人細小病毒B19抗體及抗心磷脂抗體(aCL)在流產人群中的檢測價值

高 陽,宋 陽，陳 陸，李 英，翟燕紅

(首都醫科大學附屬北京婦產醫院 檢驗科，北京100026)

非人為自然狀態下出現的提前終止妊娠被稱為自然流產，世界衛生組織(WHO)一項報告指出，在全部確認的妊娠中，發生自然流產的比例超過15%。目前認為孕周<12周的流產為早期流產，孕周12-28周的流產為晚期流產。超過80%的流產發生于12周之前，隨后隨孕周增加流產率迅速降低[1]。雖然至今尚未完全明確自然流產的確切病理、生理機制，但多數學者認為其與染色體異常、母體內分泌失調、母體生殖道的異常、生殖道感染等眾多因素均有一定聯系。隨著醫學檢驗、診斷技術的提高，自然流產分子領域的研究取得一定進展[2]。有報道稱約40%的胎內死胎、自然流產婦血清能檢測到高滴度的B19IgM以及B19IgG，而這一比例在正常孕產婦中僅為3%-15%[3]。抗磷脂綜合征已被證實與稽留流產具有明顯的關系，而抗磷脂綜合征的發生與血清aCL水平具有直接的關系。aCL是一組異質自身抗體，通過對血漿蛋白-磷脂免疫復合物的直接拮抗作用以及單純對血漿蛋白起作用參與到流產過程[4]。當前國內對B19與aCL與流產人群的關系報道較為缺乏，現進一步研究人細小病毒B19抗體及抗心磷脂抗體(aCL)在流產人群中的檢測價值，為流產的預防提供理論依據，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

本研究觀察對象為2015年1月-2017年1月于我院婦產科就診的386例自然流產患者以及年齡配對的200例自愿終止妊娠的孕產婦，分別設為觀察組與對照組。觀察組最低年齡21歲，最高43歲，平均(30.23±3.43)歲；有流產史176例，無流產史210例；有分娩史75例，無分娩史311例；自然流產孕周最短3周，最長22周，平均(10.34±1.21)周；對照組最低年齡20歲，最高39歲，平均(29.43±3.65)歲；有流產史86例，無流產史114例；有分娩史35例，無分娩史165例；要求流產孕周最短4周，最長15周，平均(7.34±1.03)周；本研究取得我院倫理委員會許可。納入標準：年齡>20歲；無停經史；血清HCG檢測陽性；B超檢查子宮內有孕囊；觀察組均于孕周28周發生自然流產；對照組自愿終止妊娠；孕產婦對研究知情并簽署知情同意書；單胎妊娠；排除標準:跌倒、碰撞等其他物理因素導致的流產；合并肝病、高血壓、腎病等全身性疾病。比較兩組孕產婦年齡、流產史、分娩史差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

抽取空腹肘靜脈血4 ml，采用離心機以3 000 r/min轉速離心15 min，分吸上層血清后保存于-30℃恒溫冰箱。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測兩組孕產婦血清aCLIgG、aCLIgM水平，提取待檢血清，室溫下解凍，采用酶聯免疫吸附試驗ELISA檢測試劑盒(德國 AESKU公司)檢測aCLIgG、aCLIgM水平，根據配套的試劑及底物嚴格按照試劑盒說明書操作。根據試劑盒廠家陽性樣本單克隆抗體校驗結果進行陽性評價，aCLIgG>3 U/mL、aCLIgM>20 U/mL判定為陽性。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測B19IgG、B19IgM水平，ELISA試劑盒由德國賽潤公司提供，試劑盒包括樣本孔、標準品孔以及空白孔，標準品孔按照持續滴加濃度不同的標準品50 μl；樣本孔先加待測樣本10 μl，再加樣本稀釋液40 μl，空白孔不加，空白孔除外，樣本孔、標準品孔分別滴加100 μl已由辣根過氧化物酶(HRP)標記后的檢測抗體，反應孔采用配套封板膜做密封處理，恒溫箱溫育(37℃，60 min)后丟棄液體并用專用吸水紙吸干，每孔加滿洗滌液，洗滌液為按1∶19比例的洗滌緩沖液與蒸餾水混合物，靜置1 min后將洗滌液甩干并采用吸水紙吸干，重復此步驟5次；每孔各加入50 μl A、B底物，避光孵育(37℃，15 min)。每孔添加終止液50 μl后15 min內于450 nm波長處進行各孔的光密度值的測定，根據試劑盒說明書得出濃度。所有操作均由我院檢驗科經驗豐富的醫師完成。

1.3統計學分析

2 結果

2.1兩組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率比較

觀察組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率分別為5.08%、41.71%、52.33%、55.44%，對照組分別為6.00%、11.00%、7.00%、7.00%，觀察組均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM陽性率比較[n(%)]

2.2兩組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比較

觀察組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平分別為(1.65±0.23)U/mL、(1.76±0.27)U/mL、(4.54±0.23)U/mL、(22.43±3.32)U/mL，對照組分別為(0.67±0.12)U/mL、(0.54±0.15)U/mL、(2.34±0.15)U/mL、(6.51±1.02)U/mL，觀察組均顯著高于對照組，差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組血清B19IgG、B19IgM、aCLIgG、aCLIgM水平比較(U/mL)

3 討論

所有妊娠中自然流產比例占到15%-30%，目前大量的流行病學調查以及影響因素報道均顯示引起女性自然流產的原因較多，有報道顯示母嬰血型不合、胎盤發育不良、外傷、生殖器官疾病、內分泌功能失調、孕婦全身性疾病等均可能導致。近年來報道顯示50%-60%的自然流產與免疫因素有關，而其中約30%與抗磷脂抗體等自身免疫性抗體有關[5]。抗磷脂抗體(aPL)包括aCL、抗磷脂酰絲氨酸抗、抗磷脂酸抗體、狼瘡抗凝物(LA)等，又以LA與 aCL與流產關系最為緊密，已成成為當前關于自然流產分子領域的研究熱點[6]。有研究證實表面而抗磷脂綜合征的發生與血清aCL水平具有直接的關系，aCL可能通過對前列環素(PGI 2)合成的阻止作用導致血栓素A2 (TXA 2)/ PGI2平衡失常，而TXA 2相對增多可造成孕產婦全身以及胎盤血管痙攣缺血而引起流產[7]。

近年對 B19結構研究顯示B 19是已知的結構最簡單、體積最小的DNA病毒，屬于一類微小病毒科微小病毒屬病毒，編碼B19，能感染各年齡段人群并于人體細胞內自主復制而出現相關疾病[8]。自首次報道B19感染可引起流產以來，研究人員逐步開展了B19與妊娠的相關研究,報道顯示B19感染能夠引起血管相關病癥、造血功能障礙、中樞神經系統感染等，孕婦感染B19是造成胎兒死亡、流產、胎兒畸形、非免疫性胎兒水腫的常見原因[9]。孕婦感染B19 后30%出現母胎垂直感染，但部分孕產婦能分娩正常嬰兒，但流產、胎兒水腫、胎兒死亡等均會發生[10]。研究發現胎兒細胞處于快速分裂階段，而B19對快速分裂的細胞親嗜力較強，在感染B19后細胞內可見特征性染色質著邊現象以及核內包涵體， 電鏡下觀察細胞質、細胞核明顯變性，包涵體內發現病毒顆粒[11]。觀察組孕產婦血清B19IgG、B19IgM水平明顯高于對照組，提示B19含量增加，由于胎兒細胞受病毒的作用而變性死亡，引發一系列的功能障礙，胎兒發生缺氧、貧血，形成水腫，最終誘發流產[12]。

國內外相關報道均認為aPL屬于一組自身免疫抗體，而aPL陽性率在患者妊娠并發癥等高危妊娠群體中明顯較高[13]。國內報道aCL在所有人群中檢出陽性率為3%-7%，國內有關報道顯示育齡婦女aCL陽性率約5%-11%[14]。本研究結果顯示對照組血清aCLIgG、aCLIgM陽性率均為7.00%，觀察組這一比例分別為41.71%與52.33%，與其研究結果相符。上文提到aCL可造成胎盤血管痙攣缺血，aCL還對爭奪胎盤血管內的磷脂受體,磷脂受體缺乏引起胎盤栓塞及蛻膜血管病變。此外,有研究稱aCL 還能促進合成血小板活性因子，蛋白C 活性降低，加速血小板聚積，促進血栓形成[15]。血栓形成導致胎盤發生一系列病理改變,胎兒-胎盤單位功能受到損害,引起胎兒缺氧、缺血、死亡，最終誘發流產[16]。

綜上所述，自然流產孕產婦B19抗體、aCL抗體水平均顯著高于正常孕產婦，提示其可能參與孕產婦流產的發生，動態監測B19抗體、aCL抗體水平對自然流產的預防具有十分重要的意義。

作者簡介：高陽(1977-),女,蒙古族,主管技師,大學本科,從事檢驗工作。