丁香枝枯病病原菌的分離和測定

楊小萌

(山西省水利經濟事業管理中心,山西 太原 030002)

紫丁香(SyringaoblateLindl.)，木樨科丁香屬落葉灌木或小喬木，高達5 m，枝條粗壯無毛。葉廣卵型，寬可達5 cm～10 cm，通常寬大于長；先端銳尖，基部心型或截形，全緣。圓錐花序，長6 cm～15 cm；花冠白色或紫色，先端4裂，開展；雄蕊生于花筒中部或中上部。蒴果長圓形，頂端尖，平滑。花期4月至5月，果期9月。丁香抗病性較強，常見病害有花瓣斑病、白粉病、炭疽病和枝枯病。筆者對山西農業大學校園內的紫丁香進行了調查，發現枝枯病發病率為30%.枝枯病病原菌侵染丁香后形成枯枝，枯死段有黑褐色微突起小點，感病枝與健康枝之間有明顯的分界線，感染部位以上全部枯死。此類病原菌在病部越冬，降雨多的年份易發病。

1 材料與方法

1.1 研究地概況

研究地位于山西省中部的晉中市，地理坐標東經111°25′～114°05′，北緯36°40′～38°06′.東依太行山與河北省比鄰，西傍汾河水與呂梁地區搭界，東北與陽泉相連，西北距太原25 km，東南、西南分別與長治市、臨汾市接壤。市界總長度809.2 km，東西最寬處約165 km，南北最長處約128 km.海拔1 000 m～2 500 m.屬溫帶大陸性季風氣候，年平均氣溫9.8 ℃，1月均溫-6 ℃，7月均溫23 ℃.年均降水量405 mm～573 mm，平均無霜期150 d.

1.2 標本采集

選擇山西農業大學校園內的紫丁香，用剪刀在病害部分與健康部分的交界處剪取一小段作為試驗標本。

1.3 樣品處理

采集好標本后，制作PDA培養基，同時為病原菌的分離準備平面培養基。取6個無菌培養皿，分別標計：酒精—水—升汞—無菌水1—無菌水2—無菌水3，并放入相應的溶液。依次放入滅過菌的超凈工作臺中。

1.3.1 取材

1)將標本上的病害部分切成4節，每節2 mm.

2)將標本病害部分和健康部分交界處切成8節，每節2 mm.

1.3.2 病原菌分離

取1個培養皿，將病害部分的4節標本滅菌3次后，呈對角線接種到平面培養基上，如圖1所示。之后將培養皿倒置，在培養皿背面做標記DX-1.

圖1 標本放置

將病害部分和健康部分交界處切下的8節標本用同樣的方法接種到另外2個培養基上，標記為DX-2，DX-3.

將DX-1，DX-2，DX-3置入生化培養箱中，蓋上報紙遮光，3 d后長出灰綠色絨毛狀菌落。7 d后，3個培養基中的菌絲覆蓋了整個培養基。之后對其進行純化，讓每1個培養基上只生長1種菌落。

通過培養對比，選取具有代表性的DX-2進行觀測。每天下午4點對DX-2培養皿中菌落的生長量進行測量，通過計算菌落平均直徑體現菌落的生長速度，見圖2.

圖2 菌落直徑

1.4 病原菌的觀察與測量

1.4.1 顯微標本的制作

將DX-2白色菌落中灰黑色部分挑出一小塊放到載玻片上的colley試劑中，蓋上蓋玻片，然后在標定了刻度的顯微鏡下觀察菌絲和孢子的性狀，并測量孢子的大小和菌絲的粗度。

1.4.2 病原菌孢子的測量

052028號顯微鏡目鏡測微尺在10倍物鏡下刻度為6.5 μm，40倍物鏡下刻度為1.6 μm.在40倍物鏡下測量的20個孢子的大小如表1.

表1 孢子測量數據 μm

40倍物鏡下10個菌絲菌粗的測量結果見表2.

表2 菌絲測量數據 μm

病原菌孢子長與寬、菌絲粗的平均值、標準差、標準誤的計算方法如下。

病原菌孢子長與寬的平均值分別為16.48 μm，10.7 μm，病原菌菌絲粗度的平均值為4.20 μm；病原菌孢子長與寬的標準差分別為5.2 μm，2.0 μm，病原菌菌絲粗度的標準差為0.82 μm；病原菌孢子長與寬的標準誤分別為1.2 μm，0.45 μm，病原菌菌絲粗度的標準誤為0.26 μm；病原菌孢子長與寬的變異范圍分別為11.28 μm～20.00 μm，8.70 μm～12.08 μm，病原菌菌絲粗度的變異范圍為3.33 μm～4.87 μm；孢子的大小為(11.28～20.00)μm×(8.70～12.08)μm.

2 菌種鑒定

根據《真菌鑒定手冊》記載，細交鏈孢霉的形態特征為：分生孢子梗直立，分枝或不分枝，淡欖褐色至綠褐色，有屈曲，頂端長擴大而具有多個孢子痕；分生孢子形成長達10個左右孢子所組成的孢子鏈，孢子有喙或無喙，形狀變化極大，橢圓形、卵形，有橫隔膜、縱隔膜(7.0～70.5)μm×(6.0～22.5)μm，喙大(1.0～58.5)μm×(1.5～7.5)μm.此菌的寄生性一般不強，但寄主范圍很廣。

在載玻片上觀察到的病原菌形態特征為：分生孢子梗淡欖褐色，分枝，頂端長擴大而具有多個孢子痕，形狀橢圓形、卵形，有橫隔膜，縱隔膜，孢子有喙或無喙。根據《真菌鑒定手冊》記載，可以確定分離出來的病原菌為細交鏈孢霉(AlternariatenuisNees)，屬半知菌亞門叢梗孢目交鏈孢霉屬(AlternariaNeesexWallr)，是引起枝枯病的病原菌。

3 結論與討論

筆者只對校園內的紫丁香進行了調查，不能準確反映出晉中市丁香的整體發病情況。作者所查閱的資料顯示，細交鏈孢霉(AlternariatenuisNees)很可能是引起丁香枝枯病的病原菌。但要確定還應該在健康植株上進行感病試驗。在生產實踐中，防治方法建議如下：

1)發現病枝及時剪除燒毀，以防病原菌傳播。

2)加強栽培管理，提高植株抗病能力，盡量避免各種機械創傷。剪口可用1%硫酸銅溶液消毒，再涂以160倍等量式波爾多液。

3)藥劑防治。休眠期可噴灑3～5波美度石硫合劑，生長期可噴灑160倍等量式波爾多液、70%甲基托布津可濕性粉劑500倍～1 000倍液等。著重噴灑枝干，預防病菌侵染。