍稀食用菌，又稱白木耳，屬銀耳科（Tremellaceae）銀耳屬（Tremella），有“菌中之冠”的美稱，是1種藥（食）兩用的食用菌[1]。銀耳栽培需要伴生菌香灰菌的配合，管理技術要求高，栽培周期短，約45 d，但影響其正常生長的因素多，在管理上稍有1個環節疏忽，都會造成不出耳或產量減少[1]。2016年在銀耳主產區福建古田發現，大規模的幼耳直徑長到3 cm左右就停止發育甚至萎縮枯死，造成種植戶的巨大經濟損失。本研究從銀耳栽培的主要原料即棉籽殼著手，探究原料能否引起銀耳發育不良，同時為栽培中原料質量的把控提供參考，為防止銀耳發育停止提供一定的參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料來源

棉籽殼：銀耳發育不良所用同一批未栽培的棉籽殼。

銀耳菌棒：銀耳發育不良的菌棒，菌齡約33 d，銀耳長勢如圖1。

PDA培養基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g～20 g，pH自然，蒸餾水1 000 mL。

圖1 不同菌齡下銀耳的長勢Fig.1 The growth of Tremella fuciformis in different ages

1.2 試驗方法

1.2.1 原料雜質分析

將采集回來的棉籽殼放在體視顯微鏡下放大7倍和20倍觀察。

取約50 g棉籽殼置于燒杯中，加入500 mL蒸餾水，靜置30 min后觀察。

1.2.2 原料質量檢測

將采集到的棉籽殼和銀耳菌棒送到寧德市產品質量檢驗所進行檢測，按地標DB35/T 1312-2013《食用菌栽培原料用棉籽殼》中的方法進行。

1.2.3 棒內菌絲分離培養

將采集回來的菌棒從其橫切面上的9個位置（如圖2所示），分別取約2 mm×2 mm帶菌絲的培養料轉接到PDA平板上，置于23℃恒溫箱中倒置培養，定期觀察菌絲生長情況。

圖2 取樣點示意圖Fig.2 Sampling point schematic

1.2.4 菌棒理化指標檢測

檢測分析采集回來的銀耳菌糠的相關理化指標，包括含水量、pH、還原糖、總酚含量以及纖維素酶、淀粉酶、木聚糖酶、漆酶的酶活力，以福林-酚比色法測定總酚含量 [3]，纖維素酶酶活力測定參照文獻[4]，淀粉酶酶活力測定參照文獻 [5]，木聚糖酶酶活力測定參照文獻 [6]，漆酶酶活力測定參照文獻 [7]。以銀耳發育正常且菌齡相同的銀耳菌棒作為對照。

1.2.5 重栽試驗

將采集回來的菌棒打碎后（下面簡稱舊料） 按如下處理后進行重新栽培試驗，生產管理參照《銀耳生產技術規范》（GB/T 29369-2012） 國家標準管理，觀察菌絲生長情況和出耳情況：

處理一：舊料50%、新棉籽殼25%、玉米芯10%、麩皮14%、石膏1%，含水量控制在55%～60%；處理二：舊料85%、麩皮14%、石膏1%，含水量控制在55%～60%；處理三：將舊料先用水泡洗1 d，再用其按照處理一的配方進行試驗。

2 結果分析

2.1 原料雜質分析

棉籽殼原料雜質分析結果見圖3和圖4。

圖3 顯微鏡下的棉籽殼Fig.3 Cottonseed shell under the microscope注：A：7倍鏡下觀察，B：20倍鏡下觀察。Note:A:observation under 7 times mirror,B:observation under 20 times mirror.

圖4 棉籽殼雜質觀察Fig.4 Observation of impurities in cottonseed shells注：A：從側面觀察分層情況，B：從底部觀察沉降物情況。Note：A:viewing the stratification from the side,B:observation of the precipitum from the bottom.

由圖3可以看出，棉籽殼中存在塊狀物質、粉狀顆粒和蠟狀物質，同時棉籽殼上的棉絨短而少。棉絨的減少和粉狀顆粒雜質的增多可造成栽培料孔隙度減小、培養基透氣性變差，將會引起培養基缺氧。浮力試驗結果如圖4所示，棉籽殼在水中出現了明顯的分層現象，上層的漂浮物主要是棉殼，棉絨較少，燒杯底部沉淀出沙、石、土、灰等雜質。

2.2 原料質量檢測

對原料質量進行檢測，結果見表1。

表1 棉籽殼質量檢測結果Tab.1 Quality testing results of cottonseed shell

從表1可以看出，棉籽殼中的灰分、雜質、粗纖維、粗蛋白、水分含量和pH均符合地標《食用菌栽培原料用棉籽殼DB35/T 1312-2013》中的理化指標的要求，檢測結果表明在營養成分方面棉籽殼符合銀耳栽培所需。

2.3 棒內菌絲分離培養

棒內菌絲分離培養結果見圖5。

圖5 菌絲生長情況Fig.5 The growth of mycelium at each sampling point注：A表示病菌棒橫切面；B、C、D表示分別培養3 d、5 d、10 d。Note:A means cross section of ill-stick;B,C and D mean the growth of mycelium at every sampling point after 3 d,5 d,10 d.

圖5 A中可以看出接種塊的白毛團沒有明顯的生長，銀耳菌絲的生長受到抑制；從圖5B、圖5C、圖5D中可以看出，各取樣點分離菌的菌絲生長速度和黑色素分泌情況都沒有明顯的差異，表明菌棒內各處的香灰菌的活力沒顯著差異。

2.4 菌棒理化指標檢測

菌棒的理化指標檢測結果如圖6所示。

從圖6A中可以看出試驗組的含水量明顯比對照組高，且與菌包原始的含水量相近；圖6B顯示試驗組的pH值均高于對照組；圖6C和圖6D顯示試驗組菌棒中的還原糖和總酚含量均顯著低于對照組；圖6E顯示試驗組菌棒中漆酶和淀粉酶酶活力高于對照組，而纖維素酶和木聚糖酶酶活力則低于對照組。各理化指標顯示試驗組菌包和對照組菌包間存在顯著差異。

2.5 重栽試驗

銀耳菌株重栽試驗，結果見圖7和圖8。

菌絲生長情況：處理一、處理二、處理三的菌絲平均生長速度分別為 0.88 cm·d-1、0.90 cm·d-1、0.91 cm·d-1，統計結果顯示在 0.5%水平無顯著差異；菌絲長勢如圖7所示，各處理菌絲外觀和黑色素分泌情況無顯著差異。

子實體生長階段：銀耳子實體生長發育如圖8所示，在原基形成過程，處理一和處理二吐水黑且渾濁，表明銀耳菌絲生長發育不良，處理三吐水顏色清黃，表明銀耳菌絲生長發育良好[1]；各處理均能形成耳基，從耳基生長情況來看，處理一和處理二耳基生長比較緩慢且不整齊，擴口13 d后就停止生長，處理三耳基生長較快且較為整齊，發育良好。試驗結果表明，舊料中可能含有有害物質導致銀耳生長發育不良。

圖6 菌棒理化指標Fig.6 Physicochemical index of stick注：A：菌糠含水量；B：pH；C：還原糖含量；D：總酚含量；E：酶活力。Note:A:water content of fungus chaff；B:pH；C:reducing sugar content；D:total phenol content；E:enzyme activity.

圖7 不同處理下菌絲生長情況Fig.7 The growth of mycelium in different treatments

3 小結與討論

圖8 不同處理下銀耳生長發育情況Fig.8 Growth and development of Tremella fuciformis in different treatments

食用菌生長發育受內外雙重因素控制，內部因素是食用菌自身的遺傳規律決定的，外部因素是人為制造的生態環境，外部因素包括營養、基質含水量、酸堿度、溫度、空氣濕度、氧氣、二氧化碳和光照等[8]。菌棒是食用菌生長發育的基質，為食用菌生長發育提供場所、營養物質、水以及適宜的pH環境，同時菌棒的理化性狀還影響著氧氣和二氧化碳、溫度等外部因素，因此，菌棒在食用菌生產中是至關重要的。原料是菌棒的主要構成物質，對菌棒質量起著決定性作用。試驗結果顯示棉籽殼營養成分含量都符合《食用菌栽培原料用棉籽殼》標準要求，但浮力實驗和顯微鏡觀察顯示棉籽殼中摻雜泥沙石灰等小顆粒物質和一些蠟狀物質，棉絨短而少，這將會導致菌棒孔隙度降低，造成銀耳生長缺乏氧氣，引起香灰和銀耳生長發育不良，這個結果跟丁湖廣[9]的觀點一致。

銀耳生產中菌棒是重要的栽培基質，菌棒的理化狀態也可以反映食用菌的生長發育情況。食用菌子實體生長發育過程中所需要的水分主要來自菌包[8]，菌包內水分來源有2個方面：一是栽培料配方中的含水量，二是菌絲通過呼吸作用生成的水分，含水量的變化從一定程度上反映了菌絲的生長活力和呼吸強度，本研究理化指標測定結果顯示銀耳生長停止的菌棒的含水量顯著低于正常的菌棒，且接近原始菌包的含水量。還原糖是分子中含有游離醛基或酮基的單糖和含有游離醛基的二糖的總稱，如葡萄糖、麥芽糖、半乳糖等，容易被真菌吸收利用，徐碧如和黃年來[10-14]的研究均顯示銀耳菌絲幾乎沒有分解纖維素和木質素的能力，基本上也不能利用淀粉，需要由香灰菌分解纖維素和半纖維素產生分子量較低的還原糖傳遞給銀耳供其生長發育需求；菌糠中的多酚主要有兩個方面來源：一是棉籽殼中棉酚，隨著銀耳的生長有少量的棉酚轉移到銀耳中導致菌棒多酚含量減少[15]，二是漆酶分解木質素為菌體生長提供營養物質，同時也會產生酚類和醌類物質[16]。所以菌棒內的還原糖和總酚含量也能反映菌絲的代謝活動，試驗結果顯示銀耳生長停止的菌棒的還原糖和總酚含量明顯低于正常菌棒。酶活力能夠直觀反映菌絲的活力，淀粉酶、纖維素酶、木聚糖酶和漆酶的作用是分解淀粉、纖維素和木質素為菌絲體生長提供營養，且在銀耳子實體生長階段由纖維素酶和木聚糖酶發揮主要作用[2]，試驗結果顯示纖維素酶和木聚糖酶活力均低于正常菌棒，各理化指標檢測結果均表明其代謝活動受到了顯著的抑制。

重栽試驗原料經過浸泡洗滌后可正常出耳，表明是由于主原料棉籽殼中含有其他雜質和有害物質抑制了銀耳的后期生長。

本研究結果顯示棉籽殼問題能夠引起銀耳發育不良，然而張漢文等[17]認為幼耳停止生長是由于耳友菌退化造成的，食用菌生長發育受到多方面因素的影響，需要綜合考慮，農戶家庭作坊式栽培還受到天氣的影響。此外，對于棉籽殼的質量除了考慮營養、雜質和有害物質外還需要對其物理性狀進行考慮，例如棉絨長短、絨殼比例、沉降系數等。