異基因造血干細胞移植后血清可溶性白介素-2受體對急性移植物抗宿主病的預測研究

劉文靜,蘇 龍,劉曉亮,譚業輝,劉 宇,趙楊祉,宋 飛,高素君

(吉林大學第一醫院 血液科，吉林 長春130021)

異基因造血干細胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是唯一有望治愈某些惡性血液系統疾病的治療手段。盡管同種異體反應性T細胞可有效控制原發病的復發，但其亦可攻擊受者的正常細胞、組織或器官，導致急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的發生。allo-HSCT后aGVHD的發生率約為30%-50%[1,2]。雖然有多種藥物與藥物組合用于預防或治療aGVHD，但是至今尚無任何藥物或藥物組合能夠顯著改善aGVHD患者的預后[3]。aGVHD的成功治療在于早期識別與早期干預。

白介素-2(interleukin-2,IL-2)在T細胞增殖、活化及效應功能方面均發揮十分重要的作用。已有研究報道IL-2可溶性受體(soluble IL-2 receptor,sIL-2R)與aGVHD的發生有關[4-6]，但不同研究觀察時間點不盡相同。本課題組于移植后規律時間點監測sIL-2R水平變化，并分析其對aGVHD的預測意義，同時確定具有較高敏感性與特異性的截點值，以便快速實現臨床轉化。現將研究結果做一報道。

1 材料與方法

1.1研究對象回顧分析2014年9月至2016年6月于吉林大學第一醫院血液科接受異基因造血干細胞移植患者12例。患者中位年齡34歲(6-64歲)，其中男性6例，女性6例。本研究得到吉林大學第一醫院倫理委員會批準并獲得患者知情同意。

1.2預處理方案及aGVHD的預防患者allo-HSCT移植類型包括同胞全相合移植及親緣單倍體移植，具體預處理方案及aGVHD預防方案見課題組前期報道[7]。

1.3細胞因子檢測患者移植前、移植后+14天、+28天、+42天、+60天、+90天采集外周血標本3 ml，1000rpm離心5 min，吸取上層血清，凍存于-80℃備用。細胞因子檢測采用美國R&D公司的人sIL-2R ELISA試劑盒，具體操作過程參照樣品說明書。

1.4統計學處理本研究采用SPSS(17.0版)軟件包處理數據。計量資料組間比較采用獨立樣本t檢驗(正態分布且整體方差齊)或Mann-Whitney檢驗(偏態分布或整體方差不齊)。P<0.05為有統計學差異。

2 結果

2.1患者一般資料本組患者中急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)6例，急性淋巴細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)4例，骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndromes,MDS)2例。6例發生aGVHD，6例未發生aGVHD，患者aGVHD發生情況見表1。發生aGVHD患者經激素聯合環孢素或他克莫司治療，1例患者采用第三方間充質干細胞輸注治療(例4)。其中4例治愈，2例因重度移植物抗宿主病而死亡(例3與例4)。

表1 Allo-HSCT后發生aGVHD的患者情況

2.2血清sIL-2R檢測本研究檢測了allo-HSCT患者移植前、移植后+14d、+28天、+42天、+60天與+90天血清sIL-2R水平，試劑盒健康人參考值為<1 000 pg/ml。ELISA標準曲線見下圖1。

圖1 ELISA檢測血清sIL-2R標準曲線

全部患者檢測血清sIL-2R水平為986-6957 pg/ml。按照移植后不同時間點及是否發生aGVHD將患者的檢測結果列為圖2。由圖2可見，發生aGVHD與未發生aGVHD的患者移植前、移植后+14天及+90天血清sIL-2R有明顯差別(均P<0.05)。

圖2 異基因造血干細胞移植后不同時間點sIL-2R水平檢測

2.3移植后+14天血清sIL-2R對aGVHD的預測意義見圖3。考慮到aGVHD常于移植后1個月左右開始出現，因而移植后早期指標預測aGVHD更有意義。我們采用移植后第+14天血清sIL-2R預測aGVHD，ROC曲線下面積為0.95，cutoff值為3658 pg/ml，大于此值者發生aGVHD風險明顯增加(敏感性為100%，特異性為80%，P=0.027)。

圖3 移植后+14天sIL-2R水平預測aGVHD發生

3 討論

aGVHD是限制allo-HSCT成功的關鍵因素之一，也是移植相關死亡的主要原因之一。早期診斷與治療是aGVHD有效治療的保證。目前aGVHD的診斷主要依據臨床表現，尚缺乏早期、敏感、特異的診斷指標，而常用的aGVHD分級系統存在觀察者主觀差異、初始分級并不能完全反映疾病嚴重程度等缺陷。因此，如何通過生物標志物水平變化預測aGVHD的發生及其嚴重程度是國內外研究者關注的熱點之一。盡管目前有不同研究探究多種生物標志物與aGVHD的相關性[8-10]，但大部分研究結果仍需進一步在臨床中驗證。已有研究報道移植后sIL-2R水平與aGVHD的發生有關[11-13]。研究者通過allo-HSCT后早期監測sIL-2R水平，發現移植后早期即可出現sIL-2R水平的升高，2-4周達峰值。此外，發生aGVHD患者sIL-2R峰值水平明顯高于未發生aGVHD的患者，而sIL-2R水平的高低可能與aGVHD的嚴重程度有關[11-13]。與報道一致，本研究也發現移植后+14d發生aGVHD患者的sIL-2R水平顯著高于無aGVHD患者。本研究還發現發生aGVHD患者移植前sIL-2R水平明顯高于無aGVHD患者，與報道不一致[6]；我們發現移植后+90天發生aGVHD的患者sIL-2R水平亦明顯升高。上述結果可能與本研究樣本較少有關，且鑒于大部分此類研究樣本量均較少，上述結果仍需擴大樣本研究證實。

既往研究及本研究均發現移植后早期sIL-2R水平與aGVHD發生有關，但是sIL-2R預測aGVHD發生的最佳截點目前并不清楚，這也可能部分解釋了sIL-2R預測aGVHD尚未實現臨床轉化。本研究通過ROC曲線分析發現，移植后+14天血清sIL-2R預測aGVHD的最佳截點值為3658 pg/ml，且具有高敏感性與特異性。因此，通過檢測allo-HSCT后+14天sIL-2R水平可能作為預測aGVHD發生的指標之一，為aGVHD早期干預提供參考依據。

有研究報道allo-HSCT后sIL-2R水平的升高程度與供者類型及干細胞來源有關[14]。在我中心及中國造血干細胞移植登記中心，親緣單倍體已成為我國主要(60%-70%)的allo-HSCT移植類型，因此，同胞全相合及親緣單倍體移植患者中sIL-2R水平變化規律、最佳截點值有無區別，尚需研究探索。血清sIL-2R升高程度是否可預測aGVHD的嚴重程度仍需研究證實。此外，本研究僅采用研究組，尚缺乏驗證組進一步優化研究結果。

綜上，本研究發現allo-HSCT后早期sIL-2R水平的升高與移植后aGVHD的發生相關，并且初步確定了+14天用于預測aGVHD發生的截點值，這可能為今后深入研究sIL-2R預測aGVHD發生及對其早期分層干預提供參考。

作者簡介：劉文靜(1986-)，女，在讀碩士，主要從事造血干細胞基礎與臨床研究;高素君(1963-)，女，醫學博士，博士研究生導師，主要從事造血干細胞基礎與臨床研究。

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