香菇L808單孢雜交育種篩選試驗

黃書文

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香菇L808單孢雜交育種篩選試驗

黃書文

（三明市真菌研究所 三明市三真生物科技有限公司，福建 三明 365000）

香菇L808單孢雜交技術路線：親本選擇→單孢分離→單核體菌絲確認→配對雜交組合→移植擴大繁殖→初篩→復篩→區別性鑒定→中間試驗→示范栽培。選育出的香菇L16菌株主要栽培特性及產量與親本相當；菌絲耐高溫能力優于親本。新菌株與親本間有拮抗反應。新菌株與親本在生理特性、遺傳特性上有一定的差異性。

香菇L808；單孢雜交；香菇L16

香菇（（Berk.）Pegler）又名香蕈、香菰、花菇、冬菇、花冬菇、明花、天白花菇、暗花、茶花、椎茸、香信、板栗菇、椎菇等[1, 2]，是中國傳統的著名食用菌并最早人工馴化栽培成功。香菇品種L808子實體中大型，形態好，肉厚，質地致密，耐貯運。自2009年起成為華北地區香菇主栽品種，并逐漸向其他地區擴散，成為各主產區主栽品種。但L808也有明顯的缺點：菌絲不耐高溫，菌棒越夏期間容易燒菌，導致爛棒。本試驗試圖用香菇L808單孢雜交育種方式選育出一株既具有親本的優良性狀，又一定程度上提高其菌絲抗高溫能力的新菌株。

選育出的香菇L16菌株，其主要栽培特性及產量與親本相當，菌絲耐高溫能力優于親本；與親本間有一定拮抗反應；生理特性、遺傳特性與親本有一定的差異性。示范推廣表明，L16適合多種氣候條件，適應區域廣，品質好，產量高。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

（1）供試菌株。香菇L808，三明市真菌研究所保藏。

（2）培養基。PDA培養基：去皮馬鈴薯200 g、瓊脂20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL。原種、栽培種培養基：闊葉樹木屑（3～6 mm）78%、麥麩20%、輕質碳酸鈣1%、蔗糖1%，含水量60%。栽培料培養基：闊葉樹木屑（3～6 mm）83%、麥麩16%、輕質碳酸鈣1%，含水量60%。

（3）容器。18×180（mm）玻璃試管，90 mm培養皿，14×28（cm）折角聚丙烯袋，15×58（cm）聚乙烯袋。

1.2 實驗方法

（1）親本選擇、單孢分離、單核體菌絲確認。從本所栽培的香菇L808中選擇生長健壯、菌肉厚、形態完整的七分成熟子實體作親本。親本采后立即于無菌條件下用孢子印法收集孢子。14.5 h后取適量擔孢子放入無菌水中，稀釋至一定濃度，用接種環醮取孢子液涂于平板培養基上，密封培養皿，于22～25 ℃避光培養。待出現眾多直徑3～6 mm的菌落時，每獨立菌落挑取一小塊菌絲置于斜面培養基中央，25 ℃培養。待菌絲體生長最快的即將長滿斜面時對各菌落鏡檢，挑出單核體菌絲。

（2）配對雜交組合。選取菌絲形態、色澤、生長速度各異的16個單核體菌絲于斜面培養基上進行交互配對，兩菌種塊相距20 mm，共120個組合。兩菌落接觸后挑取交接處菌種塊置于斜面培養基中央，25 ℃培養。分別于3天、13天后測量菌絲兩生長端之間的距離，生長速度≥4.0 mm/d的進行鏡檢，＜4.0 mm/d的淘汰。鏡檢后有鎖狀聯合的移植擴大繁殖。

（3）小試初篩。所有雜交菌株每組10棒，3個重復，親本作對照。每棒重量2 175±25 g，三層無紡布封口，108～110 ℃蒸汽滅菌5 h，種源為原種，每棒3個接種口，套袋，接種后14天剝去套袋。培養條件：溫度25 ℃，避光，CO2濃度≤0.3%，相對濕度60%～70%。記錄菌絲長滿菌棒需要的天數，所有菌棒長滿后，白天給予300 lx光照，其他培養條件不變。瘤狀物較多時用6.67 cm鐵釘刺孔增氧，每棒54個孔，刺孔后10天內保持相對濕度90%～95%。培養120天后搬至菇棚，再7天脫袋出菇。每潮菇出完養菌15天后注水。菇棚環境條件：全出菇期溫度5 ℃以上，26 ℃以下，晴天日夜溫差約10 ℃；濕度80%～90%；光照100～300 lx；CO2濃度≤0.1%。

表1 小試初篩菌株栽培表現

（4）小試復篩。初篩選出的4個菌株進行復篩，親本作對照。每菌株每組30棒，3個重復。按1.2（3）的方法進行。

（5）菌絲耐高溫與拮抗試驗。選出的菌株與親本進行耐高溫和拮抗試驗。耐高溫試驗：將25 ℃下培養14天的斜面菌種在40 ℃條件下放置1 h、3 h、5 h、7 h、9 h后，于25 ℃條件下培養2天，每處理移接5支試管，觀察能否萌發。

（6）生產性試驗。1 000棒，按1.2（3）的方法進行。

（7）示范推廣。龍巖市新羅區綠態食用菌專業合作社示范形推廣栽培20萬袋，每袋裝干料980～1 000 g，按花菇高棚層架培育方法進行。

2 結果與分析

2.1 單核體菌絲確認

共挑取56個獨立菌落，經鏡檢確認有51個單核體菌絲。另5個有鎖狀聯合或無鎖狀聯合，由兩個能親合的單核體菌絲發生交配或兩個不能親合的單核體菌絲混雜在一起。單核體菌絲粗細不一；有的生長端整齊，有的不整齊；顏色有白，灰白，淡黃；生長速度差異大，0.25～0.99 mm/d 的有7株，1.00～1.99 mm/d 的有15株，2.00～2.99 mm/d 的有23株，3.00～3.14 mm/d的有6株。

2.2 配對雜交組合

配對雜交組合中生長速度≥4.0 mm/d的有18個，經鏡檢其中13個有鎖狀聯合，另5個沒有鎖狀聯合。香菇為雙因子四極性，品種內單核體菌絲間親合概率為25%，本試驗只獲得13個雜交菌株的原因有：一是入試單核體菌絲極性分布不均勻，兩個不親合極性的單核體菌絲較多，而另兩個極性的單核體菌絲較少；二是有的雜交菌株生長速度小于4.0 mm/d。

2.3 小試初篩

小試初篩結果如表1所示，13個雜交菌株栽培性狀分化明顯，3個菌株能扭結原基，但原基不能分化成子實體，表明菌棒遠未達到生理成熟，為超晚熟菌株；06、09兩菌株有少部分原基不能分化成子實體，菌棒未達完全生理成熟；其他菌株原基都能正常分化成子實體，菌棒已達完全生理成熟；各菌株菌蓋圓整。

2.4 小試復篩

小試復篩結果，各菌株與初篩時表現一致（表2），11號菌株明顯優于其他菌株，定名為L16。

表2 復篩菌株栽培表現

2.5 菌絲耐高溫與拮抗試驗

菌絲耐高溫試驗結果，L16比親本明顯耐高溫（表3）。拮抗試驗結果（圖1），L16與親本L808之間存在一定的拮抗反應；兩者在生理特性及遺傳特性上有一定差異。

表3 香菇L16菌絲與親本耐高溫比較

2.6 生產性試驗

生產性試驗的1 000個菌棒共采收鮮香菇819.37 kg，平均每棒產量為819 g。子實體形態好，菌肉厚，質地致密。

2.7 示范推廣

示范推廣栽培的20萬個菌棒，共采收鮮香菇103 419 kg，平均每棒產量為517 g，生物學效率≥51.7%。子實體形態好，菌肉厚，質地致密；菌棒越夏安全性好。

圖1 L16-L808拮抗試驗結果

3 小結與討論

在本所的試驗部分都是在人工控制環境條件下進行，香菇L16的耐高溫優勢與親本相比顯現不出來。從示范推廣的結果看，在自然氣候下培養，經越夏管理，兩者差異很大，海拔越低，差異越大。相同條件下，香菇L16比L808越夏安全性好，表現為前者正常出菇，后者常常是第一潮爆發性出菇，菇多、小、質量差，之后菌棒解體。

試驗中發現，同一極性的單核體菌絲在形態、生長速度上有差異。這表明雜交后代的性狀分離明顯，同時也意味著在香菇單孢雜交育種中，應選擇形態好、生長端整齊、生長速度較快的單核體菌絲進行配對。

香菇品種內單孢雜交育種親和概率低，育種成功概率要低于品種間的單孢雜交育種。香菇育種主要方向應該是品種間的單孢雜交育種。

[1] 黃年來, 林志彬, 陳國良, 等. 中國食藥用菌學[M]. 上海: 上海科學技術文獻出版社, 2010.

[2] 卯曉嵐. 中國大型真菌[M]. 鄭州: 河南科學技術出版社, 2010.

S646

B

2095-0934（2018）03-184-03

黃書文，高級農藝師，主要從事食用菌品種選育、栽培技術研究及推廣工作。E-mail：fjsmhuangshuwen@