雙氯芬酸鈉注射液治療奶牛臨床型乳房炎的試驗報告

文/李世宏 孔曉軍 秦 哲 劉希望 楊亞軍 焦增華 李劍勇*

（中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所/農業農村部獸用藥物創制重點實驗室/甘肅省新獸藥工程重點實驗室）

奶牛臨床型乳房炎會造成奶牛產奶量下降，病乳廢棄，嚴重者乳區化膿、壞疽、萎縮，致使其永久喪失泌乳能力，淘汰牛占奶?？倲档?0%左右。目前奶牛臨床型乳房炎的治療以抗生素為主，導致抗生素殘留、細菌耐藥性等問題也日漸突出。應用抗生素類藥物配合抗炎類藥物控制炎癥，可迅速緩解患牛的臨床癥狀，同時減少抗生素使用量，成為治療奶牛乳房炎的新思路和新策略。雙氯芬酸鈉是苯乙酸類衍生物，屬于第三代非甾體抗炎藥物，其抗炎鎮痛作用比吲哚美辛強2.0～2.5 倍，比阿司匹林強26～50倍，且具有應用劑量小，耐受性好，療效高，個體差異小等特點，胃腸道副反應也比大多數非甾體抗炎藥物輕。雙氯芬酸鈉是環氧化酶的強抑制劑，可減少前列腺素、血栓素的合成，從而起到抗炎、鎮痛、解熱作用。雙氯芬酸鈉注射液是由鄭州百瑞動物藥業有限公司聯合中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所等研制的用于輔助治療奶牛臨床型乳房炎的新制劑。中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所于2017年3月1日～2017年4月30日在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心進行了雙氯芬酸鈉注射液防治奶牛臨床型乳房炎臨床擴大試驗。

表1 試驗奶牛分組及用藥方法

1 材料

1.1 主要設備與器材

體細胞分析儀（FossomaticTM Minor）、冰箱（海爾BCD-257SL）、水浴鍋、動物用體溫計、50 mL離心管、20 mL注射器、超聲波清洗機等實驗室常用器皿等。

1.2 試驗藥品

1.2.1 受試藥物

雙氯芬酸鈉注射液，10 mL/瓶（10 mL∶0.5 g），批號：20150826，鄭州百瑞動物藥業有限公司。

1.2.2 合用藥物

注射用頭孢噻呋鈉，1 g/瓶，批號：17021602，鄭州百瑞動物藥業有限公司。

1.3 試驗奶牛選擇依據與辦法

1.3.1 診斷標準

試驗?；疾∪閰^出現紅、腫、熱、痛等癥狀；乳汁中出現絮狀物、凝塊、血液及黃色清水等癥狀；體溫（T）≥39.5 ℃；臨床癥狀評分＞4 分。

1.3.2 納入標準

依據臨床型奶牛乳房炎的診斷標準，在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心選擇自然發病的臨床癥狀、年齡、胎次、體重和體況相近的臨床型乳房炎荷斯坦奶牛，且發病前均未使用任何藥物；對挑選的試驗奶牛在試驗開展之前再次逐一進行臨床檢查，剔除乳房和乳頭有外傷、乳房腫硬、乳頭壞死、乳房炎反復發作、試驗前體溫沒有升高（T＜39.5 ℃）但伴發有其它疾病的奶牛。

1.3.3 剔除標準

對選中的臨床型乳房炎試驗奶牛進行常規飼養，試驗進行中有其它疾病伴發的試驗牛終止試驗，交由牛場另選方案治療或做淘汰處理。依據《中華人民共和國農業部公告第1596號（獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術指導原則等5個技術指導原則）》及EMEA（歐洲藥品管理局）/CVMP（獸用藥委員會）/344/1999等制定了臨床型乳房炎奶牛剔除標準。具體如下：（1）試驗前30 天，全身或乳房局部使用抗感染藥和抗炎藥、免疫調節劑、微生態制劑、血清抗體及抗生素進行過治療的奶牛。（2）試驗前150 天接種過乳房炎疫苗的奶牛。（3）少于或多于4 個乳頭的奶牛。（4）乳頭有明顯損傷的奶牛。（5）患有其它疾病的奶牛。（6）病史不明的奶牛。（7）營養極度不良的奶牛。

2 方法

2.1 試驗分組及用藥方法

將挑選的40 頭奶牛分為試驗組和對照組，每組20 頭。試驗組給予雙氯芬酸鈉注射液和注射用頭孢噻呋鈉；對照組僅給予注射用頭孢噻呋鈉。2 組試驗奶牛在相同條件下飼喂相同日糧。具體分組及用藥方法見表1。

表2 試驗奶牛臨床癥狀評分表

表3 試驗奶牛用藥前和用藥后體溫 （X±SD）

2.2 臨床觀察

在整個試驗期間對試驗奶牛進行臨床觀察，詳細記錄給藥前后、停藥后至痊愈轉群前各組患病奶牛臨床癥狀的表現及癥狀的發展和轉歸情況。在給藥前和給藥后的24 h，記錄各試驗組奶牛的食欲、乳房、乳汁、直腸體溫等臨床癥狀。在試驗中，結合臨床實際情況，制定奶牛臨床癥狀評分表。根據臨床癥狀評分表對各個時間點試驗奶牛進行臨床癥狀評分，臨床癥狀評分最嚴重為17 分，而臨床癥狀評分為4 分意味著奶牛臨床健康（表2）。

2.3 奶樣采集

分別于用藥前、第3次給藥后24 h無菌采集單個患病乳區奶樣約50 mL于滅菌奶樣管中，標明牛號、乳區和時間，置冰盒中送達實驗室。采集奶樣前先用溫水洗滌乳房，然后用消毒液擦洗，再用碘酒消毒乳頭，棄掉前2～3 把奶。

2.4 檢測項目

2.4.1 體溫測定

各試驗組分別于用藥前、用藥后第1天和第3天分別測定試驗奶牛直腸體溫。

2.4.2 牛奶體細胞計數

參照FossomaticTMMinor使用指南操作如下：（1）用Foss公司提供的標準品對儀器檢測性能進行校正；（2）將待檢樣品自然解凍，搖勻后用校正過的FossomaticTMMinor進行檢測。

2.5 藥效判定標準

在用藥前、用藥期間及痊愈轉群前，每天對試驗奶牛進行臨床檢查并詳細記錄試驗奶牛的食欲、乳房、乳汁、直腸體溫等臨床癥狀。根據臨床癥狀評分表對各個時間點試驗奶牛進行臨床癥狀評分和療效評定（表2）。

2.5.1 治愈

臨床癥狀評分為4分；患病乳區紅、腫、熱、痛等臨床癥狀完全消失，乳汁性狀、顏色均恢復正常；乳汁中體細胞數＜50 萬個/mL；體溫37 ℃≤T＜39.5 ℃；停藥5 天后轉至健康群。治愈率=治愈數/總數×100%。

2.5.2 有效

4≤臨床癥狀評分＜自身給藥前得分；患病乳區紅、腫、熱、痛等臨床癥狀減輕或消退；乳汁中體細胞數顯著下降。有效率=(有效數+治愈數)/總數×100%

表4 試驗奶牛用藥前后乳汁中的體細胞數( X±SD) 單位：萬個/mL

表5 試驗奶牛臨床癥狀評分（X±SD） 單位：分

2.5.3 無效

臨床癥狀評分≥自身給藥前得分；患病乳區臨床癥狀無明顯改善甚至加重，或者停藥后2 周內復發；乳汁中體細胞數下降不顯著，視為無效。無效率=無效數/總數×100%

2.6 數據統計與分析

試驗數據以“平均數±標準差”表示，應用SPSS 19.0應用軟件（配對t檢驗或單因素方差）進行統計分析。

3 結果

3.1 臨床癥狀觀察

給藥前，各組試驗奶牛均表現明顯的臨床型乳房炎癥狀：乳區出現紅、腫、熱、痛等癥狀；乳汁分泌不暢，出現絮狀物，嚴重者腫脹疼痛明顯，乳汁中出現絮狀物、凝塊、血液、黃色清水等癥狀，試驗奶牛均有發熱癥狀。實驗室檢查，乳汁中體細胞數量明顯升高。首次給藥后，患牛體溫迅速下降至正常范圍，給藥3 天結束后，絕大部分患牛紅、腫、熱、痛的癥狀消失，乳汁性狀如乳汁顏色、絮狀物、凝塊、血乳、清水樣奶等異常現象消失，糞便、尿液外觀無異常。停藥后轉至健康群期間，試驗奶牛乳汁和乳房逐漸恢復正常。

3.2 體溫測量

試驗奶牛用藥前、用藥后第1天和第3天分別用體溫計于直腸測量試驗奶牛體溫，結果見表3。

從表3可見，試驗組與對照組奶牛在給藥第1天后，兩組試驗奶牛體溫均下降，但試驗組奶牛體溫降至奶牛正常值（37～39.5 ℃）范圍內，而對照組還是接近奶牛發熱體溫閾值（＞39.5 ℃）；試驗組與對照組奶牛體溫在給藥第3天后，體溫均降至正常范圍內，且試驗組體溫降低差異較顯著（配對t檢驗，p≤0.05），而對照組差異不顯著。試驗結果表明，雙氯芬酸鈉注射液具有明顯的快速降溫解熱作用。

3.3 奶樣體細胞數檢查

試驗奶牛用藥前、第3次給藥后24 h分別無菌采集各組發病乳區奶樣檢測體細胞數，檢測結果見表4。

從表4可以看出，在用藥前，試驗組與對照組奶牛體細胞數遠高于正常奶牛的50 萬個/mL，而停藥后試驗組與對照組奶牛體細胞數下降差異均極顯著，但試驗組降至小于50 萬個/mL，而對照組則還高于50 萬個/mL。試驗表明，對患臨床型乳房炎試驗奶牛給予雙氯芬酸鈉注射液配合用頭孢噻呋鈉與單獨使用頭孢噻呋鈉相比，更能顯著降低試驗牛乳中的體細胞數，從而降低炎性細胞，消除炎癥，促進試驗病?？焖倩謴?。

3.4 臨床癥狀評分

根據奶牛臨床型乳房炎臨床癥狀評分判斷標準，各組試驗奶牛治療前后臨床癥狀評分統計結果見表5。

從表5可以看出，在用藥前，試驗組與對照組奶牛臨床癥狀評價得分遠高于健康奶牛的臨床癥狀評價得分（4分），而停藥后試驗組與對照組奶牛臨床癥狀評價得分下降差異均極顯著，但與對照組相比，試驗組更接近于正常值。試驗結果表明，與單獨使用頭孢噻呋鈉相比，對患臨床型乳房炎的試驗奶牛給予雙氯芬酸鈉注射液配合使用頭孢噻呋鈉較能顯著加速患牛臨床癥狀恢復，有效縮短治療時間。

表6 試驗藥物對奶牛臨床型乳房炎治療效果

3.5 受試藥物對奶牛臨床型乳房炎的治療效果

根據奶牛臨床型乳房炎療效判斷標準，各組試驗奶牛臨床治療療效統計結果見表6。有效率為治愈頭數加有效頭數除以試驗?？傤^數。

從表6可以看出，用藥結束后試驗組對奶牛臨床型乳房炎的治愈率、有效率和無效率分別為65%、80%和20%，其療效明顯優于對照組的55%、65%和35%。試驗結果表明，雙氯芬酸鈉注射液配合使用注射用頭孢噻呋鈉輔助治療奶牛臨床型乳房炎較僅使用注射用頭孢噻呋鈉療效更加顯著。

4 結果與討論

奶牛臨床型乳房炎傳統上采用抗生素療法。由于大劑量或不當使用青霉素、鏈霉素、四環素和金霉素等抗生素藥物，致使牛奶中抗生素殘留。當人們食用含抗生素的牛奶后，引起過敏反應，嚴重者發生過敏性休克，更多的人因長期飲用含有抗生素的牛奶，導致機體內細菌產生耐藥性，給治療帶來困難。此外，牛奶中殘留抗生素，接種乳酸菌后不易繁殖，使酸乳生成受阻，極大地影響乳制品生產。因此，在保證療效的同時，選擇新的治療方法以適當減少抗生素使用量是治療乳房炎的新期望。

在本試驗研究的雙氯芬酸鈉注射液配合注射用頭孢噻呋鈉對臨床型奶牛乳房炎的臨床擴大試驗中，試驗組用藥后具有明顯的快速降溫解熱作用，以降低對患牛中樞神經系統的不良影響；試驗組能顯著降低試驗奶牛乳中的體細胞數，從而有效降低炎性細胞而消除炎癥，促進病?？焖倩謴徒】担辉囼灲M對奶牛臨床型乳房炎的治愈率和有效率分別為65%和80%，均高于對照組的55%和65%。試驗結果表明，抗炎藥物雙氯芬酸鈉注射液配合抗生素輔助治療奶牛臨床型乳房炎，其療效優于單獨使用抗生素治療，且其療程也大大縮短。總之，雙氯芬酸鈉注射液配合注射用頭孢噻呋鈉輔助治療奶牛臨床型乳房炎，具有快速解熱、療程短及給藥方便等特點，可以減少抗生素的使用量而降低細菌耐藥性和藥物殘留，值得應用與推廣研究。

[1] 曹立亭. 乳酸鏈球菌素治療奶牛臨床型乳房炎的研究：[博士論文][D].杭州：浙江大學，2009.

[2] 宋亞攀, 楊利國. 中國奶牛乳房炎防治研究進展[J]. 中國奶牛，2010（12）: 48-54.

[3] 趙興緒. 奶牛乳房炎防治[M].北京：金盾出版社，2007.

[4] 金鳳，王若君，楊英. 中藥治療奶牛隱性乳房炎臨床試驗[J]. 中國獸醫雜志，2005，41（8）：33-34.

[5] 李睿文，李鐵拴，關鳴. 康貝防治奶牛乳房炎療效觀察及對乳汁體細胞數的影響[J].中國獸醫雜志，2002，38（2）：11-13.

[6] 黃利權，施明華，蔡榮湘. 隱性乳房炎乳汁中體細胞和病原菌及酶間的相關性[J]. 浙江農業大學學報，1995，21（3）：243-246.

[7] 王暉，許衛銘. 含薄荷醇的復合促進劑促進鹽酸氯丙嗪經皮吸收[J]. 中國現代應用藥學，2001，18（5）：356-356.