乙型肝炎病毒感染患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ、OPN水平變化及意義

魯曉娟，黃賀梅，彭旭陽，閆燦

(1鄭州鐵路職業技術學院，鄭州451460；2鄭州大學第二附屬醫院)

乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范圍嚴重的公共衛生問題，每年約100萬人死于該病[1]。乙型肝炎發病轉歸同免疫機制關聯，相關細胞因子水平可直接影響乙型肝炎預后。HBV慢性感染是由病毒本身、宿主免疫決定，而宿主免疫狀態為HBV轉歸的關鍵[2]。急性HBV感染患者T細胞介導免疫反應強，可有效清除病毒，避免宿主再次感染；慢性HBV感染患者T細胞功能下降，為引起感染慢性化的關鍵因素。經HBV感染的乙型肝炎患者病情遷延、難以治愈，這主要是由于機體免疫系統抑制Th1/Th2細胞功能所致。研究表明，白細胞介素12(IL-12)、IL-21、干擾素γ(INF-γ)具有免疫調節作用。IL-12為異源二聚體糖蛋白，促進Th1應答，抑制Th2應答，發揮抗病毒效果；IL-21由CD4+T細胞分泌，促進CD8+T細胞增殖和應答，CD4+T細胞輔助CD8+T細胞在控制HBV慢性感染中十分重要[3]。文獻[4]報道，骨橋蛋白(OPN)可啟動Th1反應，導致Th1/Th2功能紊亂，引起肝壞死。本研究觀察了137例HBV感染患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平變化，并探討其臨床意義。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年2月～2017年3月在鄭州大學第二附屬醫院就診的HBV感染患者。納入標準：①診斷符合中華醫學會肝病學分會制定的標準；②患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標準：①合并感染甲肝、丙肝等其他肝炎病毒；②有遺傳性肝病、膽汁淤積性肝病和自身免疫性肝炎；③入院前6個月接受過抗乙肝和免疫調節治療。共收集患者137例(HBV組)，其中乙肝攜帶33例[男20例、女13例，年齡(39.84±4.41)歲]、急性乙肝37例[男21例、女16例，年齡(40.25±5.13)歲]、慢性乙肝42例[男27例、女15例，年齡(39.89±3.82)歲]、乙肝肝硬化25例[男14例、女11例，年齡(40.01±5.11)歲]。同時選取60例健康志愿者作為對照組，男35例、女25例，年齡(40.23±4.39)歲。HBV組不同感染狀態者與對照組性別、年齡比較差異無統計學意義(P均>0.05)。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN檢測方法 所有研究對象取空腹靜脈血5 mL，以3 500 r/min離心10 min，將分離的血清-20 ℃保存。用雙抗體夾心ELISA法檢測血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN，試劑盒購自上海恒遠生物公司，按照說明書操作。

2 結果

2.1 兩組血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較 HBV組中急性乙肝患者血清IL-12、IL-21和IFN-γ水平均高于乙肝攜帶、慢性乙肝和乙肝肝硬化患者及對照組(P均<0.05)，乙肝肝硬化患者血清OPN水平均高于乙肝攜帶、急性乙肝、慢性乙肝患者及對照組(P均<0.05)。見表1。

表1 兩組血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較

注：與對照組比較，aP<0.05；與乙肝攜帶比較，bP<0.05；與急性乙肝比較，cP<0.05；與慢性乙肝比較，dP<0.05。

2.2 HBV組不同HBeAg表達患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較 HBV組中，HBeAg陰性表達者血清IL-12水平高于HBeAg陽性表達者(P<0.05)，兩者血清IL-21、IFN-γ和OPN水平比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 HBV組不同HBeAg表達患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較

2.3 HBV組不同HBV-DNA復制程度患者血清L-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較 HBV組中，HBV-DNA≤103copies/mL者血清IL-12水平高于104～106copies/mL和≥107copies/mL者(P均<0.05)，兩者血清IL-21、IFN-γ和OPN水平比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表3。

3 討論

表3 HBV組不同HBV-DNA復制程度患者血清L-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平比較

注：與≤103copies/mL者比較，aP<0.05；與104～106copies/mL者比較,bP<0.05。

WHO估計，全世界至少3.5億人為HBV攜帶者，每年有大量患者死于乙型肝炎引發的相關疾病。乙型肝炎嚴重威脅患者生命安全，在臨床已得到廣泛關注[5]。乙型肝炎患者在HBV感染后病情延長、難以治愈，直接影響患者正常生活。目前研究[6]認為，乙型肝炎的發生、轉歸同細胞免疫密切相關，細胞因子對HBV產生復雜作用。HBV感染患者的免疫因素在肝細胞損傷、病毒清除中十分重要，但目前相關的機制尚未完全明確。目前多數研究[7]認為，CD4+T細胞和CD8+T細胞參與免疫抑制，導致肝損傷，直接影響疾病進展和轉歸。

CD8+T細胞為HBV感染后清除病毒的T細胞，感染早期刺激產生CD8+T細胞，產生抗病毒效果。CD8+T細胞的產生需要CD4+T細胞輔助，慢性HBV患者體內CD4+T細胞功能耗竭。研究[8]顯示，HBV合并HCV感染患者CD4+T細胞和CD8+T細胞可通過相互作用而清除病毒，增加患者體內CD4+T細胞和CD8+T細胞數量可以提高HBV病毒的清除效果。

IL-12由B細胞、巨噬細胞分泌，可促進Th1增殖，抑制Th2分化，增加血清中IL-15、IL-18、IFN-γ水平，而IFN-γ可促進IL-12產生。因此，IFN-γ和IL-12在調節Th分化上具有協同作用，促進Th2增殖，使Th1和Th2互相協同。IL-21是由CD4+T細胞分泌的細胞因子，在腫瘤、自身免疫病、控制病毒中十分重要[9]。研究[10]指出，IL-21可促進CD3抗體活化和外周T細胞增殖，促進CD8+T細胞活化和對病毒的清除，提高CD8+T細胞的免疫功能。Th17為IL-21的重要分泌細胞，在HBV感染中具有重要的作用。肝功能衰竭患者血清IL-21水平較高，可活化B細胞、T細胞，進而清除病毒感染或釋放炎性因子導致肝細胞損傷。IFN-γ為抗病毒免疫調節因子，可調節免疫功能，抑制HBV合成，同時可經非溶細胞機制抑制HBV復制[11]。在動物試驗中，CD8+T細胞、NK細胞、Th細胞識別HBV抗原，分泌IFN-γ可有效抑制肝臟HBV復制[12]。

OPN為帶負電荷的分泌型磷酸蛋白，參與多種病理和生理過程，為細胞免疫和Th細胞免疫的主要因子。研究[13]發現,OPN可刺激巨噬細胞分泌IL-12。近年來，OPN水平改變在肝硬化發生發展和慢性肝炎中的作用逐漸受到重視。OPN可加速肝纖維化，肝癌組織OPN表達明顯高于正常肝組織。研究[14]指出，正常肝細胞內基本不表達OPN，原發性肝癌組織中OPN表達升高。在臨床中，OPN可作為原發性肝細胞癌術后肝轉移復發和預后的指標[15]。本研究顯示，乙肝肝硬化者OPN高于對照組、乙肝攜帶者、急性乙肝者和慢性乙肝者，考慮這可能與OPN可促進肝纖維化的發生，而肝硬化患者纖維化程度較重有關。

綜上所述，不同HBV感染狀況患者血清IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平有所差異，其中IL-12與患者HBeAg表達和HBV-DNA病毒載量有一定關系。在臨床診斷和治療過程中可檢測IL-12、IL-21、IFN-γ及OPN水平，用以輔助制定治療方案并評估預后。

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