益生菌輔助治療對肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒腸黏膜通透性及內(nèi)毒素血癥的影響

馬姝麗，李小芹

0 引言

肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎是嬰兒肝炎綜合征的主要類型，臨床表現(xiàn)為肝大、黃疸、膽汁量少、糞便顏色變淺及肝功能損害，治療較困難，是嬰兒殘疾、死亡的重要原因[1]。該病病因極其復(fù)雜，與遺傳、自身免疫性肝病、感染、中毒等因素有關(guān)，隨著我國肝活檢技術(shù)和分子生物學(xué)的發(fā)展，其確診率不斷提高。該病患兒存在腸道菌群失調(diào)，故有學(xué)者主張益生菌輔助治療[2]。

為進一步探討益生菌輔助治療對肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒腸黏膜通透性及內(nèi)毒素血癥的影響，本研究對我院收治的該病患兒實施益生菌輔助治療，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年4月至2017年4月我院收治的108例嬰兒肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒為研究對象，納入標準：①符合《嬰兒肝病綜合征診治修訂方案》中肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎診斷標準[3]；②血清總膽紅素(TBIL)為85.5 pmol/L及以上；③大便淺黃色或白色，無腹瀉；④肝大≥2 cm或質(zhì)地改變；⑤血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)升高；⑥本研究經(jīng)我院倫理委員會批準；⑦患兒家屬同意本研究治療方案，簽署同意書。排除標準：①先天性膽總管囊腫、膽道閉鎖或膽管擴張等遺傳性疾病；②合并肝外疾病或腎臟疾病者；③有輸血、手術(shù)或腸外營養(yǎng)史者；④近4周內(nèi)服用過微生態(tài)制劑、抗生素等藥物者；⑤合并原發(fā)性肝癌、上消化道大出血、肝性腦病等嚴重并發(fā)癥者；⑥伴有嚴重感染者；⑦合并免疫系統(tǒng)、風(fēng)濕性疾病等全身疾病者。

采用隨機數(shù)字表法，將108例患者分為益生菌組(54例)和對照組(54例)，益生菌組男29例，女25例；日齡42～160 (95.16±23.72) d；巨細胞病毒感染30例，乙型肝炎4例。對照組男32例，女22例；日齡40～163 (98.46±24.15) d；巨細胞病毒感染33例，乙型肝炎5例。兩組患兒日齡、性別等基線資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 治療方法 對照組患兒給予常規(guī)保肝、利尿、利膽(維生素C、肌酐、低分子右旋糖酐、熊脫氧膽酸、抗生素)等對癥治療，巨細胞病毒感染者給予更昔洛韋葡萄糖注射液(武漢久安藥業(yè)有限公司，國藥準字H20052629)抗病毒治療，5 mg/(kg·次)，q12h。益生菌組在對照組基礎(chǔ)上加用雙歧桿菌三聯(lián)活菌散(上海信誼藥廠有限公司，國藥準字S10950032，0.21 g) 420 mg/次，3次/d。兩組均治療21 d。

1.3 觀察指標 ①肝功能及肝臟大小：采集兩組患兒治療前后清晨空腹8 h靜脈血，3 000 r/min離心10 min，然后存于-20 ℃冰箱，采用羅氏C311全自動生化分析儀測定結(jié)合膽紅素(DBIL)、TBIL、ALT、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)；治療前后均行B超檢測肝臟大小。②內(nèi)毒素(ET)：采用顯色基質(zhì)鱟實驗法測定兩組患兒治療前后血清ET水平。③血清指標：采用活性比色法測定血清二胺氧化酶(Diamine oxidase，DAO)水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清人轉(zhuǎn)化生長因子-β1 (TGF-β1)和白介素-6 (IL-6)水平。④腸道菌群檢測：收集兩組患兒治療前后糞便，采用Ezup柱式細菌基因組DNA抽提試劑盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]提取糞便細菌，應(yīng)用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)擴增技術(shù)(美國 ABI 7500熒光定量PCR儀)測定乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌(lg/g)。⑤不良反應(yīng)：觀察記錄兩組患兒治療期間是否出現(xiàn)便秘、惡心、食欲減退等不良反應(yīng)癥狀。

2 結(jié)果

2.1 兩組患兒治療前后肝功能和肝臟大小比較 治療后，益生菌組DBIL、TBIL、ALT、ALP、γ-GT及肝臟大小顯著低于治療前和對照組(P<0.05)。見表1。

2.2 兩組患兒治療前后L/M及血清ET、DAO、TGF-β1、IL-6水平比較 治療后，兩組ET、DAO、IL-6均顯著下降(P<0.05)，TGF-β1顯著上升(P<0.05)，益生菌組上述指標變化幅度大于對照組(P<0.05)。見表2。

2.3 兩組患兒治療前后腸道菌群比較 治療后，益生菌組乳酸桿菌、雙歧桿菌及雙歧桿菌/大腸桿菌均顯著增加(P<0.05)，大腸桿菌顯著減少(P<0.05)。見表3。

表1 兩組患兒治療前后肝功能和肝臟大小比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

表2 兩組患兒治療前后L/M及血清ET、DAO、TGF-β1、IL-6水平比較

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

2.4 兩組患兒不良反應(yīng)情況比較 益生菌組不良反應(yīng)發(fā)生率為5.55%，顯著低于對照組的20.35%(P<0.05)。見表4。

3 討論

肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒的膽汁淤積是由感染、膽道系統(tǒng)發(fā)育異常、遺傳代謝缺陷等多種因素所致。膽汁是人體內(nèi)重要的腸道菌群調(diào)節(jié)劑，膽汁淤積可以引起腸道菌群失調(diào)，腸道菌群失調(diào)又可進一步加劇膽汁淤積，二者形成惡性循環(huán)[4]。人體胃腸道內(nèi)寄居大量的微生物，乳酸桿菌、雙歧桿菌是腸道內(nèi)常見的厭氧益生菌[5]，而大腸桿菌則為常見的條件致病菌，腸腔內(nèi)乳酸桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌等微生物種類和數(shù)量的改變，可通過生成內(nèi)毒素、氨進一步損害肝功能，加重病情[6]。益生菌是改善人類微生態(tài)環(huán)境的非致病性細菌，益生菌治療是一種價格相對低廉、非侵入性、安全的治療方法，可減輕不同類型肝膽疾病的臨床癥狀，達到積極預(yù)防和治療兒童肝膽疾病的目的[7]。本研究對我院收治的肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒實施益生菌輔助治療，療效顯著。

人體腸黏膜屏障是由免疫屏障、化學(xué)屏障、生物屏障和機械屏障共同組成，任何環(huán)節(jié)受損都可影響腸黏膜通透性，膽汁為其化學(xué)屏障，腸道菌群的動態(tài)平衡為其生物屏障[8]。DAO是主要存在于小腸黏膜上層絨毛的一種活性酶，其活性與黏膜細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)的合成和絨毛高度息息相關(guān)，是反映腸道機械屏障結(jié)構(gòu)完整性和受損程度的理想指標[9-10]。ET是革蘭陰性菌的細胞壁外層結(jié)構(gòu)，當機體感染或受創(chuàng)時，腸道缺血、缺氧，細菌大量增殖、裂解，釋放出大量ET，經(jīng)受損的腸黏膜屏障進入血液，引發(fā)內(nèi)毒素血癥[11-12]。本研究結(jié)果顯示，益生菌組治療后，血清ET、DAO水平明顯優(yōu)于治療前和對照組，說明益生菌輔助治療可改善肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒腸黏膜通透性，其可能的作用機制為益生菌輔助治療可調(diào)節(jié)腸道上皮細胞間的連結(jié)，改善腸黏膜屏障功能，同時益生菌制劑還能改變腸道菌群比例，增加腸道內(nèi)有益菌(如乳酸桿菌、雙歧桿菌)，減少有害菌(大腸桿菌)，排除病原，促使失調(diào)的腸道菌群恢復(fù)動態(tài)平衡[13-16]。

本研究結(jié)果顯示，與常規(guī)治療相比，益生菌組DBIL、TBIL、ALT、ALP、γ-GT及肝臟大小改善幅度更為顯著，提示益生菌可快速糾正肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎患兒腸道菌群失調(diào)，促進腸道屏障功能恢復(fù)，從而改善腸源性內(nèi)毒素血癥，最終改善患兒肝功能。另外，益生菌組血清IL-6、TGF-β1水平改善良好，TGF-β1參與了肝內(nèi)膽汁淤積性肝炎的病理生理過程，與患兒病程進展密切相關(guān)[17]。IL-6是肝臟受損后由肝內(nèi)單核吞噬細胞產(chǎn)生的炎癥因子，可激活炎性細胞和血管內(nèi)皮細胞，誘導(dǎo)參與肝臟炎性反應(yīng)的蛋白合成，從而損害肝細胞，降低IL-6水平，可減輕炎癥介質(zhì)對腸黏膜結(jié)構(gòu)的破壞，從而加速修復(fù)患兒腸黏膜通透性[18-19]。同時，IL-6還能促進腸黏膜的生長修復(fù)，增加回腸黏膜厚度、隱窩深度和絨毛高度，促進腸黏膜機械屏障結(jié)構(gòu)修復(fù)，更好地防治腸道細菌移位，進一步降低腸源性內(nèi)毒素血癥[20]。

表3 兩組患兒治療前后腸道菌群比較(lg/g)

注：與治療前比較，*P<0.05；與對照組比較，△P<0.05

表4 兩組患兒不良反應(yīng)情況比較(例，%)

綜上所述，益生菌可通過調(diào)節(jié)腸道菌群失衡改善膽汁淤積性肝病患兒腸黏膜通透性，降低血液中內(nèi)毒素水平，最終改善患兒肝功能，且安全性較高。

參考文獻：

[1] 劉艷,黃志華.嬰兒膽汁淤積性肝病的診斷與治療[J].臨床肝膽病雜志,2015,31(8):1218-1220.

[2] Dorman C,Wong M,Khan A.Cholestatic hepatitis from prolonged kratom use:a case report[J].Hepatology,2015,61(3):1086-1087.

[3] 朱啟鎔,王曉紅,王建設(shè).嬰兒肝病綜合征診治修訂方案[J].中華傳染病雜志,2004,22(5):357.

[4] Goldschmidt ML,Mourya R,Connor J,et al.Increased frequency of double and triple heterozygous gene variants in children with intrahepatic cholestasis[J].Hepatol Res,2016,46(4):306-311.

[5] 周燕,張士發(fā).影響嬰幼兒腸道微生物定植的相關(guān)因素的研究進展[J].沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2017,19(2):171-174.

[6] 車軍,賈澤博,王永席,等.復(fù)方谷氨酰胺腸溶膠囊聯(lián)合雙歧桿菌四聯(lián)活菌片治療腸道菌群失調(diào)相關(guān)性腹瀉的療效評估[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2016,13(1):113-115.

[7] Chen M,Wang MC,Ni R,et al.Role of probiotics in treatment of nonalcoholic fatty liver disease[J].Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi,2017,25(1):77-80.

[8] 周鋒偉.重癥急性胰腺炎患者腸道菌群、腸道屏障功能變化及益生菌的干預(yù)效果[J].中國基層醫(yī)藥,2016,23(24):3753-3756.

[9] 王美燕,李芳君,栗金亮.危重癥新生兒血清二胺氧化酶和腸脂肪酸結(jié)合蛋白測定評價胃腸功能障礙的臨床價值[J].中國婦幼保健,2015,30(23):3980-3983.

[10]許文達,彭穎,陳江,等.血二胺氧化酶在放射性腸道損傷中的變化及意義[J].中國醫(yī)藥,2016,11(2):238-242.

[11]Pang X,Wang Z.Relationship of intestinal microecology with infantile cholestatic liver disease[J].J Clin Hepatol,2015,31(8):1221-1225.

[12]張向磊,盧立偉,胡冬青,等.護腸清毒微丸結(jié)腸靶向給藥阻斷瘀毒內(nèi)蘊證乙型肝炎相關(guān)慢加急性肝衰竭腸源性內(nèi)毒素血癥臨床觀察[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2017,23(18):191-197.

[13]王平,劉昊,方芳.益生菌在常見腸炎疾病治療中的應(yīng)用[J].沈陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2016,18(6):500-502.

[14]王千,富建華.新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎的研究進展[J].中國小兒急救醫(yī)學(xué),20117,24(8):610-615.

[15]Fuller R,Gibson GR.Modification of the intestinal microflora using probiotics and prebiotics [J].Scand J Gastroenterol Suppl,1997,222:28-31.

[16]江玲,單慶文,王琳琳,等.益生菌治療對嬰兒膽汁淤積性肝病腸道菌群及相關(guān)細胞因子的影響[J].中華實用兒科臨床雜志,2015,30(12):945-948.

[17]Wu N,Meng F,Invernizzi P,et al.The secretin/secretin receptor axis modulates liver fibrosis through changes in transforming growth factor-β1 biliary secretion in mice[J].Hepatology,2016,64(3):865-879.

[18]梁輝標,呂杰強.妊娠期肝內(nèi)膽汁瘀積癥肝功能、炎癥細胞因子變化臨床分析[J].中國婦幼保健,2016,31(1):55-57.

[19]姜明明,方強,孫勤,等.添加益生菌的早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重型顱腦損傷患者血清炎癥因子與腸黏膜屏障功能的影響[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2015,27(10):1177-1180.

[20]梁達理,何秋英.腫瘤壞死因子-α、白介素-6對新生兒感染性疾病的診斷價值[J].廣西醫(yī)學(xué),2015,37(10):1499-1501.