枳殼不同產地傳統與一體化飲片主要成分含量比較*

2018-07-03 07:14:38王鳳嬌鐘凌云祝婧江西中醫藥大學藥學院南昌330004

江西中醫藥 2018年7期

★ 王鳳嬌鐘凌云* 祝婧（江西中醫藥大學藥學院南昌 330004）

枳殼是中醫臨床上常用的理氣藥，其為蕓香科植物酸橙及其栽培變種的干燥未成熟果實。枳殼，味苦、辛、酸、性微寒；歸脾、胃、大腸經。具有理氣寬中，行滯消脹的功效［1］；常用于治療胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，痰飲內停，胃下垂，脫肛，子宮脫垂等癥狀［2］。枳殼的主要有效成分為黃酮類、生物堿、揮發油，其中黃酮類化合物柚皮苷、新橙皮苷可抑制平滑肌收縮，生物堿類化合物辛弗林具有升壓、抗休克等藥理作用［3-4］。枳殼生品中含有較多的揮發油，其作用峻烈，易傷元氣，體虛者不宜服用，且刺激人體胃腸道，會產生惡心、嘔吐等副作用；麥麩性平，味甘淡，能和中益脾，且能吸收部分揮發油，因此枳殼經麥麩炒后，揮發油成分減少，燥性緩和，療效增強，在臨床上多以炮制品入藥［5］。

目前枳殼的產地加工方法為：7月果皮尚綠時采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥［6］。而枳殼傳統炮制飲片加工方法為：取原藥材，除去雜質，洗凈，潤透，去瓤，切薄片，干燥，篩去碎落的瓤核［6］。中藥材一體化加工則是從鮮藥材直接到炮制飲片的過程。枳殼一體化飲片加工方法為：取鮮藥材，除去雜質，對半切開，去瓤，切薄片，干燥。與枳殼傳統加工工藝比較，一體化加工工藝減少了中間干燥、水洗、浸潤過程，縮短了加工時間，避免了中間儲存環節，同時也避免了枳殼成分的損失。因此本研究主要從枳殼傳統與一體化飲片主要成分含量的差異進行比較，以期為枳殼飲片的一體化加工提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Ultimate 3000 高效液相色譜儀（Ultimate 3000柱溫箱，VWD 檢測器，Chromeleon 7.10色譜工作站）；TDL-60B低速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；電熱鼓風干燥箱（上海博訊實業有限公司醫療設備廠）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；十萬分之一電子分析天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；FW135中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環水式真空泵（鞏義市子華儀器有限責任公司）。

1.2 材料柚皮苷（批號：BCTG-0808）；橙皮苷（批號：BCTG-0092）；新橙皮苷（批號：BCTG-0713）；辛弗林（批號：BCTG-0709，）；上述對照品純度均大于98%，均購自中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心。甲醇、乙腈均為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑為分析純。枳殼藥材由江西中醫藥大學葉喜德老師從四個不同產地采購并由中藥鑒定學葛菲老師鑒定為蕓香科植物酸橙的干燥未成熟果實。

2 方法與結果

2.1 枳殼加工炮制方法傳統生品枳殼：取原藥材，除去雜質，洗凈，潤透，去瓤，切薄片，干燥，篩去碎落的瓤核。

一體化生品枳殼：取鮮藥材，除去雜質，對半切開，去瓤，切薄片，干燥。

2.2 色譜條件

2.2.1 黃酮苷類測定［7］色譜柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-水（用磷酸調pH=3）（18∶82），檢測波長：283nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進樣量：10μL，樣品及對照品色譜圖見圖1。

圖1 枳殼中黃酮苷類HPLC圖

2.2.2 生物堿類測定［8］色譜柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-水（0.1%十二烷基硫酸鈉和0.1%磷酸）（32∶68），檢測波長：224nm，柱溫25℃，流速：1.0mL/min，進樣量：10μL，樣品及對照品色譜圖見圖2。

圖2 枳殼中生物堿類HPLC圖

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 黃酮苷類制備［7］取枳殼飲片粉末（40目）約0.2g，置100mL圓底燒瓶中，加甲醇25mL，水浴加熱回流1.5h后，趁熱濾過，濾液置50mL容量瓶中，殘渣再用甲醇提取2次，每次加甲醇10mL提取10min，濾液置同一容量瓶中，冷卻，最后加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取該溶液5mL置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.3.2 生物堿類制備［8］取枳殼飲片粉末（40目）約0.5g，精密稱定，置50mL離心管中，加體積分數為50%的乙醇25mL，超聲處理30min（240W），取出。于3000r/min離心5min，將上清液轉移至100mL容量瓶中，重復提取1次，合并提取液。用體積分數50%的乙醇定容至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 對照品溶液的制備（1）精密稱取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷適量，置于10mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容到刻度，搖勻，即得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的對照品儲備溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每mL分別含柚皮苷0.413mg，橙皮苷0.180mg，新橙皮苷0.185mg）。

（2）精密稱取辛弗林對照品適量，置于10mL的容量瓶中，加50%的乙醇溶解并定容到刻度，搖勻，作為辛弗林的對照品儲備溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每mL含辛弗林0.114mg）。

2.5 線性關系考察精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合對照品溶液0.5，1，2，4，5mL分別置于5mL容量瓶中，加入甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得不同濃度對照品混合溶液。按照

2.2.1項下色譜條件進樣，以對照品含量為橫坐標、峰面積為縱坐標作曲線，進行回歸分析，求得回歸方程。柚皮苷：Y=428.5X+1.0491，r=0.9995；橙皮苷：Y=93.139X+0.3746，r=0.9992；新橙皮苷：Y=517.47X+1.3197，r=0.9993。結果表明柚皮苷進樣量在0.826～8.26μg，橙皮苷進樣量在0.36～3.6μg，新橙皮苷進樣量在 0.37～3.7μg范圍內線性關系良好。

精密吸取辛弗林對照品溶液0.1，0.5，1，1.5，2mL分別置于10mL容量瓶中，加入50%的乙醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得不同濃度辛弗林對照品溶液。按照2.2.2項下色譜條件進樣，以對照品含量為橫坐標、峰面積為縱坐標作曲線，進行回歸分析，求得回歸方程。辛弗林：Y=816.22X+1.3571，r=0.9992。結果表明辛弗林進樣量在0.0114～0.228μg范圍內線性關系良好。

2.6 精密度實驗精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品溶液，按照2.2.1項下色譜條件連續進樣6次，每次10μL，測定峰面積，計算得RSD。柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分別為0.61%，0.78%，0.57%，表明精密度良好。

2.7 穩定性試驗取黃酮苷類供試品溶液適量，分別于0，4，8，12，16，20，24h按照 2.2.1項下色譜條件進樣，測定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷面積，計算RSD（n=6）分別為0.98%，1.66%，1.10%。表明樣品溶液在24h內穩定。

2.8 重現性試驗按照2.3.1項下方法制備6份黃酮苷類供試品溶液，再按照2.2.1項下色譜條件進樣，測定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷峰面積，計算RSD（n=6）分別為0.81%，1.44%，1.60%。表明此方法的重復性好。

2.9 加樣回收試驗取已知柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的枳殼粉末0.2g，精密稱定，共6份，加入含柚皮苷0.925mg/mL、橙皮苷0.336mg/mL、新橙皮苷0.671mg/mL混合對照品溶液20mL，按照2.3.1項下方法制備供試品溶液，再按照2.2.1項下色譜條件測定，計算回收率。結果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷平均加樣回收率（n=6）分別為95.73%、95.60%、94.56%，RSD分別為1.68%、1.92%、1.71%。同理測得辛弗林平均加樣回收率（n=6）為97.82%，RSD為0.88%。說明加樣回收率良好，符合要求。

2.10 樣品含量測定取四個不同產地傳統飲片與一體化飲片分別按照2.3.1、2.3.2項下方法制備供試品溶液，然后再分別按照2.2.1、2.2.2項下色譜條件進樣，采用外標法測定，計算四個不同產地傳統飲片與一體化飲片中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量，測定結果見表1。

表1 枳殼不同產地傳統與一體化飲片中主要成分的含量測定

使用SPSS 21.0軟件進行數據處理，對枳殼傳統飲片與一體化飲片柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林含量，進行兩組配對樣本t檢驗，傳統飲片與一體化飲片主要成分比較檢驗結果：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林P值分別為0.859、0.9157、0.8447、0.7657，均大于0.05，差異有統計學意義，說明枳殼兩種工藝飲片主要成分含量無顯著差別。

從文獻查閱［9-14］以及枳殼加工炮制的實際操作可知，一體化加工工藝節省了中間操作，避免了枳殼成分的損失，理論上枳殼一體化飲片主要成分含量要高于傳統飲片的含量，但是從上述實驗及結果分析可知，新干、重慶產地枳殼一體化飲片主要成分含量高于傳統飲片含量；陜西產地枳殼兩種飲片主要成分含量相近；金華產地枳殼一體化飲片主要成分含量低于傳統飲片含量。進而綜合枳殼加工炮制實際操作及本研究結果，可以說明枳殼一體化飲片具有替代傳統飲片的可能性。