Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1在結直腸癌患者中的表達及其與臨床特征的關系

陳艷昕，劉慶濱，周穎，黃江梅，肖芳

秦皇島市第一醫院1病理科，2普外科，河北 秦皇島066000

結直腸癌的發病率居各種惡性腫瘤的第3位，在中國居惡性腫瘤的第4位[1]。研究發現，惡性腫瘤相關生物學因子的改變能夠影響腫瘤細胞的浸潤、分化及新生血管的形成，從而促進惡性腫瘤發生及病情進展[2]。研究表明，基質細胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）的高表達能夠促進腫瘤細胞增殖和基因轉錄，提高腫瘤細胞的增殖速度[3]。程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）的低表達能夠抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤細胞持續性增殖，進而參與惡性腫瘤的發生[4]。Vasohibin-1是一種新型血管內皮細胞調控因子，能夠調控新生血管形成，增加局部腫瘤組織的血流灌注，促進腫瘤組織的生長[5]。本研究探討了Vasohibin-1、PD-1、SDF-1在結直腸癌患者中的表達情況及其與臨床特征的關系，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年5月至2016年8月于秦皇島市第一醫院接受治療的200例結直腸癌患者為結直腸癌組。納入標準：①年齡≥50歲；②經病理檢查確診為原發性結直腸癌；③無其他系統嚴重疾病；排除標準：①臨床資料不全者；②合并其他部位腫瘤者；③拒絕參與本研究者。200例結直腸癌患者中，直腸癌75例，左、右半結腸及乙狀結腸癌125例；男120例，女80例；年齡51～76歲，平均（65.24±6.31）歲；有淋巴結轉移55例，無淋巴結轉移145例；組織學分型：管狀腺癌160例，黏液腺癌40例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期90例，Ⅲ～Ⅳ期110例；腫瘤直徑＜5 cm 135例，≥5 cm 65例。另選取200例結直腸息肉患者為結直腸息肉組，其中男110例，女90例；年齡52～75歲，平均（65.28±5.01）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。所有患者均對本研究知情并簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

采用石蠟切片脫蠟入水，去離子水反復洗滌，加入牛奶液體封閉，封閉時間為5 min，加入Vasohibin-1、PD-1、SDF-1蛋白抗體（鼠來源，購自Abcam公司），37℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，加入二抗抗體（購自Abcam公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，采用南京凱基生物科技發展有限公司生產的DAB顯色劑進行顯色，封片，鏡下觀察。

1.3 評價指標

觀察兩組患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表達情況，比較不同臨床特征結直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表達情況。

1.4 統計學方法

采用SPSS 11.5軟件對-數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；多因素分析采用Logistic回歸分析法。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達情況的比較

結直腸癌組患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率分別為80.00%、42.50%、45.00%，均明顯高于結直腸息肉組的12.50%、5.00%、11.00%，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達情況的比較[ n（%）]

2.2 不同臨床特征結直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達情況的比較

有淋巴結轉移、組織學分型為黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑≥5 cm結直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移、組織學分型為管狀腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑＜5 cm的患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。不同年齡、性別、腫瘤部位結直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 結直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1陽性表達的影響因素分析

將單因素分析有意義的因素作為自變量（淋巴轉移：有=1，無=0；TNM分期：Ⅲ～Ⅳ期=1，Ⅰ～Ⅱ期=0），將結直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達作為因變量，進行Logistic回歸分析。結果顯示，淋巴結轉移和TNM分期是影響結直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達的獨立因素（P＜0.05）。（表3～表5）

3 討論

目前，臨床上結直腸癌治療的總有效率不足70%，手術聯合放化療等綜合治療措施的臨床緩解率較低[5-6]。同時，對于結直腸癌的早期發病過程缺乏有效的篩查指標，雖然癌胚抗原及糖鏈蛋白125等上皮腫瘤糖蛋白成分能夠在一定程度上提高結直腸癌的診斷率，但其篩查的靈敏度及特異度較低，具有較為明顯的局限性。

結直腸癌的發病機制較為復雜，遺傳因素、基因突變等均可能增加腫瘤的發生風險。近年來，分子生物學水平的異常被認為是影響惡性腫瘤發生的核心因素，相關蛋白表達異常會增加腫瘤細胞擴散的風險，導致腫瘤細胞正常分化或促凋亡過程明顯失常[7-8]。SDF-1是細胞間質成分修飾因子，對于腫瘤細胞DNA末端具有修飾作用，能夠提高染色體DNA的錯配風險，并抑制錯配修復因子cyc的活性[9]。Vasohibin-1能夠促進新生血管形成，促進血管內皮細胞的生成及遷移，提高腫瘤病灶組織的血流灌注速度，增加血流灌注量，從而為腫瘤的復發或轉移提供條件[10]。PD-1作為程序性凋亡抑制因子，不僅能夠影響腫瘤細胞的分化及凋亡，還能夠調控腫瘤細胞的細胞周期[11]。部分研究探討了PD-1的表達與結直腸癌患者臨床特征的關系，認為高表達的PD-1是促進患者臨床分期、細胞分化等病理進程惡化的重要因素[11]，但對于Vasohibin-1、SDF-1的探討不足。

表2 不同臨床特征結直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達情況的比較

表3 結直腸癌患者Vasohibin- 1陽性表達影響因素的多因素分析

表4 結直腸癌患者PD- 1陽性表達影響因素的多因素分析

表5 結直腸癌患者SDF- 1陽性表達影響因素的多因素分析

本研究發現，結直腸癌組患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率均明顯高于結直腸息肉組，差異均有統計學意義（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1均參與了結直腸癌的發生和發展，具體機制可能如下[12]：①Vasohibin-1高表達能夠導致腫瘤細胞增殖過程中毛細血管形成速度的變化，增加血管數量并導致局部血流動力學紊亂；②PD-1高表達能夠促進下游凋亡抑制因子（如Cox-2）的表達水平升高，抑制腫瘤細胞凋亡；③SDF-1高表達對于腫瘤細胞間質成分的分解作用，能夠為腫瘤細胞的增殖及擴散提供條件，并為腫瘤細胞的黏附及浸潤過程提供黏附分子。吳佳茗等[13]分析了小樣本量的結腸癌患者的免疫組化資料，結果發現，PD-1的陽性表達率平均可上升25%以上，結腸癌的臨床分期越晚、患者的生存預后越差，治療后的復發率越高，PD-1的陽性表達率越高。本研究發現，有淋巴結轉移、組織學分型為黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑≥5 cm結直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移、組織學分型為管狀腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑＜5 cm的患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表達情況與結直腸癌患者的臨床特征密切相關，可能是因為這些指標均能影響腫瘤組織對鄰近正常腸道黏膜上皮組織的浸潤，同時可以影響腫瘤早期的細胞浸潤過程，尤其是Vasohibin-1還能夠導致血管內皮細胞的氧化應激損傷，影響腫瘤細胞的微環境，并維持腫瘤干細胞的活性[14]。但本研究并未發現Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表達情況與結直腸癌患者腫瘤部位的關系，提示左側和右側結腸癌不存在明顯的分子生物學差異。本研究還發現，淋巴結轉移和TNM分期是影響結直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達的獨立因素（P＜0.05）。本研究的創新性在于探討了Vasohibin-1、SDF-1與結直腸癌患者臨床特征的關系。結直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽性表達率較高，且與淋巴結轉移和TNM分期密切相關。

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