HPLC法測定富馬酸喹硫平緩釋片有關物質(zhì)

（上海交通大學藥學院 上海 200240）

胡小雪 郭圣榮（通訊作者）

1.儀器與試藥

Waters 2695 HPLC system/ Empower 3 software；

甲醇、乙腈、磷酸氫二鉀均為色譜純，磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、過氧化氫均為分析純；

富馬酸喹硫平系統(tǒng)適應性對照品；富馬酸喹硫平對照品；富馬酸喹硫平API；富馬酸喹硫平緩釋片。

2.方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱 Inertsil ODS-2 C8-3（4.6mm×150mm，5μm）；以甲醇-乙腈（33∶67）為流動相A，以0.01mol·L-1磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.5）-流動相A（90∶10）為流動相B，流速為1.0mL·min-1，線性梯度洗脫程序見表1；檢測波長為225nm；柱溫為40℃；進樣體積為20μL。

表1 HPLC法測定富馬酸喹硫平緩釋片有關物質(zhì)線性洗脫程序

2.2 溶液的制備

2.2.1 稀釋液：流動相A-流動相B（50∶50）。

2.2.2 供試品溶液：精密稱取富馬酸喹硫平緩釋片研磨的細粉適量（相當于喹硫平25mg）于100mL量瓶，加入稀釋液超聲10分鐘，再加入稀釋液至刻度，混勻后過濾即可。

2.2.3 對照品溶液：精密稱取富馬酸喹硫平對照品適量（相當于喹硫平25mg）于100mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密移取5.0mL于100mL量瓶中，加稀釋液至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密移取該儲備液2.0mL于50mL量瓶中，加稀釋液至刻度，搖勻即可。

2.2.4 系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取富馬酸喹硫平系統(tǒng)適用性對照品約10mg于50mL量瓶中，加稀釋液溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗與方法專屬性考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗 取稀釋液、空白輔料溶液、系統(tǒng)適用性溶液、對照品溶液及樣品溶液注入液相色譜儀進行測定。結果表明，稀釋液和空白輔料溶液在喹硫平及已知雜質(zhì)保留時間處無色譜峰檢出，系統(tǒng)適應性溶液中喹硫平峰的拖尾因子小于1.5，喹硫平與相鄰雜質(zhì)的分離度為大于2，系統(tǒng)適應性符合要求。

2.3.2 強制破壞試驗 取富馬酸喹硫平緩釋片、制備該片劑的原料藥及其空白輔料，分別進行如下處理：（1）加入稀釋液適量，超聲，加入1N鹽酸溶液5mL，于80℃條件下放置24小時，堿中和；（2）加入稀釋液適量，超聲，加入2N氫氧化鈉溶液5mL，于80℃條件下放置24小時，酸中和；（3）加入5mL3% H2O2溶液，于室溫下放置0.5小時；（4）高溫破壞（105℃，24小時）；（5）高濕破壞（92.5%RH，10天）；（6）光照破壞（4500±500 Lux，10天）。按照“2.2.2”項下供試品溶液的配制方法配制溶液并進行測定。

結果顯示，空白輔料經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、高濕及光照破壞后均未產(chǎn)生對主成分及其雜質(zhì)測定有影響的色譜峰；原料藥及制劑破壞實驗結果基本一致，經(jīng)堿、高濕和光照破壞后未產(chǎn)生雜質(zhì)，但經(jīng)酸、氧化及高溫破壞后，均產(chǎn)生少量降解產(chǎn)物，說明本品對酸、氧化及高溫均不穩(wěn)定，對堿、高濕和光照穩(wěn)定。降解后的產(chǎn)物與主成分峰均能達到有效分離，且各雜質(zhì)之間分離情況良好，主峰純度均達到1.000。

以上實驗結果證明，該色譜條件專屬性強，適合本品有關物質(zhì)的檢查。

2.4 方法精密度

取本品的細粉適量（約相當于喹硫平25mg），照“2.2.2”項下供試品溶液制備方法，平行制備6份。精密量取10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算6份樣品中喹硫平的含量的相對標準偏差（RSD）。

結果6份樣品中喹硫平含量的RSD為2.7%，由此表明該方法精密度良好。

2.5 溶液穩(wěn)定性

將富馬酸喹硫平對照品溶液和樣品溶液在室溫條件下放置，并在第0d、1d、2d、4d分別取樣進行測定，記錄色譜圖，結果見表2和表3。

表2 樣品溶液穩(wěn)定性試驗結果

表3 對照品溶液穩(wěn)定性試驗結果

由上述結果可見，對照品溶液和樣品溶液在放置4天內(nèi)測得的主峰峰面積無明顯變化，樣品溶液中最大單雜及總雜量也無明顯變化，表明該對照品溶液和樣品溶液穩(wěn)定性良好。

3.討論

對USP monograph[3]的流動相進行調(diào)整，將有機相的乙腈換為乙腈與甲醇的混合，這樣可降低流體的粘度，減輕柱壓對柱子的損耗，同時調(diào)整了緩沖鹽的pH值，優(yōu)化梯度，最終使各雜質(zhì)均達到了理想的分離效果。

4.結論

富馬酸喹硫平緩釋片在新版藥典（2015版）中無有關物質(zhì)檢查方法，經(jīng)驗證，本測定方法簡便、準確、專屬性強、重現(xiàn)性好，可用于富馬酸喹硫平緩釋片中有關物質(zhì)的測定。

[1]戴婕,李芳芳.富馬酸喹硫平片人體生物等效性研究[J].中國現(xiàn)代應用藥學,2013,30（6）：641.

[2]中國藥典2015年版.正文：富馬酸喹硫平.