腦梗塞患者血清可溶性內皮細胞蛋白C受體和血管性假性血友病因子的表達及臨床意義

趙志強,崔妍妍

(1.南京醫科大學附屬蘇州醫院 檢驗科,江蘇 蘇州215001;2.蘇州大學附屬兒童醫院 檢驗科,江蘇 蘇州215003)

腦梗塞又稱缺血性腦卒中,是由于局部腦動脈血流突然減少或停止,造成腦組織缺血缺氧,甚至壞死,引起腦功能缺損的血管性事件[1]。腦梗塞發病兇險、致殘率和致死率高,對人類健康危害巨大。腦梗塞病變機制復雜,目前尚未完全闡明,研究發現腦梗塞患者大多有血管壁、血流變或血液性質的病變,引起血管管腔狹窄、閉塞或血栓形成[2]。可溶性內皮細胞蛋白C受體(soluble endothelial protein C receptor,sEPCR)是近年來發現的由大血管內皮細胞合成并分泌的新型蛋白受體[3]；血管性假性血友病因子(von Willebrand factor ,vWF)是主要由血管內皮細胞合成的糖基化蛋白[4]。兩者在一定程度上反應內皮損傷,而內皮功能受損是許多血管事件的始動環節[5],但對兩者生物學功能的研究仍不完全,在各種疾病尤其是心腦血管疾病中的作用尚未不明確。本研究對腦梗塞患者血清sEPCR和vWF水平檢測分析,探討其在病情判斷、療效和預后轉歸中的價值。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇我院2014年1月-2016年12月收治的50例急性腦梗塞患者為研究對象,其中男性27例,女性23例,男女比1.17∶1,平均年齡(58±9)歲。用美國國立衛生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS )評估患者神經功能缺損情況,NIHSS≤3分者為輕度腦梗塞,>3且≤8分為中度腦梗塞,>8分者為重度腦梗塞。所有患者均在發病24hr內就診,均符合中華醫學會關于急性腦梗塞中的診斷標準[6]并經影像學檢查確認,2周內未服用過抗凝和抗血小板聚集藥物。另選擇我院同期50例退休體檢人員為對照組,其中男35例,女15例,男女比2.33∶1,平均年齡(61±8)歲,無嚴重基礎性疾病,2周內未服用過抗凝和抗血小板聚集藥物。兩組入選者各一般資料之間具有可比性。

1.2儀器和試劑sEPCR和vWF檢測試劑盒購自南京建成生物科技有限公司。DNM-9606型全自動酶標儀購自北京普朗醫用設備有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集 所有納入本次研究者均晨起空腹抽取2 ml靜脈血于干燥管,2 000 rpm離心5 min分離血清,置4℃冰箱保存待測。

1.3.2血清sEPCR和vWF檢測 采用酶聯免疫吸附試驗雙抗體夾心法檢測sEPCR和vWF濃度,根據試劑盒規程說明進行操作。利用標準蛋白濃度繪制標準曲線,得到吸光度(OD值)與濃度的計算方程,根據公式計算各標本sEPCR和vWF濃度。

1.3.3治療 所有患者在明確診斷后盡早給予溶栓治療,起病3hr內的患者給予重組組織型纖溶酶原激活劑溶栓,按0.9 mg/kg體重給藥(最大不超過90 mg),前1 min內推注10%,余者1 h內靜脈滴注；起病3-6 h內患者給予尿激酶靜脈滴注,將150萬單位尿激酶溶于200 ml生理鹽水,30 min內注射完。用藥期間密切監護患者各項生命體征。如有必要,在溶栓24 h后進行進一步抗凝治療,配合20%甘露醇降低顱內壓,同時給予其他對癥和支持治療,治療前和治療2周后進行血清sEPCR和vWF檢測。

1.4統計學方法用SPSS11.0軟件對結果分析處理,計量資料用均數±標準差表示,兩組間均值比較采用Student’s T檢測,相關分析采用Pearson相關分析,P<0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1腦梗塞患血清sEPCR和vWF水平

由表1可見,與對照組相比,腦梗塞患者血清sEPCR(t=7.678,P=0.003)和vWF水平顯著升高(t=10.565,P=0.001)。

表1 腦梗塞患者與對照組血清sEPCR和vWF(μg/L)

**與對照組相比P<0.005

2.2腦梗塞患者治療前后血清sEPCR和vWF水平

由表2可見,經2周溶栓、抗凝等對癥治療后,腦梗塞患者血清sEPCR(t=5.465,P=0.004)和vWF(3.262,P=0.038)水平較治療前顯著下降。

表2 腦梗塞患者治療前后血清sEPCR和vWF(μg/L)

**與治療前相比P<0.005,*與治療前相比P<0.05

2.3不同嚴重程度的腦梗塞患者血清sEPCR、vWF水平

根據NIHSS評分,輕度、中度和重度腦梗患者治療前血清sEPCR濃度分別為(113.76±7.47)μg/L、(125.43±9.62)μg/L和(148.23±8.57)μg/L,vWF 濃度分別為(8.65±2.47) μg/L、(10.43±3.62) μg/L和(14.72±4.56) μg/L(表3)。結果顯示,隨著腦梗塞嚴重程度升高,血清sEPCR和vWF濃度升高,兩者呈正相關,相關系數分別為0.628和0.496,P<0.05。

表3 不同嚴重程度的腦梗塞患者血清sEPCR、vWF水平(μg/L)

根據出院6月后隨訪結果,經治療后患者血清sEPCR和vWF濃度越低,肢體運動功能和神經功能恢復越好,后遺癥越輕,提示我們治療后血清sEPCR和vWF與腦梗塞患者預后密切相關。治療后的血清sEPCR和vWF水平越高,后遺癥越重,表現出一定程度正相關性,相關系數分別為0.437和0.378,P<0.05(表4)。

表4 治療后血清sEPCR和vWF水平與后遺癥(μg/L)

3 討論

腦梗塞是發展中國家引起成人致死和致殘的第二大因素,據報道我國每年有超過150萬腦梗塞新發病例,且這一數字還在逐年增長。腦梗塞發病機制復雜,其中動脈粥樣硬化引起的腦梗塞最為常見[7]。近來研究表明,內皮損傷和凝血系統失衡可能在腦梗塞中發揮重要作用。

蛋白C(PC)是一類維生素K依賴性蛋白酶原,與細胞表面EPCR結合后,激活成為APC。APC不但能使凝血因子Va和VIIIa失活,發揮抗凝作用[8]；還可以與膜連內皮細胞蛋白C受體或蛋白酶活化受體結合,發揮抗感染作用。免疫組化顯示,僅在表達EPCR的血管表面檢出PC,說明蛋白C的活化依賴膜連EPCR,無論APC發揮抗凝或抗炎作用,都必須要有膜連內皮細胞蛋白C受體的參與[9]。動脈粥樣硬化(AS)是腦梗塞的基礎病變,而炎癥反應在AS中起重要作用。在腦梗塞小鼠模型中發現APC能通過下調血腦屏障粘附因子的表達,阻斷白細胞通過血腦屏障,減輕腦梗塞后的腦組織炎癥反應[10]。一些研究發現,血清sEPCR與膜連EPCR的功能相反,這也與我們的研究結果吻合。我們的研究中腦梗塞患者血清sEPCR濃度顯著升高,經有效治療后血小板在病損處過度活化聚集被糾正,炎癥反應減輕,sEPCR濃度顯著降低,且血清sEPCR濃度直接關系患者的預后,提示sEPCR可能參與體內高凝狀態的形成和局部炎癥損傷,是反應腦血管病變程度的良好指標。Yesilirmak DC等認為血清sEPCR可作為評估大血管疾病進展和治療效果的一個指標,但其在腦梗塞中的作用和機制目前仍未完全明確,需進一步深入研究[11]。

vWF是反映內皮損傷和功能障礙的另一重要標志。AS斑塊可引起血小板粘附和聚集,在狹窄部位促進vWF與血小板膜糖蛋白受體結合,促進局部形成血栓[12]。腦梗急性發作前,患者大多已處于高血壓、高血脂、糖尿病等異常狀態,內皮細胞受損時,vWF大量釋放,引起血小板在損傷部位粘附和聚集[13]。暢慧君等研究發現,除了引起病理性纖維蛋白形成和血小板激活,vWF升高還和腦梗塞的分型、分期有關[14]。我們的研究發現,腦梗塞患者血清vWF水平顯著高于正常對照組,表明腦梗塞急性發作時存在嚴重的內皮損傷,血小板活化,導致其聚集率顯著增高；經過有效治療,血小板的聚集率明顯降低,vWF濃度也明顯下降；vWF水平與腦梗塞神經功能評分結果有關,vWF水平越高,神經功能缺損越嚴重。vWF的監測對于腦梗溶栓、抗凝治療均有重要價值,可能作為病情預測及判斷的一個指標。

結合文獻報告和我們的研究結果,我們提出sEPCR和vWF可能通過引起血小板活化、聚集,使血液呈高凝狀態,并加重梗塞部位炎癥反應,參與腦梗塞的損傷過程,未來需要更多實驗對sEPCR和vWF參與腦梗塞損傷的機制做進一步研究。

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