HPLC檢測中藥中非法添加化學降壓藥物

王小永 趙麗娜

【摘 要】目的：為了解當前中藥制劑中的非法添加化學降壓藥物的現象，通過HPLC進行定性檢測中藥制劑可能存在有非法添加的10種化學降壓藥物。方法：應用Agilent Extend-C18柱（250 mm*4.6 mm，5 μm），0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動相B，梯度洗脫，230 nm檢測波長，30℃柱溫，1.0 mL·min?1流速。結果：10種化學降壓藥物均具分離度、線性與檢測的靈敏度。檢測限0.01～13 ng，5針連續進樣的色譜圖中，各組分保留的時間RSD <0.1%。結論：HPLC檢測中藥中非法添加化學降壓藥物簡便且靈敏，同時重復性佳，可作為對降壓類藥物鑒別的有效方法進行推廣。

【關鍵詞】高效液相色譜法；中藥制劑；化學降壓藥物；非法添加

【中圖分類號】R284 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）05--02

近年以來，純中藥的制劑及各類的保健品中，非法進行化學藥物添加的案例越多越多[1]。降壓類的中藥制劑當中，添加了西藥成分的現象在這些案件中相對突出，這種不法行為為人們健康帶來極其嚴重的威脅[2]。本研究通過對中藥的制劑中是否存在非法添加了化學降壓藥進行初步的篩查，選擇10種降壓藥物，應用梯度洗脫法對化學降壓藥進行分離的操作，結果顯示了該方法靈敏、簡便且重復性好，具體操作如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Agilent 1200），配液相四元泵、紫外光可變波長檢測器、控溫自動進樣器；高速離心機（TGL 16G）；電子天平（Mettler AE200）；超聲波發生器（SB5200）。

1.2 降壓藥的對照品

氫氯噻嗪片：（國藥準字H44023235，用量規格：25 mg，三才石岐制藥股份有限公司）、吲達怕胺片：（國藥準字H44020885，用量規格：2.5 mg，廣東安諾藥業股份有限公司）、氯沙坦鉀片：（國藥準字H20070264，用量規格：50 mg，浙江華海藥業股份有限公司）、厄貝沙坦片：（國藥準字H20030016，用量規格：150 mg，浙江華海藥業股份有限公司）、硝苯地平片：（國藥準字H44023986，用量規格：10 mg，廣東華南藥業集團有限公司）、酒石酸美托洛爾片：（國藥準字H32025390，用量規格：25 mg，阿斯利康制藥有限公司）、鹽酸特拉唑嗪片：（國藥準字H20023659，用量規格：2 mg，上海雅培制藥有限公司）、替米沙坦片：（國藥準字H20061185，用量規格：40 mg，蘇州東瑞制藥有限公司）、鹽酸地爾硫片：（國藥準字H10880015，用量規格：30 mg，上海信誼萬象藥業股份有限公司）、尼群地平片：（國藥準字H13022629，用量規格：10 mg，石藥集團歐意藥業有限公司）、

均為市場購買，含量按標示的含量100%進行折算。

1.3 試劑 分析純試劑（醋酸銨）、純化水、色譜純為甲醇與乙腈（Tedia，美國）。

1.4 樣品 采用珍菊降壓片（國藥準字Z20053333，規格：0.25 g，含鹽酸可樂定0.03 mg、氫氯噻嗪5 mg蘆丁20 mg，雷允上藥業有限公司）為市場購買。

2 方法

2.1 高效液相色譜條件設置 應用C18色譜柱（250 mm*4.6 mm，5 μm），0.02 mol·L?1醋酸銨溶液為流動相A，甲醇-乙腈（2∶1）為流動相B，梯度洗脫，230 nm檢測波長，30℃柱溫，1.0 mL·min?1流速，進樣量控制2 μL。

2.2 制備對照液 將10種獲得的對照藥研磨成粉，依次精密的稱取相當各對照的化合物10mg量，置于同一帶塞的錐形瓶，精準加入20 mL甲醇，進行10min超聲后靜置，并進行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得對照液以備用。

2.3 制備樣品液 將珍菊降壓片研磨成細粉狀，進行精準稱定后置帶塞的錐形瓶當中，加入20 mL甲醇，進行10min超聲后靜置，并進行高速離心10min，取離心后的上清液，獲得制備樣品液。

3 結果

3.1 降壓藥峰面積線性結果

制備得對照液注入高效液相色譜儀當中進行分析[3]。依據高效液相色譜條件設置，10種降壓藥化合物均得到很好的分離。對照液進行適量10倍稀釋，按高效液相色譜條件下依次進樣分析（2～10μL每2μL梯度進樣）。將10種降壓藥的進樣量峰面積線性回歸顯示，R=0.9994～0.9999，藥物該流動相系統穩定，線性均呈現良好。

3.2 檢測限

精密量取適量對照液，加甲醇逐級稀釋至不同濃度，按高效液相色譜條件設置進行測定，顯示在高效的液相色譜圖當中，各物質的色譜峰信噪比（S/N）=10，研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測的靈敏性高。

討論

應用梯度洗脫程序，以甲醇、乙腈及緩沖鹽作為流動相。此系統可對10種降壓藥進行同時的分離。并采用不同色譜柱，各藥物分離結果各不同。在應用Agilent TC-C18柱分析HPLC的圖譜中觀察到了9個特征峰，其中，替米沙坦特征峰在圖譜中消失，因此Agilent TC-C18靈敏度低。而應用Agilent Extend-C18柱進行分析時，則10種藥的分離均良好，可選擇Agilent Extend-C18柱進行處理分析。另外，研究的10種降壓藥物檢測限均處于0.01～13ng，表明HPLC檢測的靈敏性高。

總而言之，HPLC檢測中藥中非法添加化學降壓藥物簡便且靈敏，同時重復性佳，可作為對降壓類藥物鑒別的有效方法進行推廣。

參考文獻

鞏麗萍，田晨穎，郭常川，等.超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜快速篩查及定量分析中成藥或保健品中非法添加的24種消炎止痛類化學成分[J].中國藥學雜志，2015，50（24）：2154-2159.

林偉杰，梁祈，詹若挺.止咳平喘類中成藥中9種非法添加化學成分的定性定量檢驗方法研究[J].廣州中醫藥大學學報，2017，34（3）：418-423.

沈于蘭，申蘭慧，蘇嘉焱.HPLC法同時測定止咳平喘類中成藥中非法添加的9種化學成分[J]. 中國藥品標準，2016，17（1）：37-40.