基于HPLC含量測(cè)定的不同產(chǎn)地丹參藥材質(zhì)量研究

（1山東丹紅制藥有限公司 山東 菏澤 274000）（2菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校 山東 菏澤 274000）（3浙江大學(xué) 藥學(xué)院 浙江 杭州 310058）

王臣臣1 安蕓（通訊作者）2 范波3 陸世海1 郭曉光1 王毅3

丹參為唇形科植物丹參Salviae miltiorrhizae Bge的干燥根和根莖，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在我國(guó)已有近兩千年的使用歷史，在中醫(yī)中具有“祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩”等功效[1]。藥理學(xué)研究表明，丹參具有保護(hù)心肌缺血再灌注損傷，抗血栓，清除體內(nèi)自由基，保護(hù)腦神經(jīng)等作用，其相關(guān)制劑在臨床上廣泛用于冠心病、心絞痛和腦卒中等心腦血管病治療。此外丹參還具有抗腫瘤、抗纖維化、抗炎等廣泛藥理作用。丹參主要活性成分為水溶性的丹參酚酸類和脂溶性的丹參酮類，其中丹酚酸B含量占到了丹參酚酸類含量的80%以上。丹酚酸B和丹參酮類的含量測(cè)定寫(xiě)入《中國(guó)藥典》丹參藥材標(biāo)準(zhǔn)中，作為評(píng)價(jià)丹參藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。為比較山東產(chǎn)地以及其他不同產(chǎn)地丹參藥材質(zhì)量差異，本文使用《中國(guó)藥典》2015版丹參藥材含量測(cè)定方法檢測(cè)丹參中丹酚酸B和丹參酮類含量，為丹參藥材的選擇和使用提供參考依據(jù)。

1.儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀（含VWD檢測(cè)器）。丹酚酸B、丹參酮ⅡA對(duì)照品（純度均＞98%，購(gòu)自上海融禾醫(yī)藥科技有限公司）。乙腈、磷酸、甲醇、三氟乙酸均為色譜純，VEOLIA公司PureLab flex制水。丹參藥材由山東丹紅制藥有限公司提供，產(chǎn)地見(jiàn)表1。

2.方法與結(jié)果

2.1 丹參水分測(cè)定

取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）2g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)10mm，精密稱定，開(kāi)啟瓶蓋在105度干燥5h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1h，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算丹參含水量（%）。

2.2 丹酚酸B含量測(cè)定

Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm)色譜柱。以乙腈-0.1%磷酸溶液（22：78）為流動(dòng)相；柱溫20℃；流速1.2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)286nm。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品9.88mg，加甲醇-水（8：2）混合溶液，制成終濃度為0.0988 mg/ml的儲(chǔ)備液，即得。供試品溶液的制備為，取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-水（8：2）混合溶液50ml，用封口膜密塞，超聲處理30分鐘，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加甲醇-水（8：2）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，12000rpm離心10min，取上清液，即得。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.3 丹參酮類含量測(cè)定

Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm)色譜柱。以0.02%磷酸溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫；柱溫20℃；流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。洗脫梯度為0～6分，60%B相；6～20分，61～90%B相。對(duì)照品溶液為精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品10.62mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成終濃度為21.24μg/ml的儲(chǔ)備液，即得。供試品溶液的制備為取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，用封口膜密塞，超聲處理30分鐘，搖勻，12000rpm離心10min，取上清液，即得。樣品測(cè)定步驟為分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定。根據(jù)《中國(guó)藥典》2015版，以丹參酮的峰面積為對(duì)照，乘以校正因子3.49，即得丹參酮類含量。

3.結(jié)果

不同產(chǎn)地丹參藥材含水量、丹酚酸B含量及丹參酮類含量見(jiàn)表1。所有測(cè)定的丹參水分含量均低于13%，符合藥典標(biāo)準(zhǔn)[2]。16個(gè)產(chǎn)地藥材丹酚酸B和丹參酮類含量均符合中國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)，其中貴州畢節(jié)二者含量最高，均顯著高于其他產(chǎn)地，而山西長(zhǎng)治丹酚酸B含量最低，剛剛達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。山東產(chǎn)地中菏澤東明產(chǎn)丹參其二者含量均顯著低于其他山東產(chǎn)地。

表1 不同產(chǎn)地丹參藥材含水量、丹酚酸B和丹參酮類含量

通過(guò)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在選取的16個(gè)產(chǎn)地中，西南和東北地區(qū)藥材丹酚酸B含量相對(duì)較高，山西河北一帶相對(duì)偏低。山東中部產(chǎn)地含量較平均，其中以日照莒縣為最高，而山東西南部的菏澤東明丹酚酸B含量卻明顯低于其他山東地區(qū)。此處，9個(gè)山東產(chǎn)地除菏澤東明外其他8個(gè)產(chǎn)地含量均比較接近，可見(jiàn)陜西商洛、四川德陽(yáng)和遼寧錦州3個(gè)產(chǎn)地藥材的丹酚酸B及丹參酮類含量與山東產(chǎn)地較為相似，而山西長(zhǎng)治、河北唐山、黑龍江雞西、貴州畢節(jié)4個(gè)產(chǎn)地與山東產(chǎn)地相似度相對(duì)較低。對(duì)不同產(chǎn)地丹參藥材丹酚酸B和丹參酮類含量進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)為0.3289，表明丹參中二者含量具有一定的相關(guān)性，但相關(guān)性不強(qiáng)。比如16個(gè)產(chǎn)地中丹酚酸B含量最高的貴州畢節(jié)，其丹參酮類含量也最高。而丹酚酸B含量最低的山西長(zhǎng)治，其丹參酮類含量卻高于四川德陽(yáng)、黑龍江雞西、遼寧錦州等產(chǎn)地。

4.討論

丹參分布廣泛，歷史上河南、安徽、山西、山東等地區(qū)都曾作為丹參的道地產(chǎn)區(qū)，四川丹參是有據(jù)可查最遲的道地藥材。本研究所選取的產(chǎn)地中，四川德陽(yáng)與山東產(chǎn)地的相似度最高，表明山東丹參和道地藥材品質(zhì)較為相似。本研究通過(guò)對(duì)丹參藥材有效成分的含量測(cè)定，為丹參產(chǎn)地選擇提供依據(jù)。但由于中藥成分復(fù)雜，其藥效活性與成分之間的相關(guān)性仍需更深入的研究，可在產(chǎn)地優(yōu)選時(shí)加入合適的活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，將有助于從成分到藥效相對(duì)更全面地反映藥材質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2]高楓，孫桂波，任小宇，等.丹酚酸B對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)中藥雜志，2012，3:358-361.