血清β2微球蛋白、視黃醇結合蛋白、胱抑素C、中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白及基質金屬蛋白酶2多指標聯合檢測在糖尿病腎病患者中的價值

趙亞妮, 王　君, 趙　棉

(1. 陜西省西安第五醫院 檢驗科, 陜西 西安, 710082; 2. 陜西省西安市第一醫院 檢驗科, 陜西 西安, 710002)

糖尿病腎病(DN)是2型糖尿病(T2DM)患者最為常見的合并癥之一，僅次于腎小球腎炎，在終末期腎病中位居第2位，給患者的健康與生活質量帶來了嚴重的影響[1]。由于DN存在復雜的代謝紊亂，若進展為終末期腎臟病，往往比其他腎病的治療更為棘手。及時通過有效的措施明確診斷并治療DN, 對延緩疾病進展具有重要的意義[2-3]。目前，尿微量白蛋白是診斷與評估DN預后的主要指標，然而該指標易受發熱、尿路感染等多種因素的影響，穩定性較差[4]。本研究分析血清β2微球蛋白(β2-MG)、視黃醇結合蛋白(RBP)、胱抑素C(Cys C)、中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白(NGAL)及基質金屬蛋白酶2(MMP2)多指標聯合檢測對DN的診斷價值，現將結果報告如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

選擇2015年10月—2017年10月本院收治的260例T2DM患者，根據尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)將其分為DN組(UACR 30～<300 μg/mg)112例與單純T2DM組(UACR<30 μg/mg)148例。選擇同期于本院進行體驗的130例健康對象作為對照組。DN組男60例，女52例; 年齡38～72歲，平均年齡(58.5±5.3)歲。單純T2DM組男76例，女72例; 年齡40～74歲，平均年齡(58.2±4.8)歲。對照組男70例，女60例; 年齡37～75歲，平均年齡(58.4±4.2)歲。本研究經醫院倫理委員會批準，且研究內容告知研究對象知情同意，已簽署知情同意書。2組性別、年齡構成比比較，差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準: 符合世界衛生組織(WHO)制定的相關標準。排除標準: 患有嚴重心血管疾病; 肝、腎功能障礙; 內分泌系統、血液系統與泌尿系統疾病; 伴有急慢性感染; 其他腎臟疾病。

1.2　方法

3組研究對象在晨起空腹狀態下采集靜脈血3 mL, 放置30 min后，以3 000轉/min的速度離心10 min, 分離血清，放置在-20 ℃的冰箱內存儲。通過免疫比濁法檢測RBP(試劑盒由上海盈公生物技術有限公司提供)、Cys C(試劑盒由武漢明德生物科技股份有限公司提供)與β2-MG(試劑盒由南京建成生物工程研究所提供)，膠乳增加免疫比濁法檢測NGAL(試劑盒由上海紀寧生物有限公司提供); 通過全自動酶標儀ELISA法檢測MMP-2(試劑盒由上海和序生物科技有限公司提供); 質控品與校準品均與試劑配套，具體操作方法嚴格按照說明書執行。

1.3　觀察指標

① 比較3組研究對象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平。② 比較DN組血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2與聯合檢測的陽性率。其中MMP-2低于正常值范圍為陽性, β2-MG、RBP、Cys C、NGAL檢測高于正常參考范圍為陽性, β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2中任意1項陽性為聯合檢測陽性。③ 分析UACR與β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2的相關性。

1.4　統計學分析

2　結　果

2.1　3組研究對象血清β2-MG、RBP、Cys C、 NGAL及MMP-2水平對比

3組研究對象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平對比有顯著差異，即DN組血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL>單純T2DM組>對照組(P<0.05), MMP-2<單純T2DM組<對照組(P<0.05)。見表1。

表1　3組研究對象血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2水平對比

與對照組對比, *P<0.05; 與單純T2DM組對比, #P<0.05。

2.2　DN組血清β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、 MMP-2與聯合檢測的陽性率對比

DN組聯合檢測陽性率為88.39%(99/112), 均顯著高于單純β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2陽性率62.50%(70/112)、60.71%(68/112)、59.82%(67/112)、60.71%(68/112)、63.39%(71/112) (P<0.05)。

2.3　UACR與β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及 MMP-2的相關性

UACR與β2-MG、RBP、Cys C、NGAL呈正相關性(r=-0.575,P<0.01); UACR與MMP-2呈負相關性(r=-0.420,P<0.01)。

3　討　論

DN是糖尿病患者死亡的重要原因之一，該病具有發病隱匿、進展速度慢等特點，若能及時采取有效的診療措施可以延緩甚至逆轉疾病[5]。有研究[6]指出，由于早期DN無典型的癥狀表現，尿微量清蛋白排泄率(UAER )與血清肌酐(Scr)均處于正常水平，而當UAER與SCr濃度升高時，腎小球濾過率往往已降至正常值的50%, 所以傳統指標難以監測早期腎功能的變化，且易受到飲食、運動、感染、發熱等多因素的影響?，F階段，腎活檢是診斷腎臟病變的金標準，然而此項技術不僅操作繁瑣，且具有較大的創傷性，無法作為臨床篩查手段。此外，若DN患者已出現明顯的臨床癥狀與持續蛋白尿，說明其腎功能損傷已無法逆轉，僅能延續病情進展[7]。因此，盡早采取有效的診斷與治療措施改善DN患者的預后，降低終末期腎衰竭的發生率與死亡率十分必要。

NGAL屬于一種脂質運載蛋白，廣泛分布于人體組織，其中在中性粒細胞中的表達最高，并在腎臟、胸腺、支氣管也有所表達[8]。NGAL與機體免疫應答、炎癥等具有密切的相關性，可以有效評價早期腎損傷程度。有學者[9]發現, NGAL通常在遠側腎單位與近端小管表達，并具有鐵轉運作用，調控腎小管上皮細胞與腎間充質細胞的轉化與生長，誘導已損傷腎臟的腎小管上皮細胞成熟與再生，繼而改善腎功能。所以，在腎臟發生病變與病情進展的過程中，機體血清內NGAL值會出現明顯變化。本研究結果顯示, DN組血清NGAL>單純T2DM組>對照組(P<0.05)?？梢? DN患者血清NGAL與腎損傷程度密切相關。在炎癥的刺激下，中性粒細胞可釋放出大量的NGAL, 并誘導機體肝臟過量表達NGAL, 而已出現的腎病必然破壞了腎小球濾過率，減少對NGAL的清除，致使血清NGAL水平增高。

RBP是肝細胞粗面內質網中的一種分子蛋白，當其與受體結合后，主要經腎小球濾過，并由腎小管降解與吸收[10]。腎臟損傷后，腎小球濾過能力也隨之受損，導致血清內RBP顯著增高。本研究中, DN組血清RBP >單純T2DM組>對照組，差異有統計學意義(P<0.05)?？梢姡錜BP也是評價腎臟功能的有效指標之一。

Cys C屬于非糖化小分子蛋白，其分子較小，可以自由通過腎小球濾過，之后由近曲小管重吸收與代謝，所以腎臟是清除Cys C的重要器官。然而，當腎小球損傷時，血液內Cys C可持續高水平表達，并隨著腎病的加重，其表達也會逐漸增加[11]。因此, Cys C是評價腎小球功能的重要內源性指標。本研究結果顯示, DN組血清Cys C>單純T2DM組>對照組(P<0.05)?？梢? Cys C變化可以有效反映出腎小球濾過率，對DN的診斷與治療具有重要的指導意義。

β2-MG是機體白細胞抗原分子中的β輕鏈，具有較小的分子量，合成速度平穩，可以自由通過腎小球濾過膜，且經腎小球濾過的β2-MG幾乎完全被吸收，所以其濃度可以有效反映腎小管吸收功能與腎小球濾過功能[12]。本研究結果顯示, DN組血清β2-MG >單純T2DM組>對照組(P<0.05)。DN患者糖原反應陽性物質沉著與腎小球基底膜增厚，繼而誘發腎小球濾過能力損傷，所以血清內β2-MG水平增高，可說明腎小管重吸收障礙。

MMP-2是一種活性較強的基質金屬酶，主要用于調控基膜的新陳代謝，當其異常表達時，可以影響機體內的Ⅳ型膠原降解與表達，導致細胞外基質的降解、腎小管間質纖維化與腎小球硬化。有研究[13]發現, MMP-2異常表達可以誘導腎小球系膜細胞向炎癥表型轉變，且加快了增殖速度，致使部分細胞外基質沉積，最終造成腎小球硬化。本研究顯示，DN組MMP-2<單純T2DM組<對照組(P<0.05)?？梢? MMP-2能夠作為DN的有效診斷指標，隨著UACR的升高, MMP-2明顯下降，這與以往研究結果相符[14-15]。

本研究結果顯示, DN組聯合檢測陽性率88.39%, 均顯著高于單純β2-MG、RBP、Cys C、NGAL、MMP-2陽性率62.50%、60.71%、59.82%、60.71%、63.39%(P<0.05)。UACR與β2-MG、RBP、Cys C、NGAL呈正相關性(P<0.01), 與MMP-2呈負相關性(P<0.01)?？梢? DN病情進展與β2-MG、RBP、Cys C、NGAL及MMP-2密切相關，且聯合檢測的效果明顯優于單項檢測，可以有效提高檢測的準確性，為臨床診療工作提供可靠的依據。