天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后病毒血癥和抗體消長規(guī)律的試驗報告

徐洪濱 李四山 宗衛(wèi)陽

（1.如皋市家畜改良站，江蘇如皋 226500;2.如皋市畜牧獸醫(yī)站，江蘇如皋 226500）

1 豬藍耳病介紹

高致病性豬繁殖與呼吸綜合征（HP-PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種急性高致死性疫病。發(fā)病主要特征為懷孕母豬流產(chǎn)、早產(chǎn)、木乃伊胎等，母豬流產(chǎn)率可達30%以上；仔豬出現(xiàn)嚴重的呼吸道癥狀，感染率可達100 %，死亡率在50%以上。

豬藍耳病誘因復雜，主因為藍耳病病毒的感染。受此影響多數(shù)免疫缺失，加重其他病菌和病毒的感染概率，比如：豬瘟、豬狂犬病、附紅細胞體病、豬巴氏桿菌、豬弓形體等等，而形成較高的致死率。除此之外，其他的一些不良應激。比如：接種防疫工作不到位，同樣為不可忽視的關(guān)鍵因素。此外，處于惡劣的養(yǎng)殖環(huán)境、舍內(nèi)養(yǎng)殖密度過大、長途運輸、飼喂營養(yǎng)不全、飼料管理不善等等，都將加重此病的易感性。豬藍耳病造成的危害極大，主要是體現(xiàn)在：其一，大量母豬流產(chǎn)，死胎率高升，大量仔豬死亡，影響豬場的經(jīng)濟效益。其二，可造成豬體的免疫抑制，導致其他疫苗接種的失敗，易混合感染豬瘟、附紅細胞體病、豬肺疫、豬傳染性胸膜肺炎等等，而加重致死率。

在豬藍耳病防控管理過程中，接種防疫疫苗為最佳的選擇。目前我國使用的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征疫苗均為活疫苗，據(jù)報道活疫苗免疫后可在動物體內(nèi)復制并持續(xù)存在。為摸清高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后在豬體內(nèi)的存在時間，探究高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后病毒血癥和抗體消長規(guī)律的情況，對規(guī)范接種防疫管理工作大有裨益。

2 天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后病毒血癥和抗體消長規(guī)律的試驗設(shè)計

2.1 試驗對象

如皋市某規(guī)模化養(yǎng)豬場，選擇日齡在20～25之間未經(jīng)高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗的仔豬15頭，經(jīng)熒光RT-PCR檢測，待試驗的豬只健康無感染豬瘟、豬藍耳病、II型圓環(huán)病毒感染的情況，上述病毒檢測均顯陽性。

2.1.2 試驗用疫苗

天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，由政府統(tǒng)一采購發(fā)放。

2.1.3 RT-PCR試劑

鑒別檢測豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）高致病性強毒和致弱TJM-F92株疫苗毒的RT-PC R引物，由華威特生物科技有限公司提供，擴增片段位于NSP2基因；dNTP，M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，RNA酶抑制劑、Ex Taq聚合酶等，購自寶生物工程（大連）有限公司。

2.1.4 豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測試劑盒

購自北京天之泰生物科技有限公司，法國LSI公司生產(chǎn)。

2.1.5 核酸提取試劑

[42]央廣網(wǎng)：《對接“一帶一路”倡議，柬埔寨文化旅游發(fā)展迎來新契機》，http://dl.cnr.cn/tnhb/20171031/t20171031_524007040.shtml，2017年10月26日。

核酸提取試劑盒（磁珠法），購自西安天隆生物科技有限公司。

2.1.6 試驗器材

eppendorf微量移液器，PC R儀，電泳儀，凝膠成像系統(tǒng)，西安天隆生物科技有限公司NP968核酸提取儀，伯樂iMark酶標儀。

2.2 試驗方法

2.2.1 注射疫苗

根據(jù)使用說明書規(guī)定的劑量接種，規(guī)范接種操作，選擇安全有效的防疫疫苗。

2.2.2 過程比較

生豬在接種試驗前，需采血1次。疫苗注射后，每周采血1次，連續(xù)采血10周。之后，間隔2周采血1次，連續(xù)采血4次。

2.2.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測

用RT-PCR方法檢測。

2.2.4 接種后抗體檢測

根據(jù)抗體檢測試劑盒要求，按照步驟依次進行檢測。判定標準，阻斷率（IRPC）在20%以上的，確定為抗體陽性。而且，阻斷率越大的，抗體水平同樣越高。

2.3 調(diào)查結(jié)果

2.3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化情況

上表為血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測結(jié)果，從統(tǒng)計的數(shù)據(jù)來看，在沒有接種防疫之前，所有生豬體內(nèi)都沒有檢測出疫苗毒核酸。而在接種后1周開始，陸陸續(xù)續(xù)在生豬體內(nèi)檢測出TJM-F92株疫苗病毒核酸顯陽性。第一周4頭，第二周2頭，第三周7頭，第四周3頭，第五周0頭，第六周1頭。自第六周開始，被檢測的15頭生豬檢測毒血癥均顯陰性。為此，可以判斷血清中TJM-F92株疫苗病毒持續(xù)時間最長也就6周，之后會逐漸減弱消失。

表1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸檢測結(jié)果

表2 接種后抗體檢測結(jié)果

2.3.2 天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后抗體消長規(guī)律

從統(tǒng)計數(shù)據(jù)來看，免疫之前豬體受母源抗體的保護，被檢測抗體顯陽性的為13頭，抗體陽性率為87%。開始接種免疫疫苗后，豬群中檢測出來的抗體陽性率逐漸下降，第二周降低到最低值有33%。而后，抗體檢測陽性率開始慢慢回升，第3周47%；第4周 53%，到第五周，所有豬只都檢測均顯陽性。這種狀態(tài)一直持續(xù)到第十二周，抗體陽性檢測率維持在100%。從十四周開始，陽性檢測率略有下降，始終維持在93%。從抗體平均阻斷率來看，接種防疫之前，同樣維持在較高水平，72%。接種后開始緩慢的下降，第1周26%，第2周降低到最低為18%。從第二周開始，抗體平均阻斷率開始回升。一直到第六周到達最高值為78%。而后，又開始緩慢的下降。

3 討論分析

3.1 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化情況

從表1統(tǒng)計的接種活疫苗后病毒存在時間的變化規(guī)律來看，不同的生豬在接種后毒血癥存在的時間長短不一。可以說，有的不出現(xiàn)毒血癥，而有的存在幾天，有的存在1周。甚至，最長的可持續(xù)到接種后第六周。從此可以看出來，天津株（TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后毒血癥持續(xù)最長的時間應該是在6周。

3.2 （TJM-F92）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫后抗體消長

從表2抗體檢測結(jié)果的消長規(guī)律來看，早期接種防疫疫苗后，由于體內(nèi)有母源抗體的存在，勢必會影響到接種后疫苗的效力。早期抗體陽性率會降低，降低到臨界合格值附近。這種低抗體的水平會一直維持到免疫后第四周。從第五周開始，抗體水平逐漸回升。基本上到第六周，抗體水平得到最高水平，而且會維持這一水平一直到第16周。實際上，同樣有類似的試驗報道，即沒有母源抗體的作用，接種防疫后同樣需要4個周左右的時間恢復到較高水平的抗體。為此，自這一方面來看，從免疫后第一周到第四周這段時間，抗體水平是最低的，同樣是最危險的時期。

3.3 血清中TJM-F92株疫苗病毒核酸變化與活疫苗免疫后抗體消長情況的關(guān)系

將表1與表2 的數(shù)據(jù)進行關(guān)聯(lián)性聯(lián)系，豬體內(nèi)毒血癥的嚴重化程度與抗體水平的變化呈明顯的負相關(guān)聯(lián)系。即，當體內(nèi)毒血癥水平較高時，往往生豬體內(nèi)的抗體水平較低。而隨著生豬抗體水平的逐漸高升，毒血癥的跡象反而慢慢變得削弱。從這樣的內(nèi)在關(guān)聯(lián)性比較分析，疫苗本身的毒性與抗體是相互斗爭的關(guān)系。在疫苗接種后，能刺激機體不斷生產(chǎn)抗體。產(chǎn)生抗體的同時，會不斷中和疫苗。后期，隨著免疫時間的延長，抗體免疫效力的進一步提升，疫苗毒性被逐漸被中和，而達到難以被檢測的現(xiàn)象。