三亞地區新生兒α-地中海貧血分子流行病學調查

王玉豐，田秀娟，周玉海，唐青藍，李志霞，王 丹，黎士昭，譚 藍

(1.海南省第三人民醫院 檢驗科，海南 三亞572000； 2.三亞市婦幼保健院 婦產科，海南 三亞572000)

α-地中海貧血(α-thalassemia)(簡稱“α-地貧”)是一組發病率極高的遺傳性溶血性疾病，主要分布于包括我國南方在內的熱帶及亞熱帶地區。重型α-地貧(也稱Bart′s水腫胎)屬致死性疾病，通過對雙親地貧篩查發現基因攜帶者，并對高風險個體進行產前診斷淘汰重型α-地貧兒是目前公認有效的預防策略。我國長江以南大部分地域，尤其是廣東、廣西及海南是α-地貧的高發區。三亞市地屬海南省南部熱帶地區，主要聚居漢、黎2民族人群。為了摸清該地區人群α-地貧的發生率及基因突變譜特征，課題組對該市3012新生兒進行α-地貧流行病學調查，現報告如下。

1 材料與方法

1.1調查對象將2014年6月-2016年12月于海南省第三人民醫院及三亞市婦幼保健院出生的新生兒納為調查對象，新生兒雙親要求至少一方為三亞戶籍，連續抽樣。共計調查新生兒3012例，其中男性1592例(52.86%)，女性1420例(47.14%)。新生兒雙親均為漢族者(漢-漢)1973例(65.50%)，雙親各為漢、黎族者(漢-黎)209例(6.94%)，雙親均為黎族者(黎-黎)830例(27.56%)。

1.2方法

1.2.1研究策略 為避免部分α-地貧靜止型的漏診，本研究對所有入選新生兒的血樣標本均進行α-地貧基因檢測。同時用自行設計的調查表對新生兒雙親的臨床資料進行詳細記錄，內容包括籍貫、戶籍、民族、孕前或孕期地貧篩查情況等。

1.2.2樣本采集及基因組DNA提取 新生兒出生時常規斷臍,采用EDTA-K2抗凝管留取臍血標本2 ml。采用Ezup柱式血液基因組DNA抽提試劑盒進行DNA提取。試劑由上海生工生物工程技術有限公司提供，操作嚴格按照說明書進行。

1.2.3地貧基因檢測 對所有DNA樣本均進行α-地貧基因檢測，其中東南亞缺失(--SEA/)、右缺失(-α3.7/)及左缺失(-α4.2/)3 種常見缺失型采用Gap-PCR 法檢測；Hb WS(αWSα/)、Hb QS(αQSα/)及Hb CS(αCSα/)3 種常見點突變型采用PCR結合反向斑點雜交(PCR-RDB)進行檢測檢測。試劑盒由深圳亞能生物技術有限公司提供，操作均嚴格按照說明書進行。

1.3統計學處理采用SPSS17.0軟件進行統計學處理，計數資料以率(%)表示，率的比較采用χ2檢驗，P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1α-地貧攜帶率在3012例新生兒中，經基因分析確診為α-地貧767例，攜帶率為25.46%，其中雙親民族背景為“漢-漢”、“黎-黎”及“漢-黎”新生兒的α-地貧攜帶率分別為11.86%、54.46%、38.76%，三者比較，差異有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1 不同民族背景新生兒α-地貧攜帶率(%)

2.2不同民族背景α-地貧突變類型及構成比在雙親民族背景為“漢-漢”、“黎-黎”及“漢-黎”的767例攜帶者中共檢出18種α-地貧基因突變類型，見表2。其中本地區“漢-漢”新生兒檢出率最高的基因型為--SEA/αα(29.91%)，其次為-α4.2/αα(22.65%)及-α3.7/αα(21.79%)；而在“黎-黎”及“漢-黎”新生兒中均以-α4.2/αα及-α3.7/αα攜帶率最高，--SEA/αα較為少見。不同民族背景3種常見α-地貧缺失型等位基因頻率及構成比，見表3。

2.3新生兒雙親孕前或孕期地貧干預狀況對3012例新生兒雙親進行回顧性調查，其中母親在婚前、孕前或孕期曾接受地貧篩查(含單項血常規及血常規結合Hb電泳分析)者為2170例，占72.05%；父親中曾接受地貧篩查者僅395例，占13.11%。

表2 不同民族背景新生兒α-地貧基因型分布 (%)

表3 不同民族背景新生兒3種常見α-地貧缺失型等位基因頻率(%)及構成比(%)

3 討論

據現有流行病學資料[1-3]表明，α-地貧在海南黎族人群的基因攜帶率超過50%，是我國屈指可數的地貧重災區之一。三亞市位于海南省南部熱帶地區，與周邊的樂東、陵水、保亭及五指山等市縣一樣是黎族人群主要聚居地，因此也屬傳統的α-地貧重災區。然而，隨著近年來海南省“國際旅游島”建設的推進，三亞已成為熱門的移民城市，其人口結構也隨之發生改變。為了更好地在三亞地區實施人群地貧防控計劃，摸清新形勢下該地人群α-地貧基因攜帶率及基因突變譜是項尤為重要的工作。本調查結果顯示，三亞地區 “漢-漢”(雙親均為漢族)新生兒α-地貧攜帶率為11.86%，介于廣東(8.53%)[4]與廣西(17.55%)[5]之間。而“黎-黎”(雙親均為黎族)及“漢-黎”(雙親各為漢、黎族)新生兒α-地貧攜帶率則分別高達54.46%及38.76%，說明三亞地區“黎-黎”新生兒與全省黎族人群情況一致，仍維持極高的α-地貧攜帶率水平，而黎、漢族通婚則不失為降低黎族α-地貧基因攜帶率之有效途徑。關于α-地貧高發區的地域分布，目前公認為人類抗瘧疾自然選擇的結果。作者認為本地區黎族α-地貧攜帶率較漢族顯著增高的原因，也可能與黎族人群過去世代生活于熱帶邊遠山區，長期受瘧原蟲感染的風險高于漢族人群有關。

α-地貧主要由α-珠蛋白基因缺失所導致，至今發現的α-地貧基因缺失型已超過20種，我國以--SEA/、-α3.7/及-α4.2/3種缺失型最為常見。此外，少數α-地貧由α-珠蛋白基因點突變而引起，目前全球報道的α-珠蛋白基因點突變近70種[6]，αWSα/、αQSα/及αCSα/為我國常見的非缺失型α-地貧。α-珠蛋白基因突變譜在不同地區、種族及不同民族人群間差異顯著。我國廣東[4]、廣西[5,7]、福建[8,9]及貴州[10]等省份以--SEA/最常見，其次為-α3.7/及-α4.2/。云南省[11]也以--SEA/為主，但αCSα/檢出率高于-α4.2/。本次調查結果顯示，三亞地區漢、黎2民族新生兒間α-地貧基因突變譜明顯不同，在“漢-漢”(雙親均為漢族)新生兒中檢出率最高的是--SEA/αα(29.91%)，其次為-α4.2/αα(22.65%)及-α3.7/αα(21.79%)。--SEA/、-α4.2/及-α3.7/等位基因頻率分別為2.28%、2.18%及2.00%。而“黎-黎”(雙親均為黎族)新生兒中檢出率排前三的基因型依次為-α3.7/αα(26.55%)、-α4.2/αα(25.89%)及-α4.2/-α3.7(14.82%)，--SEA/αα檢出率僅為2.88%，位于-α4.2/-α4.2(7.53%)、-α3.7/-α3.7(6.20%)及非缺失型αWSα/αα(6.86%)之后。--SEA/、-α4.2/及-α3.7/等位基因頻率依次為1.33%、16.03%及15.30%，可見三亞地區黎族新生兒α-地貧基因乃以-α4.2/及-α3.7/為主，與文獻[1-3]報道及課題組前期調查[12]的瓊南黎族人群α-地貧突變譜相符。另外，在“漢-黎”(雙親各為漢、黎族)新生兒中檢出率最高的基因型也是-α3.7/αα(39.51%)、-α4.2/αα(37.04%)，但--SEA/-α3.7(3.70%)及--SEA/-α4.2(2.47%)檢出率較“黎-黎”新生兒有所增高，其--SEA/、-α4.2/及-α3.7/等位基因頻率分別為1.67%、10.05%及9.81%，提示本地區黎、漢通婚雖一定程度降低黎族人群α-地貧的攜帶率，但同時也可能提高新生兒血紅蛋白H病的發生風險。

α-地貧對個體的危害程度取決于α-珠蛋白基因缺陷類型，其中重型α-地貧(Bart′s水腫胎)為致死性疾病，其基因型來自父母各自的--SEA /基因。而中間型α-地貧(Hb H病)雖非致死，但可不同程度影響患者健康，部分患者需靠定期輸血維持生命，其基因型為(--/-α或--/αTα)。要避免或降低α-地貧重型及中間型患兒的發生率，目前唯一有效途徑就是加強夫妻雙方孕前或孕早期地貧篩查，以及對高風險孕婦進行產前診斷。但從本文結果看，當前三亞地區夫妻雙方，尤其是夫方地貧篩查的依從性乃有待提高。原因可能與本地區人群地貧防控計劃推行相對較晚有關(海南省自2012年起先行在東方、定安、陵水及保亭等4個市縣實施地貧防控試點項目，于2013年輻射到全省農村，至2015年才實現全省城鄉全覆蓋)。本研究首次對三亞地區新生兒展開α-地貧流行病學調查，初步掌握該地區α-地貧的人群攜帶率及基因突變譜特征，為衛生計生部門建立和實施符合本地區實際情況的地貧干預模式奠定基礎。

作者簡介：王玉豐(1978-)，男，醫學碩士，副主任檢驗師，主要從事醫學遺傳學檢測及研究工作。

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