歐李仁提取物體外降糖作用研究

張 玲，張江寧，丁衛(wèi)英，楊 春，王宇婷

（山西省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，山西太原 030031）

0 引言

α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶是影響體內(nèi)對碳水化合物消化和吸收的2種關鍵酶，抑制這2種酶的活性，可以限制胃腸道對碳水化合物的降解和對葡萄糖的吸收，從而可以有效地抑制餐后血糖的快速升高[1-2]。不僅能夠調(diào)節(jié)糖類代謝，又能延緩糖尿病的發(fā)生和發(fā)展。目前，糖尿病尚無理想的治療方法，傳統(tǒng)的降糖藥長期服用會有一定的毒副作用，所以從天然產(chǎn)物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制劑成為近年來的研究熱點[3]。研究表明，具有抑制這2種酶的天然產(chǎn)物中大多都富含黃酮、多酚、多糖等，如楊梅果實酚類物質(zhì)[4]、海藻多糖[5]、花粉黃酮[6]等。

歐李（Cerasus humilis（Bge.）kernel）為薔薇科櫻桃屬，是我國特有的一個古老野生灌木果樹樹種，其果實富含礦質(zhì)營養(yǎng)，其中鈣含量為當今水果之冠，故又名鈣果。歐李果實近年來的開發(fā)應用及深加工多集中于果汁、果脯、果酒、果醋等的制備中[7]。果實加工后會產(chǎn)生大量的果仁，而果仁也具有很高的營養(yǎng)和藥用價值[8-10]。歐李仁也是我國醫(yī)書中記載的一種常用藥（郁李仁），可治療津枯腸燥、食積氣滯、腹脹便秘、水腫、腳氣、小便不利等[11]。對歐李仁提取物降糖作用進行初步研究可為歐李資源的綜合利用，以及從天然產(chǎn)物中提取高效的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制劑的開發(fā)與應用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

歐李仁，采自山西農(nóng)業(yè)大學園藝果園；苦杏仁苷、α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、pNPG（4-硝基苯基-B-D-吡喃葡萄糖苷）阿卡波糖，Sigma公司提供；DNS顯色劑和其他試劑均為分析純。

粉碎機、離心機、756型紫外-可見分光光度計、磁力攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。

1.2 試驗方法

1.2.1 乙醇和水提取液的制備

稱取樣粉10 g，分別用200 mL 75%乙醇和水在45℃下磁力攪拌提取3 h，超聲波提取20 min，以轉(zhuǎn)速4 800 r/min離心10 min；收集上清液、濃縮并定容至100 mL。

1.2.2 乙醇和水提取液活性成分含量測定

主要包括苦杏仁苷的測定[12]、粗多糖的測定[13]和總黃酮的測定[14]。

1.2.3 對α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的測定

參考文獻[15]并稍作改動。依次在試管中加入400 μL pH值6.8的磷酸緩沖液，200 μL樣品溶液和200 μL α-葡萄糖苷酶溶液（0.13U/L），混勻，于37℃條件下水浴反應15 min，而后加入2.5 mmol/L的pNPG溶液400 μL，繼續(xù)在37℃條件下水浴反應15 min，最后加入5 mL 0.1 mol/L的碳酸鈉溶液終止反應。于波長405 nm處測定其吸光度。以阿卡波糖作為陽性對照，制作標準曲線。

式中：A1——緩沖溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+樣品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

A2——緩沖溶液+樣品溶液+pNPG溶液+Na2CO3溶液；

Ac——緩沖溶液+α-葡萄糖苷酶溶液+

pNPG溶液+Na2CO3溶液。

1.2.4 對α-淀粉酶活性抑制能力的測定

參考文獻[16]并稍作改動。將0.5 mL待測樣品與0.5 mL的α-淀粉酶溶液加入試管中，在37℃條件下水浴反應30 min，加入1%的淀粉溶液1 mL，繼續(xù)在37℃條件下水浴反應15 min，水浴反應結束后，立即加入1 mL DNS顯色劑，沸水浴5 min后冷卻至室溫。加入10 mL蒸餾水稀釋混勻，于波長540 nm處測定其吸光度。以阿卡波糖作為陽性對照，制作標準曲線。

式中：B1——α-淀粉酶溶液+樣品+淀粉溶液+DNS顯色劑；

B2——α-淀粉酶溶液+樣品+DNS顯色劑；

Bc——α-淀粉酶溶液+淀粉溶液+DNS顯色劑。

2 結果與分析

2.1 歐李仁提取物活性成分測定

歐李仁提取液活性成分見表1。

表1 歐李仁提取液活性成分/mg·100 mL-1

從表1可以得知，歐李仁乙醇提取液的總黃酮、粗多糖和苦杏仁苷均高于水提取液，尤其是苦杏仁苷含量，乙醇提取液其含量可達62.6 mg/100 mL。

2.2 阿卡波糖對α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶抑制率的影響見圖1，阿卡波糖對α-淀粉酶抑制率的影響見圖2。

圖1 阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶抑制率的影響

圖2 阿卡波糖對α-淀粉酶抑制率的影響

從圖1可知，質(zhì)量濃度為10 mg/mL的阿卡波糖對0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率可達到78.89%，隨著質(zhì)量濃度降低，其抑制率也逐漸下降，8倍稀釋后其抑制率下降為36.39%。

從圖2可知，質(zhì)量濃度為1 mg/mL的阿卡波糖對1 U/mL的 α-淀粉酶的抑制率可高達93.52%；同樣隨著稀釋倍數(shù)的增加，其抑制率也逐漸下降，8倍稀釋后其抑制率下降為54.78%。

從圖1和圖2可以看出，阿卡波糖對α-淀粉酶的抑制率明顯高于對α-葡萄糖苷酶的抑制率，此結論與文獻[17]的研究結果相同。

2.3 歐李仁提取物對α-葡萄糖苷酶抑制能力的分析

歐李仁不同提取物對α-葡萄糖苷酶抑制率的影響見圖3。

圖3 歐李仁不同提取物對α-葡萄糖苷酶抑制率的影響

從圖3得知，歐李仁乙醇提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制率高于水提物和10 mg/mL的阿卡波糖的抑制率。同樣質(zhì)量濃度下，未經(jīng)稀釋的乙醇提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制率可達到80%以上，而水提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制率則小于80%，與質(zhì)量濃度10 mg/mL的阿卡波糖對0.132 U/mL的α-葡萄糖苷酶抑制率相近。隨著質(zhì)量濃度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制率也逐漸降低。

2.4 歐李仁提取物對α-淀粉酶抑制能力分析

歐李仁不同提取物對α-淀粉酶抑制率的影響見圖4。

圖4 歐李仁不同提取物對α-淀粉酶抑制率的影響

從圖4可知，歐李仁乙醇提取物對α-淀粉酶的抑制率明顯高于水提物的抑制率。同樣質(zhì)量濃度下，未經(jīng)稀釋的乙醇提取物對α-淀粉酶的抑制率可高達95%以上，而水提取物對α-淀粉酶的抑制率為74%左右，乙醇提取物質(zhì)量濃度經(jīng)8倍稀釋后，其抑制率還可達到58%左右，相當于0.14 mg/mL左右的阿卡波糖對α-淀粉酶的抑制率，而水提取物同質(zhì)量濃度下，其抑制率已下降為37%左右。同樣，隨著質(zhì)量濃度下降，乙醇提取物、水提取物和阿卡波糖三者對α-淀粉酶的抑制率也逐漸降低。

3 結論

以歐李仁為原料，α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率為指標，并以阿卡波糖作為陽性對照，研究其醇提物和水提物的降糖作用。歐李仁活性提取物對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶都有一定的抑制作用，歐李仁乙醇提取物對這2種酶的抑制率高于水提物，這可能是因為其醇提物中總黃酮、粗多糖、苦杏仁苷等活性成分的含量高于水提物。另外，歐李仁乙醇提取物原質(zhì)量濃度下對α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率為84.05%和95.95%，分別相當于對12 mg/mL左右的阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的抑制率和1 mg/mL左右的阿卡波糖對α-淀粉酶的抑制率，表明歐李仁提取物有一定的降糖作用，其體內(nèi)降糖機理還有待進一步研究。

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