硒結合蛋白1在肝癌中的表達及其臨床意義

楊子榮，劉 城，張 孟，于慶功

(大連大學附屬中山醫院 消化內科，遼寧 大連116001)

硒(Se)是維持人體健康的一種重要微量元素，主要以硒代半胱氨酸形式存在并在多種蛋白質翻譯過程中起關鍵作用[1,2]，主要以其抗氧化活性、化學防護、抗炎以及抗病毒性質等治療作用而被廣泛認知[3,4]，硒的攝入量不足可增加患癌風險。研究表明存在一種特殊的含硒蛋白質即硒結合蛋白(selenium binding protein,SBP)，目前已知SBP家族包括SBP1、SBP2和SBP3[5]。其中SBP1的表達下調與多種癌癥的發生發展密切相關[6-11]，但SBP1與肝癌臨床病理因素的關系尚未見報道。本文通過檢測SBP1在肝癌及非癌肝組織芯片中的表達，并分析肝癌組織中SBP1表達與其臨床病理因素的關系，進而探討其在肝癌發生、發展及侵襲轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

組織芯片(LVC1501+LVC1502)購自于桂林泛普生物技術有限公司，共包括118例肝細胞肝癌組織和10例非癌肝組織，均雙芯布陣，同時經過公司病理專業人員進行檢查證實。在118例肝癌組織中，女18例，男100例，年齡21-79歲，平均年齡(47.21±12.08) 歲。組織標本在10%中性甲醛緩沖液中固定24 h，按照統一標準加工，固定于美國Superfrost Plus防脫載玻片上，4℃保存。

1.2 免疫組化染色

鼠抗人SBP1單克隆抗體(產品編號M061-3)購自于日本MBL公司，有效工作濃度為2 μg/ml。SP免疫組化染色按照SP試劑盒實驗步驟說明書進行操作。空白對照采用PBS液代替一抗，陰性對照使用非免疫血清代替一抗，采用已知陽性標本作陽性對照。

1.3 結果判斷

SBP1的表達部位主要在細胞漿和細胞核，非特異性著色的細小棕黃色顆粒并且染色強度高于背景的細胞為陽性細胞，與陰性對照一致或無染色的細胞為陰性細胞。每張切片隨機選取10個高倍鏡視野(400×)進行閱片，計算出每1000個細胞中的陽性細胞數，根據陽性細胞百分數和染色強度對每張切片進行分級：細胞數計分0分(<5%)，1分(<5%-25%)，2分(<26%-50%)，3分(<51%-75%)，4分(>75%)；染色強度0分(不著色)，1分(弱)，2分(中)，3分(強)；組織化學染色積分(細胞數計分和染色強度計分的乘積)：≤1分為陰性，>1分為陽性(2-4分為弱陽性，6-8分為陽性，9-12分為強陽性)[12]。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 肝癌及非癌肝組織中SBP1的表達

SBP1主要表達于肝癌細胞的胞漿和胞核，呈淡黃色至棕黃色顆粒沉淀，SBP1在肝癌組織中表達的陽性率為50.85%(60/118)，而在10例非癌肝組織中的9例為陽性表達(見圖1)。

A：SBP1在非癌肝組織中的陰性表達；B：SBP1在非癌肝組織中的陽性表達；C：SBP1在高分化肝癌中的陰性表達；D：SBP1在高分化肝癌中的陽性表達；E：SBP1在低分化肝癌中的陰性表達；F：SBP1在低分化肝癌中的陽性表達

圖1肝癌及非癌肝組織中SBP1的表達(SP200×)

2.2 SBP1與肝癌臨床病理特征的關系

SBP1蛋白的表達與肝癌的腫瘤大小、浸潤深度以及TNM分期顯著相關(P<0.05)，而與年齡、性別、分化程度、淋巴結轉移無關(P>0.05)，見表1。

表1 SBP1與肝癌患者臨床病理特征之間的關系

3 討論

微量元素硒(Se)最早是在1817由瑞典化學家Berzelius發現，并把它命名為Selene，希臘語，月亮女神的意思。硒(Se)是人體必需的必需微量元素，參與多種生物過程，主要以硒代半胱氨酸形式參與多種蛋白質翻譯，并在細胞防御和激素調節中起到關鍵作用[13]。研究表明存在一種特殊含硒蛋白質即硒結合蛋白(seleniun binding protein,SBP)，目前已知SBP家族包括SBP1、SBP2和SBP3[5]。SBP1 (Selenium-binding protein 1，硒結合蛋白1)為SBP家族成員之一，最初是在利用Se識別硒蛋白的實驗中從小鼠肝臟中首次被發現[14]，人SBP1(或稱hSP56)的編碼基因位于lq21-22，分子量56 kD，與鼠SP56基因同源[1,15]。SBPl在肝、肺、胰、甲狀腺的正常組織中高表達，其參與高爾基體晚期蛋白轉運，并有抑制細胞增殖作用；SBP1的轉錄隨硒元素含量增加上升，增加硒元素攝入量可增強機體對癌癥的抵抗力[1,15]。

SBP1同樣也是SBP家族中比較特殊的一員，同相應正常組織相比，它在很多腫瘤組織中表達減少，SBP1可能是作為一種抑癌基因在腫瘤的發生、發展中發揮著重要作用[15]。Chen等[6]研究顯示，SBP1 mRNA和蛋白的表達水平與肺腺癌分化程度、浸潤深度、部位有關，低分化與中高分化相比、T2-T4與T1相比、支氣管源性與支氣管肺泡源性相比，SBP1 mRNA和蛋白表達水平顯著降低，低水平的SBP1蛋白表達與患者低生存率相關顯著。Huang[7]等通過膜蛋白質組分析的方法，發現SBP1在卵巢癌中的表達明顯減少，推測SBP1表達下調是卵巢癌發生的早期事件，具有成為判斷卵巢癌患者不良預后標志物的可能性。Kim[9]等則推測SBP1表達抑制可能是結直腸癌發生的頻繁和晚期事件，SBP1在結直腸癌中的表達顯著下調，SBP1低表達的結直腸癌患者的生存率明顯減低。不同的是，張錦等[16,17]研究發現，食管鱗癌組織中SBP1表達水平明顯低于癌旁組織(P=0.000)，SBP1的表達與ESCC患者的年齡、性別、分化程度、臨床分期、淋巴結轉移和浸潤深度均無關(P>0.05)；SBP1蛋白表達減少與胃癌患者臨床分期相關(P<0.05)，而與患者的年齡、性別、腫瘤組織學分型、分化程度、浸潤深度以及淋巴結轉移無關(P>0.05)。

本實驗通過組織芯片和免疫組化染色技術，顯示在118例肝癌組織中，SBP1有60例陽性表達，陽性表達率為50.85%，與以往研究結果基本一致。通過臨床病理參數分組及組間χ2檢驗，顯示肝癌組織中SBP1的表達與腫瘤大小、浸潤深度、腫瘤TNM分期顯著相關，與分化程度(P=0.079)和淋巴結轉移(P=0.059)邊緣性相關，而與年齡、性別無關。其中，腫瘤(直徑)大于等于5厘米的SBP1陽性表達率顯著低于腫瘤小于5厘米的SBP1陽性表達率。此外，腫瘤的TNM分期在I和II期的SBP1陽性表達率顯著高于III和IV期的SBP1陽性表達率。另外，腫瘤的浸潤深度處于未穿透臟腹膜的SBP1陽性表達率顯著地高于腫瘤的浸潤深度處于穿透臟腹膜的SBP1陽性表達率。

目前SBP1在機體內影響肝癌的生物學機制仍不清楚，具體是否通過上游調控因子調控，以及其量的改變發生于轉錄之前或之后等一系列問題，還需要我們進一步研究。

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