腦得康口服液對腦卒中后昏迷患者8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平的影響

金延飛 范靜靜 宋德文 徐增良

(膠州市人民醫院神經外科，山東 膠州 266300)

腦卒中患者常在術后出現昏迷或意識障礙，大腦及神經功能受損，嚴重影響預后〔1〕。Apelin-13蛋白首次于牛胃分泌物中提取，在人體中樞神經系統中分布廣泛〔2〕。據報道〔3〕，Apelin-13蛋白水平與缺血所致的大腦損傷存在相關性。此外，由于腦卒中患者在血供恢復后會誘導體內氧化應激反應。異前列腺素(8-iso-PG)F2α為近年來發現的新的氧化應激反應因子，能夠反映體內氧化應激反應水平〔4〕。為進一步探討腦得康口服液恢復神經功能的機制，本研究對不同組腦卒中患者治療前后血清8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平進行監測，旨在為臨床治療提供參考。

1 對象和方法

1.1研究對象 選取2014年8月至2016年8月在膠州市人民醫院就診的腦卒中后昏迷患者102例，其中男 58例,女 44例，平均年齡(53.5 ±11.4)歲。診斷標準參照1996年中華神經學會和中華神經外科學會制定的《各類腦血管疾病診斷要點》〔5〕：(1)首次出現腦卒中；(2)從發病至入院治療時間不超過10 h；(3)術后患者間清醒后再次昏迷，或昏迷不醒；(4)無言語能力或言語不清；(5)大小便失禁；(6)腦卒中量表(NIHSS)評分為4～11分，格拉斯哥昏迷量表(GCS)評分為5～11分；(7)對本研究知情，且自愿簽署知情同意書。開始試驗前對患者一般生命體征等進行檢查，排除有嚴重顱內出血、有惡性腫瘤、嚴重血液系統疾病、感染性疾病、心力衰竭以及重大手術史患者。

采用隨機分組方法將患者分為觀察組與對照組，每組患者51例。對照組男29例，女 22 例； 年齡41～76 歲，平均(52.7 ± 7.1) 歲；NIHSS 評分(13.7 ± 1.1)分，GCS 評分(9.3 ± 2.7)分。觀察組男30例，女21 例； 年齡42 ～ 74歲，平均(54.8 ± 8.4) 歲；NIHSS 評分(13.5 ± 1.3)分，GCS 評分(9.5 ± 2.4)分。各組中性別、年齡、NIHSS 評分、GCS 評分等差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。以上研究經醫院倫理委員會批準。

1.2研究方法 兩組患者均采用術后基礎治療，主要以控制病情發展，改善腦血管循環、預防術后感染為治療目的。對照組在手術后24 h內，基礎治療外，靜脈滴注濃度為16 mg/L的鹽酸納洛酮注射液(廠家：北京華素制藥股份有限公司，批號：090021)。配置方法為：一支4.0 mg鹽酸納洛酮注射液溶解至250 ml 5%葡萄糖溶液內。1次/d，以7 d為1個療程，在患者接受4個療程治療后對各指標進行檢測。

觀察組患者在基礎治療上采用院內自制腦得康口服液進行治療。該方組成：生地30 g，黃連15 g，夏枯草15 g，赤芍30 g，當歸15 g，地龍10 g，川芎15 g，人參10 g，鉤藤15 g，石菖蒲15 g，伸筋草15 g，僵蠶15 g，冰片0.3 g。患者每日一劑，水煎至200 ml，每次服用100 ml，2次/d。以7 d為1個療程，在患者接受4個療程治療后對各指標進行檢測。

1.3評價方法 對所有患者入院時及治療4個療程后以下各指標進行評價。

(1)腦卒中治療及昏迷情況評價：采用NIHSS進行評分。主要對患者神經功能包括意識水平、凝視、面癱、上下肢體運動等的15個項目進行考察，并記錄各組患者不同時間段NIHSS評分情況。昏迷情況包括神經功能和意識損傷程度采用GCS評分評價。

(2)運動能力評價：采用 Fugl-Meyer(FMA)法〔6〕對患者治療前以的運動功能進行評估，滿分100分，對各部位運動能力進行打分，患者對測評的運動完成情況越好分值越高，上肢最高占總分66%，下肢占總分34%，其中上肢的評價包括對患者上肢反射活動、屈肌共同運動、伸肌共同運動、分離運動以及手觸腰椎運動等評價，下肢評價則是對患者膝關節、髖關節等進行下肢反射活動、屈肌共同運動、伸肌共同運動、分離運動等評價。

(3)血清指標檢測：于患者晨醒10 min取3 ml靜脈血，3 000 r/min，離心15 min，離心半徑10 cm，獲得血清，采用ELISA法測定8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白。8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白試劑盒購置于上海凱基生物科技有限公司。具體操作步驟依照說明書進行：96孔空白微孔板，加入濃度為0.8 μg/ml 的8-iso-PGF2α包被抗體(或Apelin-13蛋白)包被過夜后用0.1% PBS洗液洗滌3次；加入1% BSA封閉液封閉1 h后再用PBS清洗3次。加入標準品或樣品血清，37℃孵育30 min，PBS清洗酶標板；加入0.4 μg/ml 8-iso-PGF2α(或Apelin-13蛋白)檢測抗體,37℃孵育120 min，PBS清洗液清洗3次后，加入1∶200稀釋的鏈酶親和素的辣根過氧化物酶，37℃孵育30 min，PBS清洗液清洗3次；用四甲基聯苯胺室溫避光顯色20 min后，采用1 mol/L的硫酸終止液終止反應；于酶標儀450 nm下檢測。

1.4統計學方法 應用SPSS19.0統計軟件行t檢驗。

2 結 果

2.1兩組NIHSS及GCS評分比較 治療前兩組患者NIHSS及GCS評分比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療后兩組患者NIHSS評分明顯下降，GCS評分明顯升高，與治療前相比差異均有統計學意義(均P<0.05)。觀察組NIHSS評分明顯低于對照組，GCS評分明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組NIHSS及GCS評分比較分,n=51)

2.2兩組患者各階段運動功能評分比較 治療前兩組患者上下肢運動能力評分指標差異無統計學意義(P>0.05)。治療后兩組患者上下肢運動能力評分均明顯提高，與治療前相比差異均有統計學意義(均P<0.05)。觀察組上下肢運動能力評分明顯高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者各階段運動功能評分比較分，n=51)

2.3患者治療前后8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白變化 治療前，兩組患者血清中8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白水平差異無統計學意義(P>0.05)，經不同方法治療后，兩組8-iso-PGF2α較治療前顯著降低(P<0.05)，Apelin-13蛋白水平較治療前顯著升高(P<0.05)，且觀察組8-iso-PGF2α水平明顯低于對照組，Apelin-13蛋白水平明顯高于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組患者8-iso-PGF2α及Apelin-13蛋白變化比較

3 討 論

本研究中采用的腦得康口服液中生地為君藥，有清熱涼血、生津養陰之功效。《千金要方》中曾指出，“內有瘀血”者應以生地水煎，分三次服用。此外，方劑中川芎、僵蠶與地龍又能息風止痙，祛風止痛，行血中之氣。血通則脈通，三者合用進而提高藥材活血補氣療效〔7〕。當歸可補血活血，與川芎、僵蠶、地龍的行血中之氣相輔相成。夏枯草、鉤藤主治肝火上升或肝陽所致的頭暈目眩，二者合用可協同作用治療肝陽上亢及血熱上涌。此外，黃連的瀉火解毒、苦寒泄降之效更能有助于祛除肝火。石菖蒲主化痰濕、開竅閉，對因痰濕引起的蒙閉心竅癥效果顯著。人參為滋補藥材，除了可以安神益智，還能夠提高人體免疫力，對患者具有補氣補中之功效。故腦得康口服液全方諸藥合用，共奏活血行氣，止痙定驚，平息肝陽，開竅醒腦之效。本研究提示觀察組患者治療后腦部神經功能、運動能力及昏迷程度較治療前明顯改善，且改善程度明顯高于對照組。

進一步探討腦得康口服液作用機制后發現，腦得康口服液可能通過下調8-iso-PGF2α水平，上調Apelin-13蛋白水平發揮療效。由于8-iso-PGF2α為評價氧化應激狀態指標，當機體氧化應激反應系統受到激發時，體內8-iso-PGF2α水平就會隨之上升〔8〕。而腦卒中患者恢復血供時，其體內氧化應激系統得到激活，進而觸發了8-iso-PGF2α的生成，破壞腦部神經細胞。人參中人參皂苷能夠有效清除氧化自由基，抑制高氧化狀態及氧化應激反應，進而發揮降低8-iso-PGF2α水平的作用，有效改善腦部神經〔9〕。Apelin-13蛋白與缺血性腦卒中的發生發展關系密切。據報道〔10〕，動脈閉塞的小鼠腦室內注射不同劑量Apelin-13蛋白，小鼠腦梗死面積降低程度不同，其中腦梗死面積隨著注射劑量的提高而降低。說明Apelin-13蛋白有助于緩解腦梗死面積。Yang等〔11〕發現，腦卒中患者體內Apelin-13蛋白水平影響患者預后。Apelin-13蛋白能夠對腦卒中患者的腦部神經細胞起到保護作用；Apelin-13蛋白水平高，患者預后好。本研究顯示，自制的腦得康口服液有提高Apelin-13蛋白水平的作用。進一步證實腦得康口服液中地黃、人參、川芎中成分能夠上調室旁核小細胞Apelin受體mRNA表達，進而提高體內Apelin-13蛋白水平，發揮腦神經保護作用〔12〕。