PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA在口腔鱗狀細(xì)胞癌中的診斷價值及其與組織分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

董愛芬,李旭升

(河南大學(xué)附屬鄭州頤和醫(yī)院 口腔科,河南 鄭州450000)

口腔癌是臨床常見惡性腫瘤之一，以鱗狀細(xì)胞癌最為常見[1]。相關(guān)報(bào)道發(fā)現(xiàn)，每年約有10000人死于口腔癌，隨著手術(shù)、放化療技術(shù)方法的改進(jìn)與提高，口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)患者的5年生存率僅達(dá)到50%，給患者的生命造成嚴(yán)重威脅[2]。研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokiase type plasminogen activator,uPA)、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(protein tyrosine phosphatase gene,PTEN)、基質(zhì)金屬蛋白酶-7(matrix metallo proteinase,MMP-7)與鱗狀細(xì)胞癌的惡性表型具有密切聯(lián)系，它們的表達(dá)與口腔癌的發(fā)生、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后具有相關(guān)性[3,4]。本研究擬采用化學(xué)方法檢測OSCC患者和健康成年人血清HGF、血清uPA、PTEN、MMP-7表達(dá)情況，研究HGF、uPA、PTEN、MMP-7在OSCC中及正常組織中的表達(dá)差異，探究其表達(dá)水平與OSCC臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后之間的關(guān)系，為OSCC的發(fā)生機(jī)制提供理論基礎(chǔ)，同時為其早期診斷及臨床治療提供新的思路。

1 資料和方法

1.1一般資料

選取2014年6月-2017年3月在我院口腔科行手術(shù)切除的OSCC患者64例，其中男42例，女22例；年齡36-76(56.2±5.1)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者口腔出現(xiàn)腫塊、結(jié)節(jié)、斑塊、潰瘍或炎癥等臨床癥狀；(2)臨床資料完整，符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求，患者知情同意，并簽署知情同意書；(3)經(jīng)病理檢查確診為口腔癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)排除其他惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、慢性肝病、艾滋病或其他感染性疾病；(2)精神異常或智力障礙者。所有患者均無家族病史，術(shù)前未行手術(shù)、放化療治療。其中高分化18例，中低分化46例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例。血清HGF、uPA含量測定對照組來自我院健康體檢中心各項(xiàng)指標(biāo)均正常者64例，其中男性40例，女性24例；年齡37-78(57.5±5.9)歲。PTEN、MMP-7測定以同期手術(shù)切除的癌旁正常口腔粘膜組織標(biāo)本64例作為對照組。標(biāo)本切片分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色，PTEN陽性對照采用扁桃體組織，MMP-7陽性對照采用胎盤組織。

1.2方法

所有納入患者及健康查體者于清晨空腹采靜脈血5 ml，室溫凝固半小時，3 000 r/min進(jìn)行離心，10 min，取上清液于無菌EP管中，-40℃冰箱中保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清HGF、uPA含量。PTEN、MMP-7測定采用免疫組化進(jìn)行測定，4 μm石蠟切片，72℃烤片1.5 h，二甲苯脫蠟，純酒精脫苯，梯度酒精水化，檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原修復(fù)，PBS浸泡5 min，3%過氧化氫溶液室溫孵育5-10 min，滴加適當(dāng)比例一抗，37℃孵育20 min，PBS沖洗，滴加二抗，室溫孵育1 h，PBS淋洗3遍，DAB溶液顯色，在顯微鏡下觀察5-10 min，棕色為陽性顯色，蘇木素復(fù)染5 min，梯度酒精脫水(75%-85%-95%-100%)，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3觀察指標(biāo)

觀察PTEN、MMP-7在正常口腔黏膜組織及OSCC中的表達(dá)情況，觀察血清HGF、uPA在OSCC患者及健康成年人體內(nèi)的水平，觀察OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與年齡、性別、臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并對PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.4結(jié)果判定

PTEN、MMP-7陽性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)深黃色顆粒，按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占所有細(xì)胞總數(shù)的百分比進(jìn)行綜合評定：(1)染色強(qiáng)度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；(2)陽性細(xì)胞數(shù)：在高倍鏡視野下取200個癌細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為0分，11%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為1分，26%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤50%為2分，51%≤陽性細(xì)胞數(shù)≤100%為3分，綜合分?jǐn)?shù)=染色強(qiáng)度積分×陽性細(xì)胞數(shù)積分，3分及以上者為陽性，0-2分為陰性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在正常口腔黏膜組織或健康成年人及OSCC中的表達(dá)比較

OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于正常人，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PTEN在癌旁正常口腔黏膜組織中的陽性表達(dá)率為81.25%(52/64)，在OSCC中的陽性表達(dá)率為40.63%(26/64)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MMP-7在癌旁正常口腔黏膜組織中的陽性表達(dá)率為23.44%(15/64)，在OSCC中的陽性表達(dá)率為75.00%(48/64)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在正常口腔黏膜組織或健康成年人及OSCC中的表達(dá)

注：表中PTEN、MMP-7結(jié)果中，對照組64例為癌旁黏膜組織的數(shù)據(jù)。

2.2OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與臨床特征的關(guān)系

OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在不同年齡、性別方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在不同病理分級、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與臨床特征的關(guān)系

2.3PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關(guān)性分析

見表3。

表3 PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關(guān)性分析

3 討論

口腔癌是臨床常見腫瘤之一，其早期癥狀表現(xiàn)為增殖性紅斑，即紅色炎性斑塊，臨床癥狀多不明顯，不具有特異性，常易被臨床醫(yī)生忽視[5]。在以手術(shù)為主的治療模式下可提高腫瘤的局部控制率，但仍然無法徹底清除腫瘤組織，易導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。研究表明，口腔癌患者術(shù)后5年生存率僅為50%[6]。因此，早期診斷口腔癌對于提高患者術(shù)后生存率及控制腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要意義。

PTEN、MMP-7是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移研究的熱點(diǎn)。PTEN是一種抑癌基因，PTEN的缺失與細(xì)胞凋亡、遷移具有密切聯(lián)系[7]。PTEN基因突變或缺失會導(dǎo)致PTEN蛋白的陰性表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞分裂增殖，抑制細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白在子宮內(nèi)膜癌、胃癌、直腸癌等多種腫瘤組織中陰性表達(dá)[8]。MMP-7是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的一員，屬于基質(zhì)溶解素的一種，可溶解蛋白質(zhì)，并具有廣泛的底物特異性，可降解黏連蛋白、蛋白聚糖、層黏連蛋白等[9]。MMP-7在基質(zhì)細(xì)胞中低表達(dá)，而在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，其產(chǎn)物直接參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究結(jié)果顯示，PTEN在癌旁正常口腔黏膜組織中的陽性表達(dá)率(81.25%)高于在OSCC中的陽性表達(dá)率(40.63%)，MMP-7在OSCC中的陽性表達(dá)率(75.00%)高于癌旁正常口腔黏膜組織中的陽性表達(dá)率(23.44%)。表明PTEN、MMP-7可作為口腔癌的早期診斷指標(biāo)。PTEN、MMP-7表達(dá)與口腔鱗癌的臨床分期、病理分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與患者的性別、年齡均無相關(guān)性，表明PTEN、MMP-7在一定程度上可作為判斷口腔鱗癌惡性程度的指標(biāo)，對口腔鱗癌的預(yù)后具有預(yù)測價值。程媛媛等[10]研究報(bào)道MMP-7在頭頸部鱗癌中的表達(dá)與腫瘤的病理分級、臨床分期及預(yù)后密切相關(guān)，而與患者的性別、年齡、腫瘤組織類型無相關(guān)性。

HGF是一種間充質(zhì)合成的細(xì)胞生長因子，參與細(xì)胞組織器官的生長及重塑過程，其可刺激細(xì)胞生長，修復(fù)受損組織，發(fā)揮有絲分裂原的作用[11]。它還可促進(jìn)細(xì)胞的侵襲和遷移，在腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲過程中發(fā)揮重要作用。HGF可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)和分泌，促進(jìn)腫瘤血管增生。uPA是一種蛋白水解酶，其與纖溶蛋白酶結(jié)合后可溶解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，是腫瘤細(xì)胞發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移的先決條件[12]。uPA可與HGF發(fā)揮協(xié)同作用，在內(nèi)皮細(xì)胞三維結(jié)構(gòu)中感應(yīng)微毛細(xì)管的生成。研究發(fā)現(xiàn)，白血病、結(jié)直腸癌、骨髓瘤等多種腫瘤中可檢測血清uPA和HGF的升高[13]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，OSCC患者血清uPA、HGF水平明顯高于健康成年人，表明uPA、HGF水平可作為口腔癌的早期診斷指標(biāo)。Ⅲ-Ⅳ期患者血清HGF、uPA水平與Ⅰ-Ⅱ期相比有顯著性差異(P<0.05)，中低分化OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于高分化OSCC患者，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示HGF、uPA水平高低與口腔癌的臨床分期、病理分級、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為評估口腔癌臨床分期及預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示，PTEN蛋白表達(dá)與MMP-7、HGF、uPA表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，MMP-7蛋白表達(dá)與HGF、uPA水平呈正相關(guān)， HGF水平與uPA水平呈正相關(guān)。PTEN缺失可能引起MMP-7、HGF、uPA表達(dá)增加，在OSCC侵襲中發(fā)揮著重要作用。國內(nèi)外研究[14,15]表明，實(shí)體瘤患者在治療后產(chǎn)生HGF、uPA的能力明顯下降，表明HGF、uPA的變化與腫瘤進(jìn)展程度、病情變化以及治療效果密切相關(guān)。早期檢測血清HGF、uPA變化及MMP-7、PTEN蛋白表達(dá)情況有助于早期診斷口腔癌，了解患者的腫瘤進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，有助于判斷疾病的嚴(yán)重程度，對腫瘤患者療效進(jìn)行評估，也可以作為口腔癌患者手術(shù)治療及化療后的客觀評價指標(biāo)。

綜上所述，PTEN、MMP-7、HGF及uPA可作為口腔癌早期診斷的指標(biāo)，同時與口腔癌的臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，可作為評估口腔癌病情嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)。

作者簡介：董愛芬(1963-),女，本科學(xué)歷，河南鞏義人，副主任醫(yī)師，研究方向：口腔頜面外科。