低深度高通量測(cè)序技術(shù)在早期流產(chǎn)中的應(yīng)用

羅家宏

（廣東省江門市婦幼保健院醫(yī)學(xué)遺傳中心 江門529000）

隨著環(huán)境變化及社會(huì)壓力的增加，早期流產(chǎn)發(fā)病率呈逐年增加的趨勢(shì)。相關(guān)臨床研究顯示[1]，早期流產(chǎn)多因染色體異常所致，占比率高達(dá)近60%。常規(guī)染色體分析是診斷早期流產(chǎn)的金標(biāo)準(zhǔn)，但其對(duì)樣本、操作流程的要求較高，檢出率也往往較低[2]。低深度高通量測(cè)序技術(shù)可在24 h內(nèi)對(duì)機(jī)體的23對(duì)染色體進(jìn)行堿基信息分析，可發(fā)現(xiàn)微量染色體缺失、重排等[3]。本研究觀察低深度高通量測(cè)序技術(shù)在早期流產(chǎn)中的應(yīng)用?，F(xiàn)匯報(bào)如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2017年1月～2018年1月我院收治的265例早期流產(chǎn)患者（99例染色體核型異常）作為研究對(duì)象，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者年齡 20～42歲，平均（26.68±6.26）歲；孕周6～28周，平均（13.36±2.14）周。入組標(biāo)準(zhǔn)：超聲檢查顯示胚胎停止發(fā)育者；患者均簽署檢查同意書；無(wú)妊娠期感染者；無(wú)有害物質(zhì)接觸者。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者未簽署檢查同意書；妊娠合并感染者；伴有害物質(zhì)接觸者；臨床資料不完整或失訪者。

1.2 治療方法 清宮術(shù)后取患者絨毛組織或胚胎組織10 mg，提取患者DNA，采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA純度濃度，瓊脂糖電泳測(cè)定DNA片段的完整性。取50 ng基因組DNA，隨機(jī)打斷，末端修復(fù)，加A連接進(jìn)行構(gòu)建，測(cè)定DNA片段定量濃度及純度，采用Bioelectron SEQ 3000基因測(cè)序進(jìn)行低深度高通量測(cè)序技術(shù)分析，后將數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息分析，序列對(duì)比軟件對(duì)染色體進(jìn)行核型異常判斷。

1.3 觀察項(xiàng)目 記錄分析染色體異常的類型及檢出率情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件分析觀察項(xiàng)數(shù)據(jù)，采用百分率（%）表示數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料通過(guò)χ2檢驗(yàn)表示。P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 99例低深度高通量基因測(cè)序異常結(jié)果 265例早期流產(chǎn)患者中出現(xiàn)99例染色體核型異常者，發(fā)生率為37.36%，低深度高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)染色體核型異常的檢出99例，檢出率為100.0%。其中染色體異常核型分布：16三體12例（12.12%）、13三體6例（6.06%）、21三體 9例（9.09%）、2三體 3例（3.03%）、3三體4例（4.04%）、8三體3例（3.03%）、10三體4例（4.04%）、22三體3例（3.03%）、常染色體缺失或 重 排 27例 （27.27%）、45,X 21例（21.21%）、47,XYY 3 例 （3.03%）、47,XXX 4 例（4.04%）。見(jiàn)表1。

表1 99例低深度高通量基因測(cè)序異常結(jié)果（%）

2.2 染色體核型異常不同檢測(cè)方法比較 低深度高通量測(cè)序?qū)诵彤惓z出率為100.00%，顯著高于常規(guī)染色體分析的74.75%（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 染色體核型異常不同檢測(cè)方法比較

3 討論

早期流產(chǎn)是威脅婦女健康與安全的妊娠病理性疾病，胎盤染色體異常是引起妊娠期胚胎停止發(fā)育的關(guān)鍵因素之一，染色體異常所致的自然流產(chǎn)率高達(dá)60%，嚴(yán)重影響其生存質(zhì)量[4]。以往臨床上主要采用常規(guī)染色體核型分析檢測(cè)技術(shù)對(duì)早期流產(chǎn)患者組織進(jìn)行分析，但其對(duì)樣本處理的要求較高，操作較為復(fù)雜，培養(yǎng)時(shí)間也較長(zhǎng)，同時(shí)具有一定程度的培養(yǎng)失敗率[5]。因此，尋找敏感性高、簡(jiǎn)便迅速的染色體異常檢測(cè)方法對(duì)指導(dǎo)臨床妊娠具有較高的價(jià)值。

本研究觀察低深度高通量測(cè)序技術(shù)在早期流產(chǎn)中的應(yīng)用，其結(jié)果顯示：265例早期流產(chǎn)患者中出現(xiàn)99例染色體核型異常者，發(fā)生率為38.67%；其中染色體異常核型分布：16三體12例（12.12%）、13三體 6例（6.06%）、21三體 9例（9.09%）、2三體 3例（3.03%）、3三體4例（4.04%）、8三體3例（3.03%）、10三體4例（4.04%）、22三體3例（3.03%）、常染色體缺 失 或 重 排 27例 （27.27%）、45,X 21例（21.21%）、47,XYY 3 例 （3.03%）、47,XXX 4 例（4.04%）。低深度高通量測(cè)序?qū)诵彤惓z出率為100.00%顯著高于常規(guī)染色體分析的74.75%，比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。因此，低深度高通量測(cè)序技術(shù)較常規(guī)染色體分析對(duì)早期流產(chǎn)患者基因組信息的檢出率較高。這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究相一致[6～7]。低深度高通量測(cè)序技術(shù)具有較高的檢測(cè)能力，其可將上萬(wàn)個(gè)測(cè)序技術(shù)在同一個(gè)平臺(tái)進(jìn)行。結(jié)合生物學(xué)信息，可一次性檢測(cè)23對(duì)染色體，同時(shí)可發(fā)現(xiàn)100 kb染色體缺失或重排等，從而避免常規(guī)染色體核型分析的細(xì)胞培養(yǎng)，對(duì)樣本要求低，取材也較為方面，重復(fù)檢測(cè)率也較高。本研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)低深度高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)染色體三體的檢出率較高，這可能與孕婦卵巢功能老化，黃體酮水平降低，卵泡紡錘體減弱，從而引起卵細(xì)胞在有絲分裂過(guò)程中出現(xiàn)錯(cuò)誤、分離，染色體三倍體的發(fā)生率也較高。

綜上所述，低深度高通量測(cè)序技術(shù)較常規(guī)染色體分析對(duì)早期流產(chǎn)患者基因組信息的檢出率較高，值得臨床應(yīng)用和推廣。

[1]乞艷華,余珊珊,李小鵬,等.孕早期流產(chǎn)物的高通量測(cè)序研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2017,48(3):271-275

[2]楊小風(fēng),郭婷婷,歸婧,等.高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)自然流產(chǎn)的遺傳學(xué)價(jià)值[J].河南醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校學(xué)報(bào),2017,29(2):110-113

[3]張麗,謝嵐,謝紅敏.基于高通量測(cè)序技術(shù)的78例稽留流產(chǎn)絨毛染色體分析[J].山西醫(yī)藥雜志,2017,46(12):1467-1468

[4]張玲,邸玥瑩,梅俊,等.基因測(cè)序技術(shù)在早期自然流產(chǎn)病因診斷中的應(yīng)用研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2016,24(1):12-13

[5]周麗穎,余蘭,梁毓,等.自然流產(chǎn)遺傳病因的高通量測(cè)序檢測(cè)[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2016,24(8):35-36

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[7]張影,向卉芬,徐祖瀅,等.高通量測(cè)序技術(shù)在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病因診斷中的應(yīng)用[J].中華生殖與避孕雜志,2018,38(2):127-130

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[9]方有燕,吳歡,賀小進(jìn),等.高通量基因測(cè)序技術(shù)在自然流產(chǎn)胎兒絨毛染色體的核型分析[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2018,35(2):266-270