亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性對老年冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者血漿同型半胱氨酸水平的影響

房大廣

(承德醫學院附屬醫院心臟外科，河北 石家莊 067000)

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)，主要危險因素有性別、年齡、肥胖、飲食習慣、生活環境、血脂代謝異常、血壓升高、糖尿病、遺傳因素等，近年來，大量研究發現高同型半胱氨酸(Hcy)血癥也是冠心病的獨立危險因素〔1,2〕。體內Hcy水平受多種因素影響亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態性阻礙Hcy的代謝過程，使體內Hcy水平升高〔3,4〕，補充葉酸可以安全有效地降低血漿Hcy水平〔5〕。本文對MTHFR基因多態性與冠心病及血漿Hcy水平的關系及葉酸治療對血漿Hcy水平的影響進行研究。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇徐州市中心醫院2015年1月至2016年12月老年冠心病患者200例作為冠心病組，年齡和性別與冠心病組匹配的老年健康體檢者200例作為健康對照組，冠心病組年齡(67.24±5.46)歲，男104例，女96例；對照組年齡(67.18±5.73)歲，男101例，女99例。冠心病組患者隨機分為葉酸治療組和常規治療組，每組100例。所有研究對象簽署知情同意書。納入標準：所有患者同意參與研究，資料完整；健康對照組血液生化檢查、心臟超聲、心電圖檢查結果均正常，無冠心病證據。排除標準：近期有糖皮質激素應用史，近期有抗生素及免疫抑制劑應用史，患嚴重肝腎疾病者，患惡性腫瘤者，患內分泌代謝性疾病者，患感染性疾病者，患結締組織疾病者，患免疫系統疾病者，拒絕參與研究者。試劑和儀器：MTHFR基因檢測試劑盒和血液基因組DNA提取試劑盒(美國Sigma公司)，MTHFR基因型分析軟件(Baio公司)。

1.2研究方法 冠心病組患者入院后給予硝酸酯類、抗凝、β受體阻滯劑、抗血小板及抗凝等藥物進行常規治療，其中葉酸治療組患者在常規治療的基礎上給予葉酸(5 mg/d，口服)，共治療8 w。

1.3檢測方法 冠心病患者入院第二天抽取清晨空腹血進行MTHFR基因型測定和血漿Hcy水平測定，治療8 w后抽取清晨空腹血進行血漿Hcy測定；健康對照組體檢時抽取清晨空腹血進行MTHFR基因型測定和血漿Hcy水平測定。根據血液DNA提取試劑盒說明書提取血液DNA，根據MTHFR基因檢測試劑盒采用 PCR芯片雜交法測定MTHFR基因型，采用MTHFR基因型分析軟件進行數據分析。采用熒光偏振法測定血漿Hcy水平。

1.4統計學方法 采用SPSS20.0軟件，率的比較采用χ2檢驗，兩組均數比較采用t檢驗，多組均數比較采用方差分析，組內兩兩比較采用LSD檢驗。

2 結 果

2.1MTHFR基因型 MTHFR基因型酶切后電泳結果顯示三種結果：CC基因型、CT基因型、TT基因型。CC基因型為野生純合子型，為201 bp單一條帶；CT基因型為突變雜合子基因型，為一個177 bp條帶和一個201 bp條帶；TT基因型為突變型純合子基因型，為177 bp條帶。

2.2冠心病組和健康對照組MTHFR基因多態性分布 冠心病組T等位基因、C等位基因分布和健康對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)，冠心病組T等位基因比例高于健康對照組；冠心病組TT、CT和CC基因型和健康對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)，冠心病組TT基因型比例高于對照組。見表1。

表1 冠心病組和健康對照組MTHFR等位基因和基因型分布〔n(%),n=200〕

2.3冠心病組和健康對照組血漿Hcy水平比較 冠心病組患者血漿Hcy水平〔(15.24±2.15)μmol/L〕顯著高于健康對照組〔(9.32±1.24)μmol/L，t=34.254,P=0.000〕。

2.4冠心病患者中不同性別血漿Hcy水平比較 冠心病患者中男性血漿Hcy水平〔(17.31±2.24)μmol/L〕顯著高于女性〔(14.02±2.13)μmol/L，t=23.154,P=0.000〕。

2.5冠心病患者中高血壓患者和非高血壓患者血漿Hcy水平比較 冠心病患者高血壓組血漿Hcy水平〔(17.28±2.30)μmol/L〕顯著高于非高血壓組〔(13.54±1.21)μmol/L，t=21.647,P=0.000〕。

2.6冠心病組中不同MTHFR基因型患者血漿Hcy水平比較 冠心病組不同MTHFR基因型患者血漿Hcy水平比較差異有統計學意義(P<0.05)，其中TT基因型血漿Hcy水平〔(19.24±7.02)μmol/L〕顯著高于CT基因型〔(14.93±6.64)μmol/L〕和CC基因型〔(12.54±6.02)μmol/L，P<0.05〕，CT基因型血漿Hcy水平顯著高于CC基因型(P<0.05)。

2.7葉酸治療前后不同MTHFR基因型血漿Hcy水平變化情況 除葉酸治療組TT基因型治療后血漿Hcy水平和治療前比較差異有統計學意義(P<0.05)以外，其余冠心病各亞組治療后血漿Hcy水平均較治療前略下降，但差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 葉酸治療前后不同MTHFR基因型血漿Hcy水平變化

3 討 論

Hcy是半胱氨酸和蛋氨酸代謝過程的中間產物，為含硫基氨基酸，在體內的存在形式有三種，絕大部分通過二硫鍵和血漿白蛋白結合，少數以Hcy-半胱氨酸二硫化合物或自身二聚體形式存在，極少數以游離巰基形式存在。當Hcy代謝過程受到阻礙，其生成和代謝平衡狀態被打破，體內的Hcy聚集過多，可形成高Hcy血癥。高Hcy血癥是動脈血管疾病的危險因素，Hcy水平與冠狀動脈病變嚴重程度有關，是冠心病的獨立危險因素〔6～8〕。血漿Hcy水平受多種酶、酶作用底物、輔助因子的調節，影響血漿Hcy代謝的因素很多，年齡、性別、甲狀腺功能低下等疾病、葉酸等維生素攝入不足等營養因素、遺傳因素等是影響Hcy代謝的常見因素，血漿Hcy水平升高損傷血管內皮細胞，使血管平滑肌細胞異常增生，體內的纖溶和凝血平衡狀態被打破，脂質代謝障礙，從而使心血管疾病的發生風險增加。MTHFR遺傳缺陷也阻礙Hcy代謝過程，升高血漿Hcy水平〔9，10〕。MTHFR基因型分為TT、CT、CC三種基因型，MTHFR基因多態性使MTHFR活性下降，TT和CT基因型活性下降，TT基因型的活性最低，最容易引起高Hcy血癥的形成。MTHFR基因多態性引起的高Hcy水平使機體處于血栓前狀態，從而增加冠心病的發生風險〔11，12〕。本研究發現，老年冠心病患者血漿Hcy水平升高，血漿Hcy水平和性別及高血壓有關，MTHFR基因多態性和老年冠心病及其血漿Hcy水平有關，老年冠心病患者TT基因型比例高，TT基因型冠心病患者血漿Hcy水平高于其他基因型，考慮MTHFR基因多態性可能通過升高血漿Hcy水平，從而增加冠心病的發生風險。

葉酸是降低血漿Hcy水平最有效、安全、便宜的方法，在腦梗死患者的治療中被普遍應用。食用葉酸比較安全，葉酸可以預防結直腸癌，減少冠心病的發生風險，減少唇腭裂畸形、神經管畸形、癡呆等的發病率，減少妊娠期并發癥，葉酸對血漿Hcy水平也有重要影響作用，可降低血漿Hcy水平〔13～15〕。本研究表明葉酸可以降低老年冠心病患者血漿Hcy水平，其中對TT基因型血漿Hcy水平的作用最顯著。

綜上所述，高Hcy水平是冠心病的危險因素，MTHFR基因型影響Hcy水平，TT基因型血漿Hcy水平最高，葉酸能夠降低血漿Hcy水平，其中TT基因型對葉酸的治療效果最敏感。