P63、TTF—1及CD56聯(lián)合相關(guān)免疫組化在肺癌診斷中的價值觀察

梁明森

【摘 要】目的：探究在肺癌診斷中P63、TTF-1及CD56聯(lián)合相關(guān)免疫組化的價值觀察。方法：選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標(biāo)本124例，其中小細(xì)胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細(xì)胞癌43例。對其病理標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色，所選抗體為P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1。結(jié)果：P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細(xì)胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。結(jié)論：在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學(xué)分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】免疫組化；肺癌；非小細(xì)胞肺癌；小細(xì)胞肺癌

【中圖分類號】R734.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2095-6851（2018）04-0-01

肺癌作為全球發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤之一，具有治療預(yù)后效果差、侵襲性強等特點。肺癌的不同組織類型對治療存在非常重要的指導(dǎo)作用，其中非小細(xì)胞肺癌的臨床診斷需要準(zhǔn)確的病理分型，而病理診斷手法并不完全可靠，雖然70%肺癌診斷依靠小組織活檢或細(xì)胞進(jìn)行評估和分級，但對于分化差的腫瘤分型較為困難，因此需要借助免疫組化指標(biāo)方法。近年來，國內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[1]，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1（TTF-1）、P63在鑒別腺癌和鱗癌中應(yīng)用較好。臨床上對非小細(xì)胞肺癌和小細(xì)胞肺癌的治療方案和預(yù)后截然不同，因此對鑒別準(zhǔn)斷小細(xì)胞肺癌也十分重要，神經(jīng)細(xì)胞黏附分子（CD560）對鑒別小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌是一個較好的免疫指標(biāo)。本研究現(xiàn)選取P63、TTF-1、CK5/6、CD56等相關(guān)免疫組化在肺癌診斷中的價值進(jìn)行觀察分析，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院病理科2016年1月到2018年1月肺癌標(biāo)本124例，其中小細(xì)胞肺癌34例、腺癌47例、鱗狀細(xì)胞癌43例。所有患者均經(jīng)肺穿刺、纖維支氣管鏡或手術(shù)病理標(biāo)本診斷為肺癌。患者年齡在18～65歲，均具有完整的臨床病歷資料。

1.2 方法

1.2.1 材料

準(zhǔn)備即用型鼠抗人P63、T TF-1、CK5/6、CK18、CEA、CD56單克隆抗體，生物素標(biāo)記的兔抗鼠IgG二抗、羊抗鼠二抗，辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉卵白素，鏈霉菌抗生素-過氧化物酶溶液，DAB顯色液以及B-P試劑盒。上述均購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，其他實驗室應(yīng)用機器均購于上海徠卡儀器有限公司。

1.2.2 方法

用10%中性福爾馬林固定所有組織標(biāo)本后脫水，再經(jīng)石蠟包埋后連續(xù)切5～6張片，保證每張切片厚度在5μm。準(zhǔn)備一張HE染色，核實組織病理學(xué)診斷，其余用免疫組織化學(xué)染色。免疫組化過程：將準(zhǔn)備好的標(biāo)本浸泡在新鮮配制的3%H2O2后，阻斷標(biāo)本中內(nèi)源性過氧化物酶10分鐘。用磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）漂洗標(biāo)本兩次，每次3分鐘。將山羊血清溫室封閉30分鐘后，進(jìn)而消除非特異性染色，并滴加一抗，過夜。采用PBS緩沖液漂洗兩次，并滴加對應(yīng)的生物素化IgG二抗，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用鏈霉素生物素化HRP復(fù)合物，放置在37℃環(huán)境下30分鐘。用PBS緩沖液漂洗后采用DAB顯色液室溫顯色，并在顯微鏡下控制顯色，小流水沖洗20分鐘后終止顯色。梯度乙醇脫水后晾干。

1.3 觀察指標(biāo) ①P63和TTF-1為細(xì)胞核呈棕黃色顆粒，當(dāng)細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；②CK5/6、CEA、CK18為細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒，當(dāng)細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號；③CD56為細(xì)胞膜呈棕黃色顆粒，當(dāng)細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)棕黃色為陽性信號。上述結(jié)果均需經(jīng)兩位以上的病理主治醫(yī)師進(jìn)行判斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)均采取SPSS19.0軟件計算，其中應(yīng)用“X?”、“t”對其檢驗，采用“%”為計數(shù)資料、“”為計量資料均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差。如P值<0.05，證明對比具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各個細(xì)胞癌標(biāo)本中在免疫組化中的陽性例數(shù)，詳見表1

2.2 各免疫指標(biāo)在診斷各項細(xì)胞癌方面的靈敏度顯示，P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細(xì)胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，；CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），詳見表2、3、4。

3 討論

近年來，國內(nèi)外研究表明，多個抗體組合腳單種抗體在肺癌組織學(xué)分類診斷中的臨床應(yīng)用價值高。因此，如何尋找出一種最優(yōu)的抗體組合應(yīng)用在肺癌分型診斷中至關(guān)重要。

TTF-1作為一種甲狀腺特異性增強子結(jié)合蛋白在甲狀腺和肺發(fā)育過程中表達(dá)組織特異性轉(zhuǎn)錄因子。由于該抗體具有較強的組織特異性，因此可鑒別原發(fā)性及轉(zhuǎn)移性肺癌的標(biāo)志物，尤其是對轉(zhuǎn)移性腺癌是否為肺源性診斷較為明顯。本研究TTF-1在診斷肺腺癌方面靈敏度為44.68%，與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致[2，3]。P63定位在人類染色體，廣泛在人和鼠組織中表達(dá)，其中對宮頸、泌尿道等具有鱗狀上皮分化潛在能力的基底細(xì)胞和旁基層細(xì)胞中具有選擇性的表達(dá)。研究表明，P63對肺鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中作用明顯。本研究中發(fā)現(xiàn)P63在診斷肺鱗狀細(xì)胞癌方面靈敏度為79.07%，與相關(guān)文獻(xiàn)報道一致[4]。CD56作為一種免疫球蛋白，是神經(jīng)細(xì)泡黏附分子的CD分子。定位在細(xì)胞膜，尤其是神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞。本研究CD56在診斷小細(xì)胞癌方面靈敏度為100%，且該抗體結(jié)合HE形態(tài)可有效鑒別小細(xì)胞癌與非小細(xì)胞癌。癌胚抗原（CEA）作為一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，該抗體一直作為腸道系統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物。近年來，有研究表明，CEA對肺癌的分期和分型存在臨床意義。此外，也有研究表明細(xì)胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌以及細(xì)胞角蛋白5/6在診斷肺鱗癌中均具有一定意義[5，6]。本研究選擇抗體時將CEA、CK18聯(lián)合TTF-1診斷肺腺癌，將CK5/6聯(lián)合P63診斷肺鱗狀細(xì)胞癌。結(jié)果顯示，癌胚抗原（CEA）和細(xì)胞角蛋白18（CK18）在診斷肺腺癌方面存在一定意義（91.49%），但細(xì)胞角蛋白18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%）。P63聯(lián)合CK5/6診斷鱗細(xì)胞癌靈敏度明顯優(yōu)于單種抗體，故在鑒別診斷肺鱗細(xì)胞癌時可選擇聯(lián)合應(yīng)用P63和CK5/6。CK18、CEA、TTF-1診斷腺癌方面的靈敏度（91.49%）優(yōu)于單用抗體的靈敏度（21.28%、55.32%、44.68%），故在鑒別診斷肺腺癌時可選擇聯(lián)合應(yīng)用CK18、CEA、TTF-1，但CK18對肺腺癌的靈敏度并不明顯（21.28%），因此在鑒別肺腺癌時可聯(lián)合用CEA和TTF-1。

綜上所述，在對肺癌診斷以及鑒別肺癌組織學(xué)分型中，P63、CK5/6、CK18、CEA、TTF-1具有重要臨床意義。

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