干燥方式對艾葉品質的影響*

蒲 銳，王小婷，武 娟，毛夢然，萬定榮

（中南民族大學藥學院，湖北 武漢 430074）

艾葉為菊科植物艾 Artemisia argyi Levl.et Van.的干燥葉，為我國傳統中藥，也是艾灸療法的原材料。其味辛、苦，性溫，有散寒止痛、溫經止血功效[1]。現代研究表明，艾葉主要含有揮發油、黃酮類、鞣質，同時也含有三萜類、多糖等有效成分[2-4]，有抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化等藥理作用[5-10]。艾葉的有效物質含量與其藥用功效直接相關，不同干燥方式可能對其有效物質含量有顯著影響。本研究中以艾葉主要有效物質揮發油、黃酮類、鞣質的含量為指標，并輔以高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜法進行比較研究，考察常用干燥方式對艾葉質量的影響，以提供最佳干燥方式，保障艾葉商品或其產品的品質，保證其臨床應用的有效性。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UltiMate 3000型高效液相色譜儀（含二極管陣列檢測器，Chromeleon色譜工作站，美國戴安公司）；BDS Hypersil C18色譜柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm，賽默飛世爾科技<中國>有限公司）；UV-1800PC型紫外-可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）；AB256-S型十萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多<上海>有限公司）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-4型水浴鍋（金壇市科興儀器廠）；揮發油提取器（武漢杰恒達工貿有限公司）；98-1-B型電子調溫電熱套（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試藥

芹菜素對照品（批號為111901-201603，純度為99.2%），沒食子酸對照品（批號為110831-201605，純度為90.8%），均購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純，美國天地有限公司）；甲醇（分析純，國藥集團化學試劑有限公司）；水為超純水；其他試劑（國藥集團化學試劑有限公司）均為分析純。艾葉樣品共6批，來源于湖北蘄春5批，武漢郊區1批，經中南民族大學藥學院萬定榮教授鑒定，均為菊科植物艾 Artemisia argyi Levl.et Van.及其干燥葉。樣品采收期均為2016年5月27日，每批樣品采集后分室外太陽暴曬或室內陰干2種方式干燥，共獲得12份試驗樣品。

2 方法與結果

2.1 揮發油含量測定

供試品制備：用四分法取適量樣品，剪碎（直徑1～2 mm，下同），充分混勻，裝入潔凈的樣品袋中，即得。

樣品含量測定：取各剪碎樣品約40 g，精密稱定，參照2015年版《中國藥典（四部）》通則2204“揮發油測定法”進行測定，其中燒瓶加水600 mL。測定結果見表1。

表1 6批12份曬干及陰干艾葉樣品含量測定結果

2.2 總黃酮含量測定

溶液制備：取各剪碎樣品約1 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 mL，稱定質量，85℃水浴回流1 h，放冷，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液；取芹菜素對照品10.05 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加70%甲醇適量使溶解，并定容至刻度，即得對照品溶液。

標準曲線繪制：精密量取對照品溶液0.15，0.40，0.80，1.60，2.40，3.20，4.00 mL，分別置 25 mL 容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，以70%甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法，在338 nm波長處分別測定吸光度（A）。以吸光度（Y）為縱坐標、芹菜素質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y=0.079 6X+0.008 8，r=0.999 7（n=7）。結果表明，芹菜素質量濃度在0.598 2～15.951 3 μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

測定方法學考察：測定方法通過本課題組試驗確定，其供試品溶液的制備、測定波長、測定方法均參考文獻[11]。方法學考察結果表明，該方法精密度、重復性及加樣回收率均符合含量測定要求，表明供試品溶液在24 h內穩定。

樣品含量測定：取上述6批分別經暴曬和陰干的艾葉樣品共12份，剪碎，各取約1 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并進行測定。每份樣品各制成2份供試品溶液，取測定平均值作為含量測定結果。結果見表1。

2.3 鞣質含量測定

溶液制備：取各剪碎樣品約2 g，精密稱定，置250 mL棕色容量瓶中，加水150 mL，放置過夜，超聲處理10 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過，棄初濾液50mL，精密量取續濾液20 mL，置100 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取沒食子酸對照品50 mg，精密稱定，置100 mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置50 mL棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

標準曲線繪制：精密量取對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分別置 25 mL 棕色容量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1 mL，再分別加水11.5，11.0，10.0，9.0，8.0，7.0 mL，用 29% 碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30 min，以相應的試劑為空白溶液，照紫外-可見分光光度法，在760 nm波長處測定吸光度，以吸光度(Y)為縱坐標、沒食子酸的質量濃度（X，μg/mL）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=0.125 6X+0.038 7，r=0.999 8（n=6）。結果表明，沒食子酸質量濃度在0.908～9.080 μg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

測定方法：參照2015年版《中國藥典（四部）》通則2202項下方法進行測定。

樣品含量測定：取上述6批分別經暴曬和陰干的艾葉樣品共12份，剪碎，各取約2 g，精密稱定，依法制備供試品溶液并進行測定。每份樣品各制成2份供試品溶液，取測定平均值作為含量測定結果，詳見表1。

2.4 含量測定結果分析

由表1（均按干燥品計）可見，6批陰干艾葉樣品的揮發油、總黃酮和鞣質含量均顯著高于另6批相同產地環境的曬干樣品。其中，6批陰干艾葉樣品的揮發油、總黃酮和鞣質的含量范圍分別為0.95%～1.25%，2.03% ～6.93%，1.18% ～3.82%；相同產地與環境的6批曬干艾葉樣品的揮發油、總黃酮和鞣質的含量范圍分別為0.76% ～0.90%，0.93% ～5.67%，0.52% ～2.87%。6批陰干艾葉的揮發油、總黃酮和鞣質含量的平均值比曬干艾葉分別高25.3%，31.1%和39.9%。曬干樣品中，有1批總黃酮的含量還達不到艾葉國際標準（ISO 20759）對總黃酮的低限要求（不應低于1.10%）[12]。

2.5 樣品HPLC指紋圖譜的初步比較

色譜條件：色譜柱為BDS Hypersil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-0.2% 磷酸溶液（B），梯度洗脫（A：0 ～15 min、10%→20%，15～30 min、20%→25%，30～40 min、25%→35%，40～45 min、35%→36% ，45～55 min、36% →65% ，55～60 min、65% →97%）；流速為0.8 mL/min；檢測波長為338 nm；柱溫為 30℃；進樣量為10 μL。

供試品溶液制備：取剪碎的各艾葉樣品約1 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，加入70%甲醇溶液50 mL，稱定質量，85℃水浴回流1 h，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液5 mL，置25 mL容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得。

HPLC指紋圖譜比較：對其中3批共6份陰干、曬干的樣品經70%甲醇提取其主要含有黃酮類物質的供試品溶液，采用高效液相色譜儀對其進行初步HPLC指紋圖譜研究，比較了陰干、曬干樣品峰的種類、數目及峰面積。結果顯示，所有同批曬干樣品與陰干樣品主要色譜峰的種類和數目均基本一致。但前者多數峰的峰面積顯著低于后者，平均峰面積低于38.2%。圖1以采于湖北李時珍醫藥集團的2份對應的曬干和陰干艾葉樣品為例，顯示出HPLC指紋圖譜峰面積的顯著差異。

圖1 艾葉樣品高效液相色譜指紋圖譜

3 討論

研究結果表明，產于湖北的6批共12份艾葉樣品中，陰干樣品的有效物質揮發油、總黃酮、鞣質的含量均顯著高于曬干樣品。兩類樣品的甲醇提取液的HPLC色譜峰的總峰面積相比也有類似結果。表明艾葉樣品在5月底采集后的短期內，由于干燥方式不同導致幾類化學成分含量產生顯著變化。藥材揮發油含量可因暴曬而顯著降低是普遍規律。總黃酮、鞣質含量因曬干而明顯降低也有報道[13-16]，而在艾葉中降幅更顯著。

鑒于采取曬干的干燥方式會大幅度降低艾葉中揮發油、總黃酮和鞣質含量，為保證艾葉有效成分的高效利用，為臨床提供高品質的艾葉，干燥方式應盡量采用自然陰干。建議艾葉產區在艾葉收獲后采取搭棚或室內緩慢晾干的方式進行干燥，確保艾葉應用品質。