清肝二十七味丸對酒精性脂肪肝模型大鼠肝細胞凋亡的影響△

烏日圖那順

(內蒙古民族大學附屬醫院,內蒙古 通遼 028007)

酒精性脂肪肝是酒精性肝病的初期階段，也是治療酒精性肝病的關鍵階段。因為在此階段采取科學的戒酒措施，在1年的時間內將有50%左右的患者能夠逐漸自愈。但還有一半的患者雖然采取戒酒措施，也不能自愈，必須采取治療措施。且在臨床上處于單純的酒精性脂肪肝階段的患者較少。多數合并酒精性肝炎，甚至肝纖維化或肝硬化。

而現今在臨床缺乏毒副作用小且療效確切的治療藥物。蒙醫學在13世紀就認識到了酒的危害。元朝著名的太醫忽思慧在其撰寫的《飲膳正要》[1]中寫到“酒味苦、甘、辛，性溫，有毒。少量飲用則通筋活絡，可祛寒，調節胃火。如過量飲之，則破三根之平衡，可減壽命。其害處多于益處”。在18世紀的蒙醫學著作《蒙醫金匱》[2]中專門提到了由酒所致的疾病。并辨證為“赫依偏盛型”“希拉偏盛型”“巴達干偏盛型”，同時列出了相應的治療方藥。伊希巴拉珠爾的《四部甘露》[3]中也提到了由酒所致的疾病。而現代蒙醫學對酒精所致疾病的認識較全面。總體上將酒精所致的疾病歸屬于“毒癥”范疇。以疾病的發展進度分為急性中毒期和慢性中毒期。從三根角度分為“赫依偏盛型”“希拉偏盛型”“巴達干偏盛型”。以侵及的部位分為降于腦、白脈，侵及心、主脈，侵及肝、膽，損傷胃、腸等4型[4-5]。正因為蒙醫學將酒精性脂肪肝歸屬于“毒癥”范疇，所以在本研究中選用了具有調節三根之平衡、清熱解毒、增進食欲等功效的蒙藥“清肝二十七味丸”做為治療藥物。

而肝細胞凋亡加快是肝臟實質發生損傷的最直接的證據。因此本研究中將其作為觀察指標。以此判定蒙藥清肝二十七味丸對酒精性脂肪肝的療效。

1 材料與方法

1.1 動物：雄性Wistar大鼠，90只，體重150～170g，合格號：SCXK-(軍2012-0004)。

1.2 藥物、試劑與儀器：清肝二十七味丸(內蒙古民族大學附屬醫院蒙藥制劑室提供，批準號：哲衛準字9604-33)，硫普羅寧片(山西云中制藥有限責任公司生產，國藥準字H20093445)，原位細胞凋亡檢測試劑盒(由北京嘉美諾斯生物工程有限公司提供)，酶標儀(瑞士Roche公司產品，批準號：11684817910)。

1.3 造模、分組：大鼠隨機分為2組，空白組15只，以蒸餾水每日0.5mL/100g連續灌胃8周；造模組75只，以56°白酒逐步增加酒精量灌胃，頭3日稀釋為15%的酒精含量以0.5mL/100g灌胃，再稀釋為30%酒精含量灌胃3日，其后增加到45%的酒精含量灌胃8周[3-4]。8周后空白和造模組每組隨機選取3只鼠處死后取肝臟，制成肝組織病理切片，顯微鏡下觀察，判定是否造模成功。然后將模型組隨機分為模型對照組、硫普羅寧組、依赫湯高、中、低劑量組。

1.4 給藥、取材：空白組和模型對照組以1%羧甲基纖維素鈉溶液每日0.5mL/100g連續灌胃4周；清肝二十七味丸高、中、低劑量組分別用1400mg/Kg、700mg/Kg、350mg/Kg的清肝二十七味丸，以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液后每日0.5mL/100g連續灌胃4周；硫普羅寧組用40mg/Kg的硫普羅寧片研磨后以1%羧甲基纖維素鈉溶液配制成混懸溶液，每日0.5mL/100g連續灌胃4周；同時繼續造模。4周后各組同時禁食不禁水16h，用20%烏拉坦0.5mL/100g腹腔注射麻醉，開腹，取肝組織，-20℃冷藏備用。

1.5 指標檢測：取肝組織，進行石蠟包埋，制備切片，采用原位細胞凋亡檢測試劑盒對組織切片進行染色，通過電子顯微鏡觀察，并記錄凋亡的細胞數量，計算凋亡率。

1.6 統計學方法：用SPSS17.0統計軟件進行統計分析。數據以xs表示，各組間數據比較采用獨立樣本t檢驗，P<0.05表示具有顯著性差異。

2 結果

2.1 各組肝細胞凋亡tunel染色對照(圖1～6)

注：如所示，圖1為空白組肝細胞凋亡情況，染色淺，表明凋亡非常少；圖2為模型組，染色最深，且面積廣，表明細胞凋亡明顯升高；圖3為硫普羅寧組，染色明顯變淺，表明凋亡顯著降低；圖4為清肝二十七味丸小劑量組，染色依然深，表明細胞凋亡無明顯改善；圖5為清肝二十七味丸中劑量組，染色同樣較深，表明細胞凋亡無明顯改善；圖6為清肝二十七味丸大劑量組，染色明顯變淺，表明細胞凋亡明顯降低，但不及硫普羅寧組明顯。

2.2 清肝二十七味丸對各組大鼠肝細胞凋亡的影響(見表1)

表1 各組大鼠肝細胞凋亡率的比較

注：與空白組比較，＊P<0.05，＊＊P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01，

3 討論與結論

酒的主要成份為酒精。而酒精并非機體所必需物質，屬異物，且有毒性。因此長期、大量攝入酒類飲品，就會發生中毒癥狀。輕者發生惡心、嘔吐、頭暈等胃腸道和腦神經癥狀。重者可導致肝、心、腦、腎等臟器的損傷。而本研究中的酒精性脂肪肝只是酒精性疾病的一類。如不及時治療，可發展為酒精性肝硬化，甚至肝癌。

而蒙古族早在13世紀就深刻認識到酒的毒害性。成吉思汗還親自頒布過限酒令[6]。與此同時蒙醫學也在13世紀就認識到了酒的危害，并在古籍文獻中記載了由酒所致的疾病和治療方法。且明確指出酒是有毒的。而現代蒙醫學更是將酒精所致的疾病直接歸屬于“毒癥”范疇，并有詳細的辨證治療方法。因此本研究選用了具有調節三根之平衡、清熱解毒、增進食欲等功效的蒙藥“清肝二十七味丸”作為治療藥物。

缺糖轉鐵蛋白(CDT)是最為特異的酒精性肝病診斷和療效判定指標,據研究，每日攝入含酒精60g，血清CDT指標就會顯著升高[7]。如果戒酒兩周以上，血清CDT未降低，反而上升，且超過30%者，表明，患者還在酗酒[8]。而肝細胞凋亡率的上升則是肝實質損傷的更直接的證據。從本研究結果看，大劑量清肝二十七味丸組的肝細胞凋亡率明顯下降，雖不及硫普羅寧，但也發生顯著下降，且有統計學意義。這表明蒙藥清肝二十七味丸具有很好的保護肝臟的作用，并且與劑量成正相關關系。因此在本研究結果的基礎上，對清肝二十七味丸的組份進行深入研究，發現其有效成份，依據蒙醫組方原則，重新進行組方，提高臨床療效，廣泛推廣應用。

[1]薛雅卓,呼慶偉,李秀紅,等.淺談飲膳正要的基本思想[J].社區醫學雜志,2007,54:60.

[2]占布拉道爾吉.蒙醫金匱[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社.1978:967.

[3]伊希巴拉珠爾.四部甘露[M].呼和浩特：內蒙古人民出版社.1998: 265.

[4]策·蘇榮扎布.蒙醫內科學[M].蒙醫藥高等教育內部使用教材,1986：187，191.

[5]楊·阿敏.方劑學[M].遼寧民族出版社,1995：174.

[6]小林高四郎. 成吉思汗(日本語版.阿奇爾譯) [M]. 呼和浩特：內蒙古人民出版社,1983:213.

[7]A llen JP, L ittenRZ, Anton RF, et a.l C arbohyd rate-d ef icient transferrin as am easure of imm oderate drink ing: rem ain ing is suea[J]. A lcohol C lin Exp Res, 1994, 18 (4) : 799.

[8]魯 彥, 高公民, 李依萍，等.缺糖轉鐵蛋白檢測在慢性酒精中毒診斷中的作用[J].檢驗醫學,2007,1:91.