微生態制劑對肉雞禽流感和新城疫免疫影響的試驗研究

魏園園

（遼寧省動物疫病預防控制中心，遼寧 沈陽110164）

規模化養殖易引起肉雞體內微生物菌群平衡失調，降低肉雞的抗病能力，導致肉雞疾病頻發，進而加劇各類預防藥物和治療藥物在肉雞產品生產中的大量使用，成為威脅肉產品的品質和安全的重要因素[1-4]。因此，肉雞的自身健康是生產高品質肉產品的重要保障。肉雞在長期的進化過程中，胃腸道內的微生物與宿主形成了穩定的共生關系，保持了肉雞體內的微生態平衡，具有抵御致病微生物侵害的功能，使肉雞保持良好的抗病能力[5-7]。但是，工業化養殖造成的肉雞應激、抗生素濫用對腸道有益菌群的殺滅以及日糧構成不合理等多種不利因素均可造成肉雞體內的微生態紊亂[8]，進而導致各類惡性疾病的頻發，對食品安全帶來嚴重威脅[9]。

微生態菌劑是綠色的飼料添加劑，具有調整并維持腸道內正常的微生態平衡、增強機體免疫、促進營養物質的消化吸收等多種功能，并能改善飼料轉化率、促進肉雞生長發育[10-13]。朊假絲酵母菌具有調節動物腸道微生態平衡、提高飼料消化率、增強動物機體免疫力等作用。此外，由于產朊假絲酵母細胞富含維生素B和蛋白質，還能提供動物所需的部分營養物質。其蛋白質和維生素B的含量都比產朊假絲酵母高，它能以尿素作為氮源，在培養基中不需要加入任何生長因子即可生長。它能利用五碳糖和六碳糖，能利用糖蜜、木材水解液等生產出可食用的蛋白質。

本文通過在肉雞日糧中添加一定量的微生態制劑，研究飼喂微生態制劑對肉雞注射毒株禽流感和新城疫疫苗后的對血凝抑制抗體滴度水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗時間地點 本試驗于2017年5月22日至7月22日在丹東某大型雞場進行，共計61 d。

1.2 試驗材料 微生態制劑，主要成份：產朊假絲酵母菌≥5.0×106cfu/g由沈陽科豐生物科技（集團）有限公司提供。

1.3 試驗設計 試驗選取快大型白羽肉雞AA+健雛2 200只，隨機分為5組，即疫苗對照組、微生態制劑對照組、微生態制劑Ⅰ組、微生態制劑Ⅱ組和微生態制劑Ⅲ組。每組2個重復，每個重復220只雞。微生態制劑組和對照組均采用常規方式飼養。試驗設計方案如表1，新城疫疫苗免疫于7日齡和22日齡進行，其余的免疫程序按遼寧省畜牧局推薦免疫程序進行。

表1 不同毒株禽流感疫苗的試驗設計方案Table 1 The experiment design of different strains of avian influenza vaccines

1.4 試驗疫苗

1.4.1 重組禽流感H5N1亞型二價滅活疫苗（Re-6，RE-8株） 哈爾濱維科生物技術開發公司，生產日期20170405，批號2017021。采用頸部皮下注射，注射劑量按0.3 mL/羽操作。

1.4.2 禽流感（H9）亞型滅活疫苗（SD696株） 哈爾濱維科生物技術開發公司，生產日期20161009，生產批號2016006。采用胸部肌肉注射，注射劑量按0.3 mL/羽操作。

1.4.3 雞新城疫弱毒疫苗 齊魯動物保健有限公司。

1.5 主要試劑和儀器96孔V型微量反應板，微量移液器、阿氏（Alsevers）液、Ph 7.2 0.01 mol/L PBS磷酸緩沖液、1%雞紅細胞懸液、抗原。

1.6 測定指標和方法

1.6.1 新城疫和禽流感免疫水平的測定 根據GB/T 18936-2003《高致病性禽流感診斷技術》方法，分別于2、7、14、21、28、35、42、49、56日齡采血測定血凝和血凝抑制抗體水平，每組隨機采取10只肉雞，采血前禁水禁食12 h，心臟采血或翅靜脈采血1 mL，將血液在2 500 r/min下離心10 min，分離血清于-20℃冰箱保存備用。

1.6.2 免疫抑制試驗測定抗體水平的測定 每孔加生理鹽水25 μL，在第一列空加25 μL抗體，2倍梯度稀釋，最后一列不加抗體，作空白對照，每孔加25 μL抗原，搖晃一下，每孔加25 μL 1%紅細胞懸液，反應40 min，觀察結果。

1.7 數據分析 采用SPSS 18.0統計軟件對數據進行分析，所有數據用平均數±標準差（x±s）表示。

2 結果與分析

2.1 不同日齡肉雞 H 5 N 1亞型Re- 6株抗體效價情況表2為含母源抗體雞群免疫H5N1亞型Re-6株疫苗后抗體的消長規律。從表2可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度最高，隨著個體發育時間的增加，抗體滴度水平呈現降低的趨勢；在第10日齡進行疫苗免疫后，抗體水平仍繼續呈降低趨勢；第21日齡是母源抗體滴度的轉折點，疫苗對照組的抗體滴度水平急劇下降，而微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組的抗體滴度水平降低幅度小，極顯著高于疫苗對照組（P＜0.01），使雞群具有較高的抗體滴度水平；疫苗免疫后28日齡時，疫苗對照組和微生態制劑組的抗體滴度開始增加，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組抗體滴度的增加幅度極顯著高于疫苗對照組（P＜0.01）。第35、40日齡時，疫苗對照組和微生態制劑組抗體仍保持較高的滴度水平，第49日齡時，疫

苗對照組的抗體出現明顯的下降，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組的抗體水平極顯著高于疫苗對照組（P＜0.01）。第56日齡時，微生態制劑Ⅱ組的抗體滴度水平顯著高于疫苗對照組（P＜0.05）。同時通過微生態制劑對照組可以看出，在沒有進行疫苗免疫的情況下，直到21日齡的時候，對于H5N1亞型Re-6株疫苗后抗體仍能具有較高的抗體水平。

表2 不同日齡肉雞H5N1亞型Re-6株抗體效價（log2）Table 2 The valence of antibody of H5N1 Re-6 strain in different age Dorking

表3 不同日齡肉雞H5N1亞型Re-8株抗體效價（log2）Table 3 The valence of antibody of H5N1 Re-8 strain in different age Dorking

綜上所述，采用H5N1亞型Re-6株疫苗進行免疫可以提高抗體滴度水平，在疫苗免疫的同時添加微生態制劑可以使H5N1亞型Re-6株疫苗抗體滴度水平增加，并保持較長的時間。

2.2 不同日齡肉雞 H 5 N 1亞型Re- 8株抗體效價情況表3為含母源抗體雞群免疫H5N1亞型Re-8株疫苗后抗體的消長規律。從表中可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度具有較高的水平；第7日齡時，使用微生態制劑的微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組仍保持較高的抗體滴度水平，并極顯著高于疫苗對照組（P＜0.01）；在第10日齡疫苗免疫后，抗體水平繼續呈降低趨勢，第21日齡是母源抗體滴度的轉折點，疫苗對照組和微生態制劑組的抗體滴度水平急劇下降，且疫苗對照組和微生態制劑Ⅱ組無抗體滴度，微生態制劑Ⅰ組的抗體滴度與疫苗對照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；第28日齡時，疫苗對照組和微生態制劑Ⅱ組抗體滴度不變化，而微生態制劑Ⅰ組抗體滴度增加，與對照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；第35日齡時，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組的抗體滴度開始增加，與疫苗對照組呈極顯著性差異（P＜0.01），第40、49、56日齡時，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅱ組仍保持較高的抗體滴度水平，并極顯著高于而疫苗對照組的抗體水平（P＜0.01）。

微生態制劑對照組在前14日齡時，對于H5N1亞型Re-8株疫苗抗體滴度具有較高的水平，從21日齡開始，微生態制劑對照組和疫苗對照組對H5N1亞型Re-8株疫苗抗體滴度水平均呈下降的趨勢。

綜上所述，采用H5N1亞型Re-8株疫苗進行免疫后的抗體滴度水平不明顯，但飼喂微生態制劑仍能使機體內H5N1亞型Re-8株疫苗保持一定的抗體滴度水平，使抗體滴度增加并保持較長的時間。

2.3 不同日齡肉雞 H 9亞型SD696株抗體效價情況表4為含母源抗體雞群免疫H9亞型SD696株疫苗后抗體的消長規律。從表中可知，第2日齡的雞群母源抗體滴度最高，隨著個體發育時間的增加，抗體滴度水平在第7日齡時呈現降低的趨勢；在第10日齡免疫疫苗后，抗體水平繼續呈降低趨勢；第14日齡時，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅲ組的抗體水平高于疫苗對照組極顯著性差異（P＜0.01）。第21日齡是母源抗體滴度的轉折點，疫苗對照組和微生態制劑Ⅲ組的抗體滴度水平急劇下降，但微生態制劑Ⅰ組的抗體滴度極顯著高于其他組（P＜0.01）；從第28日齡開始疫苗的抗體水平均呈下降趨勢，但與疫苗對照組相比，微生態制劑Ⅰ組和微生態制劑Ⅲ組的疫苗抗體水平較高，其中微生態制劑Ⅲ組的疫苗抗體水平均極顯著高于疫苗對照組（P＜0.01）。

表4 不同日齡肉雞H9亞型SD696株抗體效價（log2）Table 4 The valence of antibody of H9 SD696 strain in different age Dorking

微生態制劑對照組在前14日齡時，對于H9亞型SD696株疫苗抗體滴度具有較高的水平，從28日齡開始，微生態制劑對照組對H9亞型SD696株疫苗抗體滴度水平均呈下降的趨勢。

綜上所述，采用H9亞型SD696株疫苗進行免疫后會增加一定的抗體滴度水平，疫苗免疫的同時添加微生態制劑可以提高H9亞型SD696株疫苗抗體滴度水平，并使抗體滴度水平保持較長的時間。

2.4 新城疫抗體效價水平情況 疫苗對照組沒飲用微生態制劑產品，其他各組都飲用微生態制劑產品；所有各組都在7、22日齡用齊魯產的新城疫疫苗進行新城疫免疫，因此試驗第1天和第7天檢測的指標為母源抗體指標。

表5 免疫后不同日齡新城疫抗體效價（log2）Table 5 The valence of antibody of ND vaccine in different age of Dorking

結果如表5所示，疫苗對照組在1～7 d的飼養階段，新城疫抗體效價呈下降趨勢，而微生態制劑組肉雞則出現略微上升趨勢，此階段并未打任何疫苗，因此新城疫抗體效價來自于母源抗體，各微生態制劑組新城疫抗體效價均高于對照組。在第7天時，進行新城疫免疫，在首免后第一次檢測新城疫抗體效價時，發現新城疫抗體值呈下降趨勢，在21日齡時，各處理組新城疫抗體有上升趨勢，其中飼喂微生態制劑的試驗組新城疫抗體效價在21日齡時均高于對照組。

在第22日齡時對肉雞進行第二次新城疫免疫，在第28日齡時檢測新城疫抗體效價指標，結果顯示，疫苗對照組新城疫抗體效價比21日齡時有所提高，但微生態制劑組卻比21日齡時有所下降；在第35日齡時，疫苗對照組新城疫抗體效價未檢出，飼喂微生態制劑的試驗組新城疫抗體極顯著高于對照組（P＜0.01）。在40～56日齡階段，肉雞新城疫抗體效價呈增長趨勢，其中疫苗對照組在56日齡時，已經達到最高值10，這可能是因為在試驗后期，由于疫苗對照組大批雞感染新城疫，肉雞機體本身應對疾病時所產生的抗體。

白軍等[13]在2013年的研究中報道過，當新城疫抗體效價達到4log2時，攻毒保護率為80%，當抗體水平≥5log2時，攻毒保護率為100%。微生態制劑對照組其新城疫抗體水平在0～14日齡時呈下降趨勢，但其數值顯示，其功毒保護率達到80%以上，在21日齡時升高，在隨后的28和35日齡檢測過程中新城疫抗體效價變化較小，于40日齡時下降，隨后于40～56日齡階段升高。整體來看，微生態制劑對照組在不進行新城疫免疫的情況下，其對新城疫病毒的功毒保護率在80%以上，表明微生態制劑對新城疫具有抑制作用。

3 結論

本研究分別選用禽流感H5N1亞型Re-6株、H5N1亞型Re-8株和H9亞型SD696株疫苗進行免疫，并與同時添加微生態制劑的試驗組進行對比，結果表明，禽流感H5N1亞型Re-6株和H9亞型SD696株疫苗產生的抗體滴度水平較高，并且添加微生態制劑的試驗組可以提高疫苗產生的抗體滴度，在一定程度上使抗體滴度保持較長的時間，且提高機體對禽流感病毒的免疫能力。

對新城疫抗體檢測結果表明，飼喂微生態制劑對新城疫病毒有抑制作用，可以使雞對新城疫病毒的保護率提高到80%以上，因此，飼喂微生態制劑對肉雞的新城疫免疫抗體提高具有一定的促進作用。

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