液相阻斷ELlSA在口蹄疫病毒抗體水平檢測中的應(yīng)用

（吉林省蛟河市動物疫病預(yù)防控制中心，吉林蛟河 132500）

口蹄疫并在豬、牛、羊養(yǎng)殖過程中經(jīng)常出現(xiàn)，是一種具有急性、接觸性、熱性的傳染病，病發(fā)后會為養(yǎng)殖人員造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。所以近些年，我國相關(guān)研究人員也致力于免疫疫苗的研制，但通過大量的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，選擇陰性生物進(jìn)行疫苗在病毒抗體中的水平，準(zhǔn)確性更高，為此，文章選擇了不同類型陰性動物的血清進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，分析出通過液相阻斷ELISA法能夠使血清在病毒抗體中的水平顯著得到提升。

1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法分析

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本次實(shí)驗(yàn)針對某免疫地區(qū)的豬、牛、羊進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中共選擇了豬血清92份、牛血清156份、羊血清47份，實(shí)驗(yàn)中使用到的血清都來自于免疫口蹄疫地區(qū)的已免疫動物。另外還要準(zhǔn)備20份已免疫的Asia-Ⅰ型牛血清和20份已免疫的O型牛血清，免疫前要對所有血清進(jìn)行液相阻斷檢測，其中發(fā)現(xiàn)兩種血清類型的抗體水平均低于6.30%。通過感染的方式，讓其中血清類型為Asia-Ⅰ型的六頭豬和六頭羊以及四頭血清類型為O型的牛感染口蹄疫病，這些生物感染之前也需要做液相阻斷檢測，并記錄檢測性質(zhì)[1]。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次試樣主要是為了檢測血清抗體水平，所以必須使用液相阻斷檢測方法，并將檢測的40分血清樣品與NSP 3ABC-ELISA（口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體）進(jìn)行對比驗(yàn)證。

選擇20頭牛進(jìn)行口蹄疫O型液與Asia-Ⅰ型液注射。在注射后的21d進(jìn)行液相阻斷方法檢測，檢測其血清的抗體水平[2]。

選擇六頭豬和六頭羊用已受口蹄疫病毒侵害的Asia-Ⅰ型血清進(jìn)行攻毒，在攻毒一周后，使用液相阻斷方法進(jìn)行檢測，檢測其體內(nèi)的血清抗體水平；并選擇四頭牛，用已受口蹄疫病毒侵害的O型血清進(jìn)行攻毒，在攻毒一個月后用液相阻斷方法進(jìn)行檢測，檢測其體內(nèi)的血清抗體水平。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

本次實(shí)驗(yàn)過程中用液相阻斷方法檢測了295份健康豬、牛、羊生物的血清，其中僅有15份血清不屬于陰性范圍，對剩余的280份血清進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，牛羊生物的ELISA抗體水平均在16以下，豬的ELISA抗體水平在4以下，同時也表明該檢測方法主要適用陰性動物檢測[3]。經(jīng)過與NSP3ABC-ELISA對比驗(yàn)證的40份血清檢測結(jié)果與液相阻斷方法一致。

其中接種口蹄疫免疫疫苗21d后，牛的血清抗體水平監(jiān)測結(jié)果為表所示。從表中可以看出接種疫苗牛體內(nèi)血清抗體水平要高于未接種疫苗的陰性動物體內(nèi)的血清抗體水平。

通過液相阻斷檢測方法選擇的六頭陰性豬和六頭陰性羊在進(jìn)行Asia-Ⅰ型血清攻毒一周后，血清的抗體水平如表2所示；用液相阻斷檢測方法選擇的四頭牛進(jìn)行O型血清攻毒一個月后，血清的抗體水平如表2所示。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果談?wù)?/h3>

通過檢驗(yàn)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，40頭接種口蹄疫疫苗的牛在接種后21天進(jìn)行血清抗體水平檢測，結(jié)果普遍都有了升高，抗體滴度均≥128；而且通過使用不同類型血清對隱性豬、羊進(jìn)行攻毒一周后，再進(jìn)行血清抗體水平檢測發(fā)現(xiàn)，其抗體滴度也有了明顯的提升，這就說明本次檢測方法以及使用的原理對于陰性口蹄疫動物的抗體檢測準(zhǔn)確性較高。

表1 接種免疫疫苗后，O型和Asia-Ⅰ型牛血清抗體水平檢測表

表2 Asia-Ⅰ型血清攻毒的豬、羊及O型血清攻毒的牛的血清抗體水平監(jiān)測表

3 結(jié)語

綜上所述，通過檢測可以觀察出，疫苗注射以及攻毒都能驗(yàn)證液相阻斷ELISA對于檢測口蹄疫病毒抗體水平有著較高的準(zhǔn)確性，而且檢測周期短，可以廣泛地應(yīng)用到實(shí)踐中，及時發(fā)現(xiàn)口蹄疫情，及時進(jìn)行疫情控制，從而降低損失。