E—cadherin和Claudin—7在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關系

古麗那爾·阿布拉江　桑偉　王雯

[摘要] 目的 探討E-鈣黏蛋白（E-cadherin）和Claudin-7在宮頸鱗狀細胞癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關系。 方法 以2016年8月～2017年8月新疆醫科大學第一附屬醫院采集的正常宮頸上皮組織（對照組，n=30）、重度宮頸上皮內瘤變組織（HSIL組，n=28）和宮頸鱗狀細胞癌組織（CA組，n=80）為研究樣本，采用免疫組織化學方法檢測三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達情況，分析兩者與宮頸鱗狀細胞癌病理特征的關系，同時對兩者的表達水平進行相關性分析。 結果HSIL組、CA組E-cadherin蛋白陽性表達率明顯低于對照組，且HSIL組明顯高于CA組（P < 0.05）；HSIL組、CA組Claudin-7蛋白陽性表達率明顯低于對照組，HSIL組明顯低CA組（P < 0.05）；E-cadherin蛋白陽性表達率與宮頸鱗狀細胞癌腫瘤大小、淋巴結轉移呈負相關（P < 0.05），與組織分化程度呈正相關（P < 0.05），Claudin-7蛋白陽性表達率與淋巴結轉移呈正相關（P < 0.05），與組織分化程度、臨床分期呈負相關（P < 0.05）；Claudin-7蛋白與E-cadherin蛋白表達呈負相關（P < 0.05）。 結論 宮頸鱗狀細胞癌組織中E-cadherin和Claudin-7蛋白陽性表達率分別明顯降低和升高，兩者陽性表達率與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征緊密相關。

[關鍵詞] 宮頸鱗狀細胞癌；E-鈣黏蛋白；Claudin-7；病理特征；相關性

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）04（b）-0095-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of E-cadherin and Claudin-7 in cervical squamous cell carcinoma and its relationship with clinicopathological features. Methods The normal cervical epithelial tissues （control group， n=30）， high squamous intraepithelial neoplasias （HSIL group， n=28） and cervical squamous cell carcinomas （CA group， n=80） in the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from August 2016 to August 2017 were selected as the research samples. The expression of E-cadherin and Claudin-7 protein in the three groups was detected by the immunohistochemical method. The relationship between them and pathological characteristics of cervical squamous cell carcinoma was analyzed， and the correlation between the expression levels of the two was also analyzed. Results The positive expression rate of E-cadherin protein was significantly higher in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly higher in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive rate of Claudin-7 protein was significantly lower in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly lower in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive expression rate of E-cadherin protein was negatively correlated with the size and lymph node metastasis of cervical squamous cell carcinoma （P < 0.05）， and positively correlated with the differentiation degree （P < 0.05）. The positive expression rate of Claudin-7 protein was significantly positively correlated with lymph node metastasis （P < 0.05）， and negatively correlated with the differentiation degree and clinical stage （P < 0.05）. The expression of Claudin-7 protein was negatively correlated with the expression of E-cadherin protein （P < 0.05）. Conclusion The positive expression rates of E-cadherin and Claudin-7 protein in cervical squamous cell carcinoma are significantly decreased and increased， respectively. The positive expression rate of them is closely related to the clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma.

[Key words] Cervical squamous cell carcinoma； E-cadherin； Claudin-7； Pathological features； Correlation

宮頸癌為全球范圍內女性中常見惡性腫瘤之一，目前對其病因尚未完全明確，多認為與早孕、早產、多育、吸煙等因素有關[1]。隨醫學技術的不斷更新及普及工作的不斷開展，雖宮頸癌早期篩查和治療日益被重視，但宮頸癌患病率仍居高不下[2]。宮頸癌約有80%為宮頸鱗癌[3]，臨床有必要積極探究靈敏的腫瘤標志物對宮頸鱗狀細胞癌發生、進展進行有效評估。早期有學者研究表明E-鈣黏蛋白（E-cadherin）可有效評估腫瘤細胞侵襲及遷移能力[4]，而臨床實踐表明Claudin-7在癌組織中異常表達[5]，因而筆者推測E-cadherin和Claudin-7表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征有一定關系，并與于本文展開臨床對照性研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2016年8月～2017年8月新疆醫科大學第一附屬醫院（以下簡稱“我院”）病理科采集的正常宮頸上皮組織（對照組，n=30）、重度宮頸上皮內瘤變組織（HSIL組，n=28）和宮頸鱗狀細胞癌組織（CA組，n=80）為研究樣本；對照組30例，均取自在我院因婦科良性疾病手術治療者，年齡35～58歲，平均（46.15±3.16）歲；HSIL組，組織標本取自于我院接受手術治療的重度宮頸上皮內瘤變患者，年齡36～60歲，平均（47.02±3.14）歲；CA組80例患者納入研究前均未接受任何化療及其他方式治療者，年齡37～60歲，平均（48.01±3.51）歲，國際婦產科聯盟標準分期：Ⅰ、Ⅱ期各65、15例，組織分化程度：高、中、低分化各8、45、27例。患者納入排除標準：①經術后病理組織學檢查確診；②未合并其他惡性腫瘤；③非妊娠期及哺乳期女性。本研究符合赫爾辛基宣言，患者及其家屬均知情同意并自愿簽署書面知情同意書，同時本研究征得我院醫學倫理委員會批準。

1.2 研究方法

①組織標本采集：納入研究的組織標本均為手術切除后，經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，3 μm厚連續切片標本。②主要試劑：濃縮型單抗人Claudin-7單克隆抗體（編號：CCM-0880，稀釋比例為1︰60）及即用型單抗人E-cadherin單克隆抗體（編號：CEM-0023）均由賽諾特生物技術股份公司提供。Dako REALTM EnVisionTM Detection System，Peroxidase/DAB+，Rabbit/Mouse檢測試劑盒由DAKO公司提供。③檢測方法：采用免疫組織化學EnVision二步法檢測，陰性對照采用PBS取代一抗，陽性對照則選用已知陽性片。組織切片經二甲苯、梯度乙醇脫蠟至水后，采用檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復，滴加一抗，4℃孵育過夜后PBS洗滌，滴加通用型二抗，37℃孵育30 min，DAB顯色約5～10 min，蘇木素復染，鹽酸酒精分化，藍化，最后進行脫水、透明，中性樹膠封片及鏡檢。③結果判斷，E-cadherin陽性：定位于細胞膜和胞質，并呈棕黃色；Claudin-7陽性：定位于細胞膜和細胞質之中，呈現棕黃色細小顆，免疫組化染色結果由我科兩名資深病理診斷醫師（在不知病例資料前提下）盲法閱片判斷，每張切片結果均在高倍鏡（×400）下至少觀察到5個不重復視野下判斷；陽性細胞數≤10%記1分，>10%～50%記2分，>50%～75%記3分，>75%記4分；染色強度評分：無色記0分，淡色記1分，棕黃色記2分，棕褐記3分；按照乘積原則，0～2分記為“-”，3～4分記為“+”，6～8分記為“++”，9～12分記為“+++”。結果判定：分數≥3分為陽性，<3分為陰性。

1.3 觀察指標

①三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達情況；②E-cadherin、Claudin-7蛋白表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系；③宮頸鱗狀細胞癌組織中E-cadherin、Claudin-7蛋白表達的相關性分析。

1.4 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，從正態分布各變量間相關性采用Spearman相關分析，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組E-cadherin、Claudin-7蛋白表達情況

HSIL組、CA組E-cadherin蛋白陽性表達率明顯低于對照組，HSIL組明顯高于CA組（χ2=5.718、30.714、11.703，均P < 0.05）；HSIL組、CA組Claudin-7蛋白陽性表達率明顯高于對照組，且HSIL組明顯低于CA組（χ2=6.116、41.423、16.512，均P < 0.05）。見表1、圖1～2（封四）。

2.2 E-cadherin、Claudin-7蛋白表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

腫瘤大小<4 cm、組織分化為高中分化、無淋巴結轉移的宮頸鱗狀細胞癌組織中E-cadherin陽性表達率明顯高于腫瘤大小≥4 cm、組織分化為低分化、有淋巴結轉移者（P < 0.05）；臨床分期為Ⅰ期、組織分化程度為低分化、有淋巴結轉移宮頸鱗狀細胞癌組織中Claudin-7陽性表達率明顯高Ⅱ期、高中分化、無淋巴結轉移者（P < 0.05）；E-cadherin陽性表達率與宮頸鱗狀細胞癌腫瘤大小、淋巴結轉移呈負相關（r=-0.421、 -0.428，P < 0.05），與組織分化程度呈正相關（r=0.405， P < 0.05），Claudin-7蛋白陽性表達率與淋巴結轉移呈正相關（r=0.435，P < 0.05），與組織分化程度、臨床分期呈負相關（r=-0.413、-0.398，P < 0.05）。

3 討論

流行病學數據提示全球每年約有50萬例新發宮頸癌患者，且其患病人群日趨年輕化[6]，現代醫學表明從正常宮頸細胞發展為癌細胞常需經歷相當長的癌前病變期，而早期宮頸癌患者及時診治后的存活率高達90%[7]。隨人們對宮頸癌認知不斷深入，普遍認為宮頸癌屬于一種多基因疾病，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）持續感染被認為是宮頸癌發生發展的關鍵，HPV感染正常上皮細胞中，上皮細胞表型逐漸消失，一些間質細胞表型發生EMT現象，E-cadherin是其中重要一員，早期臨床研究證實其在腫瘤形成、侵襲及轉移中發揮重要作用[8]；臨床病理學研究表明癌細胞侵襲轉移，需先從原癌灶中脫離出來，改變細胞間黏附結構功能使惡性腫瘤細胞脫離原發組織，Claudin-7有潛在限制癌細胞營養及生長因子供應，癌細胞失去緊密連接蛋白在膜上的定位是腫瘤發展的關鍵[9-10]。

陳小燕等[11]研究表明宮頸鱗癌組織中E-cadherin蛋白陽性表達率與宮頸鱗癌惡性臨床病理特征有明顯相關性；李燕[12]研究則提示Claudin-1、3、4、7與浸潤型鱗狀細胞癌臨床病理特征有明顯相關性。而本研究結果發現：對照組E-cadherin蛋白陽性表達率較HSIL組、CA組顯著高，對照組Claudin-7蛋白陽性表達率較HSIL組、CA組明顯低，E-cadherin陽性表達率與宮頸鱗狀細胞癌腫瘤大小、淋巴結轉移呈明顯負相關，與組織分化程度呈明顯正相關，Claudin-7陽性表達率與淋巴結轉移呈正相關，與組織分化程度、臨床分期呈負相關，Claudin-7與E-cadherin表達呈負相關，提示E-cadherin、Claudin-7表達與宮頸鱗狀細胞癌臨床病理特征密切相關[13，9]。E-cadherin屬于一種典型鈣依賴型細胞表面跨膜糖蛋白，由人類染色體16q 22上相關基因編碼，主要負責上皮細胞和細胞間黏附功能，在組織形態形成及胚胎發育和細胞轉歸中發揮重要作用[14]，已有研究提示E-cadherin為抑癌基因，其通過加強細胞間黏附及抑制細胞增殖兩方面發揮抑癌及抑癌細胞轉移作用，因而與宮頸鱗狀細胞癌疾病病理過程密切相關[15]。Claudin-7屬于一種跨膜蛋白，主要表達于上皮細胞相鄰面的胞膜上，存在組織特異性，在宮頸鱗狀細胞疾病進展惡化中發揮作用可能與其參與細胞分化和其他因子調控有一定關系[16]，Claudin-7在宮頸鱗狀細胞癌組織中陽性表達率明顯升高，其陽性表達率升高導致細胞間信號傳導異常，從而促進腫瘤的增殖及遷移[17]，因而推測Claudin-7蛋白陽性表達率與淋巴結轉移、組織分化程度、臨床分期有明顯相關性[18]。本研究還發現宮頸鱗狀細胞癌組織中Claudin-7蛋白與E-cadherin蛋白表達呈負相關，提示Claudin-7功能異常會導致E-cadherin蛋白表達減少，從而增加宮頸鱗狀細胞癌侵襲性，加劇腫瘤進展，這與既往國外學者研究的觀點相似[19]。

綜上所述，宮頸鱗狀細胞癌組織中E-cadherin、Claudin-7蛋白陽性表達率可較好預測宮頸鱗狀細胞癌早期分化程度、淋巴結轉移、腫瘤大小等情況，兩者有望成為宮頸鱗狀細胞癌早期診斷的靈敏指標。

[參考文獻]

[1] 張珊，官海漣，丁錦紅，等.宮頸癌及其癌前病變的分子標志物臨床應用進展[J].實用婦產科雜志，2016，32（7）：503-506.

[2] 張弦，李雙飛，何珊茹.宮頸癌和乳腺癌篩查結果分析及對社區工作的指導意義[J].中華腫瘤防治雜志，2016，16（s1）：3-4.

[3] 楊敏，徐景杰，王曉紅.宮頸鱗癌中CXCR4的表達變化與宮頸鱗癌細胞侵襲性關系[J].現代預防醫學，2015，42（13）：2490-2492.

[4] 田峰，方瑞忠，徐建.基質金屬蛋白酶-2和E-鈣黏蛋白在胰腺癌組織中的表達及臨床意義[J].中國現代醫學雜志，2016，26（9）：34-38.

[5] 姜琳娜，路三軍，魏娉，等.Slug和Claudin-7在食管癌中的表達及其對腫瘤生物學行為的影響[J].現代醫學，2016， 18（5）：661-665.

[6] 周暉，林仲秋.美國國立綜合癌癥網絡“2016宮頸癌臨床實踐指南”解讀[J].中國實用婦科與產科雜志，2016， 32（3）：223-230.

[7] 喬友林.適宜發展中國家與地區的宮頸癌快速篩查技術的研究及意義[J].中華預防醫學雜志，2015，49（2）：110-111.

[8] 蘇莉，林靜，周輝蓉，等.KLF4、Ki-67和E-cadherin在宮頸鱗狀細胞癌中的表達及意義[J].診斷病理學雜志，2016， 23（2）：110-113.

[9] Zhu J，Wang R，Cao H，et al. Expression of claudin-5，-7，-8 and -9 in cervical carcinoma tissues and adjacent non-neoplastic tissues [J]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8（8）：9479-9486.

[10] Jakab C，Rusvai M，Gálfi P，et al. Expression of claudin-7 molecule in canine perianal glandtumours [J]. Acta Vet？鄄erinaria Brno，2010，79（1）：127-133.

[11] 陳小燕，劉琴，蘭康云，等.Srx與E-cadherin在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].免疫學雜志，2015，18（12）：1067-1071.

[12] 李燕.Claudin-1，3，4，7在宮頸上皮內瘤變和浸潤性鱗狀細胞癌中的表達及意義[D].合肥：安徽醫科大學，2013.

[13] Van de PG，Kristensen GB，Baekelandt M，et al. E-cad？鄄herin and catenins in early squamous cervical carcinoma [J]. Gynecol Oncol，2004，94（2）：521-527.

[14] 鄧秀文，鄒文.E-cadherin和Vimentin表達與早期宮頸癌臨床病理特征及預后的關系[J].臨床腫瘤學雜志，2016， 21（2）：160-165.

[15] Jiang Y，Ren W，Wang W，et al. Inhibitor of ？魴2-catenin and TCF （ICAT） promotes cervical cancer growth and meta？鄄stasis by disrupting E-cadherin/？魴2-catenin complex [J]. Oncology Reports，2017，38（5）：2597-2597.

[16] 李銳，張道榮，蔡存偉，等.Claudin-7與Slug在肺鱗癌和腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國肺癌雜志，2011， 14（6）：492-496.

[17] 許暢，李文晶，丁磊.Claudin-7在腫瘤干細胞中的研究進展[J].醫學綜述，2017，23（17）：3373-3377.

[18] Cunniffe C，Brankin B，Lambkin H，et al. The role of cla？鄄udin-1 and claudin-7 in cervical tumorigenesis [J]. Ant？鄄icancer Research，2014，34（6）：2851-2857.

[19] Lioni M，Brafford P，Andl C，et al. Dysregulation of Claudin-7 leads to loss of E-cadherin expression and the increased invasion of esophageal squamous cell carcinoma cells [J]. Am J Pathol，2007，170（2）：709-721.

（收稿日期：2018-01-24 本文編輯：任 念）