栽培及野生粗莖秦艽質量研究
——兼論秦艽質量標準

陶愛恩，張曉燦，李 楊，羅丹丹，段寶忠

（大理大學藥學與化學學院，云南大理 671000）

粗莖秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.）是傳統大宗商品藥材，需求量大，為2015年版藥典秦艽收載的基原物種之一，被列入《國家重點保護野生藥材物種名錄》，具有祛風濕、清濕熱、止痹痛、退虛熱之功效〔1〕。粗莖秦艽在云南已有超過60年的種植歷史〔2〕，近年來，對云南栽培粗莖秦艽的質量研究已有報道〔3-7〕，這些研究資料表明，其有效成分與秦艽（G.macrophylla Pall.）相近，抗炎、鎮痛效果優于藥典收載的另外3種秦艽〔8-9〕，且產量有明顯優勢〔3，5，8，10〕。因此，大力發展粗莖秦艽栽培是推進秦艽產業可持續發展的必然途徑。在研究過程中發現，粗莖秦艽栽培品性狀與中國藥典秦艽性狀描述有差異，一定程度上阻礙了粗莖秦艽藥材的市場流通。鑒于此，對粗莖秦艽栽培品及野生品的質量進行比較研究，以期為秦艽質量標準的修訂提供參考。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器與試劑 1200 HPLC高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）、Agilent Zorbax SB C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；KQ-5200DB 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；GH-252型電子分析天平（A&D，深圳市盛美儀器有限公司）；Nikon E-400顯微鏡（日本尼康公司）；TS-12D生物組織自動脫水機（上海隆拓儀器設備有限公司）；BM-Ⅶ生物組織包埋機（北京佳源興業科技有限公司）；QS-Ⅳ生物組織切片機（武漢宏強醫療器械有限公司）；CS-Ⅵ生物組織攤片烤片機（孝感市電子儀器廠）；SmartV250D數字攝像機；OLYMPUSBX-41生物顯微鏡；Canon EOS 70D數碼單反相機。甲醇、乙腈為色譜純（Fish?er Scientific，Fairlawn New Jersey），水為超純水，其他試劑為分析純。

1.2 材料 粗莖秦艽樣品采集或購于云南、西藏及四川等地，經大理大學段寶忠副教授鑒定為粗莖秦艽（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk．），憑證標本保存于大理大學中藥標本館，樣品信息見表1；對照品購于成都曼斯特有限公司。

2 方法

2.1 性狀及顯微鑒別 取栽培和野生粗莖秦艽藥材，觀測藥材的形狀、大小、顏色、質地、斷面、氣味等性狀特征。采用常規石蠟制片法制作石蠟切片〔11〕，觀察橫切面組織結構，藥材粉碎后觀察顯微粉末特征。

表1 粗莖秦艽樣品表

2.2 浸出物測定 用乙醇作為提取溶劑，參照醇溶性浸出物測定法（《中華人民共和國藥典》2015年版通則2201）項下的熱浸法測定〔1〕。

2.3 含量測定及指紋圖譜數據分析 色譜條件、供試品溶液制備等參照文獻〔6〕進行，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》2004 A版軟件分析指紋圖譜數據。

3 結果

3.1 藥材性狀

3.1.1 野生品 呈類圓柱形，上粗下細，扭曲不直，長10～30 cm，直徑1～3 cm。表面黃棕色或灰黃色，有縱向或扭曲的縱皺紋，頂端有殘存莖基及纖維狀葉鞘。質硬而脆，易折斷，斷面略顯油性，皮部黃色或棕黃色，木部黃色。氣特異，味苦、微澀。

3.1.2 栽培品 與野生品比較，栽培品較長，支根多。表面顏色較淺，栓皮膜質，易脫落；斷面皮部和木部顏色較淺，質地較野生柔韌。野生品及栽培品藥材性狀見圖1。

圖1 野生及栽培粗莖秦艽藥材性狀圖

圖2 野生品及栽培品根橫切顯微特征

3.2.2 粉末特征 二者粉末顏色有微小差異，野生品粉末呈暗棕黃色，栽培品粉末呈白色。從顯微特征來看，二者無明顯差異，見圖3。其特征為：栓化細胞較多，淡黃色，表面觀呈類多角型、類長方形或不規則形，直徑20～180 μm，壁薄，略彎曲，平周壁有橫向細紋理，胞腔內含油滴狀物。內皮層細胞大，長可達500 μm，多破碎，表面觀呈類長方形，側壁細波狀彎曲，平周壁可見纖細的橫向線狀紋理。導管較多，直徑10～50 μm。草酸鈣晶體散存于薄壁細胞中。

3.2 顯微結構特征

3.2.1 橫切面特征 與栽培品相比，野生品外周皮以外的組織多脫落，其他結構特征無明顯差異，見圖2?？梢钥闯觯簝烧吒鶛M切面結構從外到內分別為表皮、內皮層、韌皮部及木質部，中心無髓，射線不明顯。根外周皮木栓細胞縱向略延長，內皮層細胞表面觀呈類方形，壁近平直；韌皮部寬闊，細胞多呈類圓形，外側的較大，細胞間隙明顯，內側細胞排列整齊和緊密；形成層明顯，由3～4列切向延長的扁平薄壁細胞組成，排列緊密整齊；木質部由不木化木薄壁細胞和木化的導管組成，導管散在或數個成群。

圖3 野生及栽培品粉末顯微特征圖

3.3 化學指紋圖譜與相似度 將12批野生品色譜圖（樣品號CY-1～CY-12）導入中藥指紋圖譜軟件，生成野生品指紋圖譜，見圖4A。以CY-8號藥材圖譜作為參照譜進行匹配，生成野生品共有模式指紋圖譜，見圖4B。將12批野生品及10批栽培品與共有模式指紋圖譜比較計算相似度，結果顯示，12批野生品和10批栽培品的相似度均大于0.942，見圖5，表明二者化學指紋相似度較高。

圖4 野生品色譜指紋及共有模式圖

圖5 栽培及野生品與共有模式圖譜比較相似度結果圖

3.4 浸出物及含量 研究結果顯示，12批野生品及10批栽培品的浸出物含量在27.41%～40.46%之間，平均值33.25%，其中30%以上有20批，占90.90%，全部符合《中華人民共和國藥典》2015年版秦艽“浸出物”規定（≥20%）。見表2。

含量測定結果顯示，12批野生品及10批栽培品中馬錢甘酸和龍膽苦苷總含量在4.15%～16.80%之間，所有樣品均符合《中華人民共和國藥典》2015年版秦艽“含量要求”（≥2.5%）。10批栽培品的含量在7.42%～13.92%之間，可見栽培品的含量范圍較野生品小，表明栽培粗莖秦艽的質量更趨于穩定。

表2 22批樣品浸出物及含量測定結果

4 討論

本研究對粗莖秦艽野生品及栽培品的性狀、顯微特征、化學指紋、浸出物和含量進行了比較，結果顯示二者在顯微結構、化學指紋、浸出物和有效成分含量等方面均無明顯差異，僅在性狀方面有微小差異。生長環境、采挖年限等可能是形成栽培品與野生品性狀差異的原因。對照《中華人民共和國藥典》2015年版秦艽質量標準，栽培品除性狀特征不符合標準外，其他項目均符合要求，且有效成分含量為藥典標注的2倍之多。栽培品指紋圖譜與野生品共有模式比較，相似度均大于0.942，表明栽培品質量均一。大量的研究已表明無論是栽培還是野生撫育的粗莖秦艽，其藥材質量均較好〔3-4〕。粗莖秦艽藥材根粗大、較長，色黃，品質較西北出產者為佳〔2〕，產量也具有明顯優勢。鑒于此，建議秦艽質量標準修訂時，對性狀進行補充和完善，這將對推進秦艽藥材質量標準的應用具有重要意義。

〔1〕國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部〔M〕.北京：中國醫藥科技出版社，2015：270-271.

〔2〕曾育麟.云南的秦艽〔J〕.中藥通報，1959，5（2）：66.

〔3〕段寶忠，黃林芳，尚飛能，等.云南野生撫育粗莖秦艽藥材的品質評價〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2013，19（21）：82-86.

〔4〕吳靳榮，趙志禮，王妍妍，等.云南麗江產粗莖秦艽栽培品種的品質評價〔J〕.中成藥，2010，32（2）：250-252.

〔5〕曹曉燕，王喆之.云南粗莖秦艽不同采收期4種環烯醚萜苷類成分的測定〔J〕.藥物分析雜志，2010，30（4）：623-625.

〔6〕張曉燦，李楊，羅丹丹，等.基于指紋圖譜和化學計量學的多基原秦艽藥材化學品質比較研究〔J〕.大理大學學報，2017，2（6）：37-40.

〔7〕張曉燦，段寶忠，羅丹丹，等.不同海拔粗莖秦艽環烯醚萜苷類成分含量研究〔J〕.大理大學學報，2017，2（8）：13-17.

〔8〕曹曉燕.秦艽種質資源研究〔D〕.西安：陜西師范大學，2010.

〔9〕崔景榮，趙喜元，張建生，等.四種秦艽的抗炎和鎮痛作用比較〔J〕.北京醫科大學學報，1992，24（3）：225-227.

〔10〕聶燕瓊，李海彥，孫娜，等.粗莖秦艽資源研究進展〔J〕.中國現代中藥，2012，14（5）：37-40.

〔11〕楊月娥，劉亞玲，田新雁，等.五種云南黃芪屬植物的生藥學研究〔J〕.時珍國醫國藥，2014，25（12）：2924-2927.