三倍體歐洲山楊組織培養快繁技術研究

汪清銳，呂林芳

(山西省桑干河楊樹豐產林實驗局科技服務中心，山西 大同 037000)

三倍體歐洲山楊(TriploidPopulustremula)具有超速生性，但常規的扦插、嫁接繁殖方法容易傳染母株致病菌和病毒，不適合大規模的生產經營。組織培養技術的建立能解決營養繁殖速度慢、受季節限制的問題。筆者采集三倍體歐洲山楊根萌生的幼苗莖段作為外植體，建立三倍體歐洲山楊組織培養體系。

1 材料和方法

1.1 外植體材料

三倍體歐洲山楊無性系是歐洲山楊花粉和來自加拿大的美洲山楊花粉雜交而來的，由原山西省中德林業技術合作項目從德國漢明登山楊家系林中引進并培育。7月初，取三倍體歐洲山楊大田根萌生的幼苗莖段作為外植體材料。

1.2 消毒

由于使用的根萌生幼苗處于生長旺盛季節，所攜帶的病菌較多。所以，應對準備接種的幼苗莖段進行嚴格消毒。預處理：用軟刷在流水中清洗莖段表面約10 min，之后將莖段切成約10 cm長的小段，剪去葉子留1 cm的葉柄，以便保護芽。用80 μmL/L青霉素加入數滴吐溫80浸泡半小時，并清洗。

消毒：在70%乙醇中浸泡20 s～30 s，用無菌水清洗2次。再用0.1% HgCI2或2.5% NaCIO消毒，之后用無菌水清洗5次(每次1 min左右)。根據消毒方法不同設3個處理，見表1.

表1 不同的消毒處理方法

1.3 接種

將莖段切成約1 cm長帶芽小段，接種于誘導培養基TPTL：MS基本培養基(蔗糖濃度為30.0 g/L，瓊脂濃度為5.5 g/L，同下)+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，培養在光強度約為3 000 Lx，光周期為16 h，溫度為25 ℃的培養室中。

1.4 芽和幼苗的快繁

從外植體上誘導出的幼苗長至2 cm～3 cm時，把其切成帶節間的小段接種到增殖培養基中，根據添加植物激素不同設4個處理，見表2.

每個小段在增殖培養基上可以分化成10倍以上的幼苗，約20 d可以繼代1次，這樣在生根培養以前可以使幼苗成指數增加。

1.5 生根培養

選擇生長狀態良好、直立，長2 cm以上帶有2個～3個主要節間的幼苗用于生根培養。把選擇的幼苗接種到附加IBA的TPTR培養基(MS+0.1 mg/L IBA)上，培養15 d以上即可生根。通常生長狀態不好、彎曲、微黃的幼苗較難生根。

2 結果與討論

2.1 外植體對芽誘導成功率的影響

研究發現，外植體的老嫩會影響芽的誘導成功率。7月份采集的根萌生幼苗莖段，幼嫩部分無法徹底消毒，全部污染。半木質化莖段適宜作為外植體，可以徹底消毒而成活。根萌生的幼苗莖段經消毒后接種在TPTL上，誘導率達98%.

2.2 消毒對芽誘導成功率的影響

三倍體歐洲山楊根萌生的幼苗莖段外植體較難消毒，攜帶內生菌較多。如果用2.5% NaClO溶液進行消毒，再生植株接種后3 d內幾乎全部褐化爛掉，說明三倍體歐洲山楊對NaClO溶液極其敏感。如果用HgCl2溶液消毒，莖段污染率為75%，但沒有褐化爛掉的現象。用3 g/L的多菌靈溶液浸泡半小時后清洗數次，之后幼苗莖段全部褐化爛掉，而半木質化莖段部分成活。因此，應避免用多菌靈對幼嫩外植體進行浸泡清洗。

2.3 植物激素對芽分化的影響

將誘導出的小苗切成1 cm以上帶莖節的莖段，在不同的TPTS培養基上培養，能夠分化成芽簇。添加KT可以促進芽大量分化，是三倍體歐洲山楊高倍數增殖的主要激素因子。GA3可以有效促進莖節增長，所以，最理想的分化增殖培養基為TPTS 3，增殖系數達到15.

2.4 植物激素對生根的影響

增殖培養基TPTS 3中的莖段，在未添加NAA和IBA的情況下，發生大量生根現象。說明，三倍體歐洲山楊組培生根極其容易。生根配方中加入IBA，生根率可達90%.

3 結論

7月初取大田根萌生的幼苗，剪成莖段作為外植體材料，建立三倍體歐洲山楊組織培養快繁體系。將幼苗的莖段進行嚴格消毒后再接種，可以取得理想結果。理想誘導培養基為：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，試管苗增殖采用配方MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L GA3，增殖系數為15，生根配方采用MS+0.1 mg/L IBA.本研究結果可為三倍體歐洲山楊根萌生幼苗的組織培養墊定技術基礎。