當歸苦參丸方藥5種提取方法的成分比較

王芳 孫秀梅 張兆旺

摘 要：目的 優選當歸苦參丸（參歸丸）方藥的較佳提取工藝。方法 以苦參堿、苦參總堿、阿魏酸、總多糖、干浸膏為指標，對方藥的半仿生提取液（SBE）法、半仿生提取醇沉法（SBAE）、水提法（WE）、水提醇沉法（WAE）、醇提液法（EE）分別進行進行比較研究，采用高效液相法測定阿魏酸和苦參堿，酸堿滴定法測定苦參總堿，紫外分光光度法測定總多糖，重量法測定干浸膏。結果 5種方法提取液中成分綜合評價值YSBE液>YSBAE液>YWE液>YEE液>YWAE液。結論 當歸苦參丸方藥以半仿生法提取最佳。

關鍵詞：當歸苦參丸方藥 提取方法 綜合評價

中圖分類號：TQ461 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）01（b）-0208-03

現在臨床使用的當歸苦參丸是源于《古今醫鑒》的參歸丸，當歸苦參丸功主清熱活血，祛風燥濕，殺蟲止癢，臨床主要用來治療濕熱蘊結，熏蒸于上所致的頭面生瘡，濕疹刺癢，酒糟鼻赤以及粉刺疙瘩等[1]。臨床使用廣泛，本文針對當歸苦參丸方藥5種提取工藝，從化學成分的角度，以苦參堿、苦參總堿、阿魏酸、總多糖、干浸膏為指標成分，并對測定結果進行加權綜合評判，比較5種方法（SBE法[2]、SBAE法、WE法、WAE法、EE法）優劣，進而確定參歸丸方藥的較佳提取工藝。

1 儀器與材料

藥材經作者鑒定，實驗用的當歸為傘形科植物Angelica sinensis（Oliv.） Diels的干燥根；實驗用的苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait的干燥根。

阿魏酸對照品（批號：110773-201012），苦參堿對照品（批號：110805-200508）均購自山東省藥品檢驗所，實驗所用甲醇為色譜純，其余均為分析純試劑。

2 實驗部分

2.1 樣品液的制備

SBE液的制備：精密方中25g含揮發性及脂肪油的當歸用SFE-CO2萃取后的藥渣與處方比例量25g的苦參，混合后加水回流提取3次，每次用水量分別為藥材重量的10、6、6倍，三煎水的pH依次為2.00、7.00、8.00，提取時間依次為：2h、0.5h、0.5h。提取液合并，離心，減壓濃縮并定容至500mL。

SBAE液的制備：精密量取250mLSBE液，濃縮至50mL，加入計算量的乙醇使醇度達到60%，混勻，密閉，2～10℃放置24h，離心，取上清液，回收乙醇，濃縮液再定容至250mL。

WE液的制備：精密方中25g含揮發性及脂肪油的當歸用SFE-CO2萃取后的藥渣與處方比例量25g的苦參2種藥材，采用煎煮法加熱回流提取3次，用水量分別為藥材重量的10、6、6倍，3次提取時間依次為2h、0.5h、0.5h，3次提取液合并后離心，取離心液減壓濃縮定容至500mL。

WAE液的制備：精密量取250mLWE液，濃縮至50mL，加入計算量的乙醇使醇度達到60%，混勻，密閉，2～10℃放置24h，離心，取上清液，回收乙醇，濃縮液再定容至250mL。

EE液的制備：精密方中25g含揮發性及脂肪油的當歸用SFE-CO2萃取后的藥渣與處方比例量25g的苦參2種藥材，加60%乙醇回流3次，每次用醇量分別為藥材重量的10、6、6倍，回流時間分別為2h、0.5h、0.5h，回流液離心，合并，濃縮并定容至500mL。

2.2 供試液的制備

精密量取2.1項下樣品液各2mL，水浴蒸至近干，稱取硅藻土3g與之混合均勻后，置于真空干燥箱中烘干，以乙酸乙酯：甲酸（19：1）100mL，索氏提取2h，回收溶劑，殘渣以甲醇定容至10mL，得到阿魏酸供試液（每1mL供試液相當于原處方藥材0.1g）[3]。

取2.1項下樣品液各20mL，以濃氨水調節pH值至8.00，置于蒸發皿中蒸至近干，稱取硅藻土3g與之混合均勻后，置于真空干燥箱中烘干，研細，精確量取氯仿100mL進行索氏提取2h后，回收溶劑，殘渣以氯仿定容100mL，得苦參堿供試液（每1mL供試液相當于原處方藥材0.1g）[4]。

取2.1項下樣品液各10mL，精密加入95%乙醇17mL，混勻后置于冰箱中4℃靜置24h，離心后將沉淀用水溶解，定容至50mL容量瓶，即得當歸多糖供試液（每1mL相當于原飲片0.1g），供測定總多糖含量[3]。

2.3 對照液的制備

精密稱取阿魏酸對照品9.856mg，置50mL棕色量瓶中，加70%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得阿魏酸對照液（每1ml含阿魏酸197.1μg）。

精密稱取苦參堿對照品1.31mg，分別加乙腈-無水乙醇（80：20）溶解至25mL容量瓶中并定容，即得苦參堿對照液（每1ml含苦參堿52.4μg）。

精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品25.36g定容至100mL作為對照品儲備液。分別精密吸取對照品儲備液各1、2、3、4、5、6mL定容至25mL得對照液[3]。

2.4 阿魏酸的含量測定

精取2.2項下阿魏酸供試液，按色譜柱：Shim-pack CLC-ODS柱；流動相：甲醇-含1%醋酸的水（30：70）；檢測波長：322nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；定量閥：20μL的色譜條件測定其含量[3]，結果見表2。

2.5 苦參堿的含量測定

色譜條件與系統適用性試驗：以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液（80：10：10）為流動相；檢測波長為220nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；定量閥：20μL的色譜條件測定其含量[4]。結果見表2。

2.6 苦參總堿的含量測定

取2.2項下苦參堿供試液各5mL水浴蒸干，殘渣以無水乙醇5mL溶解，水浴蒸干，殘渣以乙醚5mL溶解后，加0.01mol/L硫酸10mL，搖勻，水浴揮凈乙醚后冷卻，加新沸過的冷蒸餾水10mL，甲基紅2滴，以0.01318mol/L氫氧化鈉滴定至黃色，以無水乙醇5mL和硫酸液（0.01mol·L-1）10mL為空白對照，苦參總堿含量以苦參堿計，苦參總堿的含量測定結果[4]，見表2。

苦參總堿的含量=248×C（X0-X）/5

C：氫氧化鈉的濃度

X0：空白對照消耗的氫氧化鈉的mL數

X：供試液消耗的氫氧化鈉的mL數

248：苦參堿的分子量

2.7 總多糖的測定

以蒸餾水2.0mL加0.12%的硫酸蒽酮溶液4.0mL作為隨行空白，精密量取2.3項下葡萄糖對照液品溶液各2.0mL加0.12%的硫酸蒽酮溶液4.0mL，水浴加熱10min后，冰水浴冷卻10min，紫外-可見分光光度法測定吸光度（檢測波長為625nm）。以對照品濃度（mg/mL）為橫坐標X軸，吸收度值為縱坐標Y軸，得標準曲線：y=16.602x-0.1579，線性關系良好，測定樣品含量[3]。結果見表2。

2.8 干浸膏得率的測定

取2.1項下樣品液各5mL置于已恒重的蒸發皿中，以水浴蒸至近干，105℃烘至恒重，稱重計算干浸膏得率[3]。結果見表2。

3 數據處理

將5個指標的數據按公式=進行標準化處理。Xi，j為樣品液i中成分j的含量，為7個水平樣品液i中成分j的平均值，Sj為成分j的標準偏差，即，Xi，j為標準化后的值，加權后求和即得綜合評價Y值[3]，見表3。Y值大小順序是：YSBE液>YSBAE液>YWE液>YEE液>YWAE液。

4 小結與討論

根據各指標綜合評價結果，Y值大小順序是YSBE液>YSBAE液>WE液Y>YEE液>YWAE液。以SBE液各成分綜合評價值最大，Y值大為優，因而，五種提取法比較，以SBE法提取成分最多，成份溶出最徹底。

在5種提取方法中，半仿生提取優于水提取，半仿生提取醇沉法優于水提取醇沉法。結果說明半仿生提取法能從方藥中提取更多的成分，提取更完全，體現了半仿生提取法的優越性。

阿魏酸中有羧基和酚羥基，理化性質不穩定，需要現配現測定。苦參堿則相對穩定，實驗表明采用半仿生提取法可以提取的更加完全，應與半仿生提取法中酸堿使用有關的緣故。

半仿生提取法是模擬人體胃腸道對中藥提取的方法，對于有效成分的提取和吸收都是十分有益的。

參考文獻

[1] 張兆旺，孫秀梅.“半仿生提取法”的特點與應用[J].世界科學技術-中藥現代化，2000，2（1）：35-38.

[2] 張兆旺，王英姿.當歸苦參丸2種方法提取液的成分比較[J].中國中藥雜志，1999，24（12）：734-736.

[3] 王芳，孫秀梅，張兆旺.當歸兩種方法提取液成分比較[J].山東中醫雜志，2009，28（4）：261-262.

[4] 王芳，孫秀梅，張兆旺.苦參兩種提取方法的比較[J].中成藥，2008，30（9）：1369-1370.