凝血酶敏感蛋白-1以及血管內(nèi)皮生長因子檢測在肺癌患者中的應(yīng)用價值分析

薛鴻濤 任 敏 李 艷

近年來，由于空氣污染和生活方式的改變，肺癌的發(fā)病率和病死率呈逐年升高的趨勢[1]。因此，對肺癌進(jìn)行預(yù)測和監(jiān)測尤其重要，而傳統(tǒng)的腫瘤、淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis，TNM)分期方法并不能完全準(zhǔn)確的監(jiān)測肺癌進(jìn)展過程，故尋找判斷肺癌發(fā)生、發(fā)展的生物學(xué)指標(biāo)是臨床研究重點[2]。

肺癌是一種富含豐富血管的腫瘤，其進(jìn)展與新生血管形成密切相關(guān)，而新生血管的形成有賴于血管形成促進(jìn)因子和抑制因子的平衡來實現(xiàn)，可以在一定程度上反映腫瘤細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移[3]。為此，本研究針對肺癌患者具有代表性的血管形成促進(jìn)因子血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和抑制因子凝血酶敏感蛋白-1(thrombin sensitive protein-1，TSP-1)的水平進(jìn)行檢測，探討血小板中血管形成調(diào)節(jié)因子在肺癌發(fā)展中的臨床應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年6月至2016年9月漢中市中醫(yī)醫(yī)院收治的90例肺癌患者，按照病理診斷結(jié)果將其分為肺癌轉(zhuǎn)移組(47例)和肺癌未轉(zhuǎn)移組(43例)；同期另選40名健康體檢者納入健康對照組。肺癌轉(zhuǎn)移組中男性27例，女性20例；平均年齡(59.15±16.56)歲；身體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)為24.75±5.12。肺癌未轉(zhuǎn)移組中男性25例，女性18例；平均年齡(60.35±17.78)歲；平均BMI為25.22±5.23。健康對照組中男性24名，女性16名；平均年齡(58.65±16.16)歲；平均BMI為26.10±5.89。3組一般資料方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理道德委員會批準(zhǔn)，且入組者及其家屬知悉研究內(nèi)容并簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)診斷符合肺癌標(biāo)準(zhǔn)[4]；②年齡為45～75歲。

(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有高血壓、糖尿病等血管病變者；②近3個月感染炎性疾病者。

1.3 儀器與試劑

(1)儀器。Sysmex KX 2100型血球分析儀(日本Sysmex公司)；Anthos 2010酶標(biāo)儀(鄭州安圖生物工程有限公司)；枸櫞酸鹽、茶堿、腺苷和潘生丁(ci trate，theophylline，adenosine，and dipyridamole，CTAD)抗凝管(上?？迫A公司)。

(2)試劑。RIPA裂解液(上海碧云天生物有限公司)；CUSABIO ELISA試劑盒(美國Cusabio Biotech公司)；CATD稀釋液(上?？迫A公司)。

1.4 檢測方法

(1)血液樣本分離提取。所有研究對象均使用CTAD抗凝管采集其空腹靜脈血3 ml，使用Thermo scientific離心機在24 ℃恒溫、3000 r/min條件下離心10 min，將富血小板血漿(platelet-rich plasma，PRP)置于微量離心(eppendorf，EP)管中，并進(jìn)行離心，取上層黃色液體得貧血小板血漿(platelet poor plasma，PPP)置于新EP管中，再次離心，取上層血漿，分裝保存于-80 ℃冰箱待測。將富血小板的下層血小板沉淀后使用CTAD緩沖液沖洗2次后，加入一定量的CTAD緩沖液，通過Sysmex KX 2100血球分析儀進(jìn)行濃度監(jiān)測，調(diào)整血小板計數(shù)為2×108/ml，分裝保存于-80 ℃冰箱待測。

(2)樣本檢測。從低溫冰箱取出血小板懸液和貧血小板血漿，待充分裂解后，在室溫下離心，吸取上清液100 μl與標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定各孔的光密度值，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過光密度值和標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各個樣本濃度，最終轉(zhuǎn)換成每106個血小板表示。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，3組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，血小板中TSP-1、VEGF與肺癌的相關(guān)性采用Spearman分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組貧血小板血漿TSP-1及VEGF水平

3組貧血小板血漿TSP-1及VEGF水平均低于試劑盒檢測限，采用CTAD抗凝血過程中血小板并未發(fā)生活化。

2.2 三組血小板TSP-1及VEGF水平比較

肺癌轉(zhuǎn)移組與肺癌未轉(zhuǎn)移組血小板TSP-1水平均明顯低于健康對照組，VEGF水平明顯高于健康對照組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-11.307、t=-6.295、t=12.851、t=9.732；P＜0.05)；肺癌轉(zhuǎn)移組血小板TSP-1水平明顯低于肺癌未轉(zhuǎn)移組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-5.777，P＜0.05)；VEGF水平明顯高于肺癌未轉(zhuǎn)移組，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.624，P＜0.05)，見表1。

表1 三組血小板TSP-1和VEGF水平比較(±s)

表1 三組血小板TSP-1和VEGF水平比較(±s)

注：表中TSP-1為凝血酶敏感蛋白-1，VEGF為血管內(nèi)皮生長因子。

組別 例數(shù) TSP-1(ng/106PLT) t值 P值 VEGF(pg/106PLT) t值 P值肺癌轉(zhuǎn)移組 47 8.89±2.36ab -11.307 ＜0.05 22.01±6.78ab 12.851 ＜0.05肺癌未轉(zhuǎn)移組 43 12.45±3.43a -6.295 ＜0.05 16.12±5.10a 9.732 ＜0.05健康對照組 40 18.56±5.28 - - 7.64±2.16 - -t值 -5.777 4.624 P值 ＜0.05 ＜0.05

2.3 三組血小板TSP-1和VEGF水平與肺癌的相關(guān)性

采用Spearman分析方法對血小板TSP-1和VEGF水平與肺癌的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，血小板TSP-1與肺癌呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.697，P＜0.05)，血小板VEGF與肺癌呈正相關(guān)性(r=0.757，P＜0.05)。即隨著肺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，血小板TSP-1水平呈下降趨勢，血小板VEGF水平呈上升趨勢。

3 討論

腫瘤的進(jìn)展有賴于腫瘤新生血管的形成，組織原有的血管是形成腫瘤新生血管的基礎(chǔ)，而肺部是實現(xiàn)機體與外界環(huán)境之間氣體交換的主要器官，其豐富的血管為肺部新生血管生長提供了有利條件[5]。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過旁分泌作用血管生長促進(jìn)因子，加快新血管的生成，使其不斷為腫瘤細(xì)胞提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長，反之，腫瘤細(xì)胞同樣可以分泌血管生長促進(jìn)因子，加快腫瘤細(xì)胞的生長[6]。可見，血管生長促進(jìn)因子在腫瘤生長過程中占有重要地位。

血小板中的α顆粒中存在多種血管形成調(diào)節(jié)蛋白VEGF及TSP-1等，有研究顯示，血小板中的VEGF水平遠(yuǎn)高于血漿，因此本研究對血小板中血管形成調(diào)節(jié)因子濃度變化進(jìn)行了檢測，使用CTAD抗凝管收集樣本，3組貧血小板血漿TSP-1及VEGF水平均低于試劑盒檢測限，表明血小板處理過程中并未發(fā)生活化，確保了準(zhǔn)確性[7-8]。VEGF是最有效的促血管生長因子，TSP-1是具有代表性的血管形成抑制因子，正常人體內(nèi)二者維持平衡，但在癌癥患者體內(nèi)存在明顯失衡[9]。本研究結(jié)果顯示，肺癌患者體內(nèi)血小板VEGF水平明顯高于健康對照組，TSP-1水平明顯低于健康對照組，表明VEGF和TSP-1可反映肺癌的發(fā)生。胡金華等[10]研究證實，食管癌患者中也含有升高的VEGF，與本研究結(jié)果類似，提示VEGF和TSP-1對肺癌患者的診斷具有一定意義。

本研究結(jié)果顯示，肺癌轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)VEGF水平明顯高于未轉(zhuǎn)移患者，為進(jìn)一步研究VEGF水平在肺癌患者中的確切作用，對其相關(guān)性進(jìn)行了研究，其結(jié)果顯示，血小板VEGF水平與肺癌存在正相關(guān)性，即隨著肺癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，VEGF呈上升趨勢，表明VEGF可作為肺癌進(jìn)展的有效監(jiān)測指標(biāo)。隨著腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移，腫瘤細(xì)胞不斷合成與分泌VEGF，從而VEGF水平升高[11-12]。此外，當(dāng)血液中的血管生成調(diào)節(jié)蛋白增多時，血小板具有選擇性的吸收血液中VEGF的作用，通過吞噬作用聚集這些蛋白，使得血小板中的VEGF濃度增高。血小板不僅存在大量血管生長促進(jìn)因子，其中也含有較多的抑制因子[13]。本研究中肺癌轉(zhuǎn)移患者TSP-1水平明顯低于未轉(zhuǎn)移患者，TSP-1水平與肺癌存在負(fù)相關(guān)性，即隨著肺癌的發(fā)生與轉(zhuǎn)移血小板TSP-1水平呈下降趨勢，表明TSP-1水平不僅可做為診斷指標(biāo)，對肺癌的轉(zhuǎn)移也具有檢測意義。但對于血小板TSP-1的水平變化一直備受爭議，馬新福等[14]發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者體內(nèi)TSP-1水平表達(dá)降低；賴閨娥等[15]研究顯示，乳腺癌患者體內(nèi)TSP-1水平呈高表達(dá)，由此可見，外周血中TSP-1水平的變化與癌癥組織的關(guān)系仍需進(jìn)一步研究。

本研究采用CTAD抗凝血避免了血小板活化，肺癌患者血小板VEGF和TSP-1水平較高，反映了肺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，可作為肺癌進(jìn)展的有效檢測指標(biāo)。

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