軟皮熱敷散的醇提工藝優選*

李佰成 ，任 慧 ，張 紅 △

1陜西省中醫醫院，陜西 西安 710003；2陜西省中醫藥研究院

硬皮病是一種病因不明的結締組織病，臨床表現為皮膚硬化和內臟器官的纖維化［1］。軟皮熱敷散是陜西省中醫醫院皮膚科用于治療硬皮病的經驗處方，療效顯著。該方由艾葉、桂枝、陳皮、山豆根、威靈仙、劉寄奴、紅花等中藥組成，具有活血通絡，散寒祛濕的功效，用于治療皮痹、凍瘡、雷諾氏病、蛇串瘡后遺神經痛等病。由于該藥使用前需用布包上籠屜加熱30分鐘后熱敷，操作繁復，為了方便使用，考慮將其改為軟膏劑［2-3］。處方中山豆根、威靈仙等藥材的活性成分為生物堿、黃酮、三萜、酚酸等小分子物質［4-5］，故而考慮以乙醇提取為宜。因此，重點考察乙醇濃度、提取次數、溶劑量及提取時間，以苦參堿含量和干膏得率為評價指標，借助正交試驗優選其醇提工藝［6-7］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津2010A-UV型高效液相色譜儀(工作站：CLASS-VP，島津公司)；Innoval NH2 色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm，天津博納艾杰爾科技有限公司)；101型電熱鼓風干燥箱(北京市永光明醫療儀器廠)；HSY-2MB型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；HZ2001A型稱量天平(慈溪紅鉆衡器設備有限公司)；BT25S型電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)。

1.2 試藥 山豆根、威靈仙等藥材購自陜西省中醫醫院；苦參堿(中國食品藥品檢定研究院，批號：110721-200613)；色譜純乙腈(美國FISHER公司)，純化水，無水乙醇、氯仿、甲醇、磷酸、氨水均為分析純。

2 方法與結果

軟皮熱敷散中醇提藥材的提取工藝，以山豆根的活性成分苦參堿的含量及干膏得率為評價指標，采用正交試驗考察乙醇濃度、提取次數、溶劑量、提取時間對該工藝的影響，優選出最佳醇提工藝。

2.1 樣品制備 按軟皮熱敷散處方比例稱取山豆根、威靈仙等藥材，共9份，按正交試驗設計安排提取、過濾，合并濾液，備用。

2.2 苦參堿測定

2.2.1 色譜條件［8-9］Innoval NH2色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：乙腈 - 無水乙醇 -3%磷酸(86∶7∶7)，檢測波長；220 nm，流速：1 mL/min，柱溫：25℃，進樣量：10 μL。

2.2.2 對照品溶液制備 精密稱取苦參堿對照品適量，加流動相制成每1 mL含苦參堿75 μg的對照品溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備［10］取1/30體積的提取液，置水浴鍋蒸干，用氯仿-甲醇-濃氨試液(40∶10∶1)轉移至 25 mL 容量瓶中，超聲處理 20 分鐘，冷卻至室溫后定容，濾過，精密吸取5 mL，蒸干，用甲醇轉移至5 mL容量瓶，定容，即得。

2.2.4 陰性對照品溶液制備 按照處方比例稱取軟皮熱敷散藥材(去除山豆根)［11］，按軟皮熱敷散醇提藥材的提取工藝制備提取液，制得陰性對照提取液，再取與供試品相同的量，按供試品溶液的制備方法處理，得陰性對照品溶液。

2.2.5 專屬性試驗 吸取上述對照品、供試品、陰性對照品溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品色譜與苦參堿對照品色譜相比在相同時間處有色譜峰，陰性對照品溶液與苦參堿對照品色譜相比在相同時間處無吸收峰，表明處方中其他藥材對該方法測定苦參堿含量無干擾［12］。

2.3 干膏得率測定 精密量取醇提液100 mL，置于已恒重的蒸發皿中，水浴蒸干后將其置于105℃烘箱干燥3小時［13］，取出后放置在干燥器中30分鐘冷卻至室溫，迅速稱定重量，直至恒重，計算干膏得率。

2.4 正交試驗設計 按處方量比例稱取山豆根、威靈仙等藥材，隨機取樣編為1～9個試驗號。以乙醇濃度、提取次數、溶劑量、提取時間為考察因素，以苦參堿含量和干膏得率為評價指標，權重系數分別為 70%、30%，根據權重系數計算綜合評分［14］。按正交表L9(34)中每個試驗號要求進行試驗，篩選最佳醇提條件，因素水平安排見表1，正交試驗設計及結果見表2，方差分析見表3。

表1 正交試驗因素水平

表2 正交試驗設計及結果

表3 正交試驗方差分析結果

借助直觀分析正交試驗數據，最佳醇提條件為 A2B3C1D2；由方差分析結果判斷因素 A、B、C、D 對試驗結果影響程度為B＞D＞C＞A，4個因素均無顯著影響；而因素B在水平2、3的均值接近，綜合考慮該醇提工藝的最佳條件為A2B3C1D2，即加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小時。

2.5 驗證試驗 按照軟皮熱敷散處方比例平行稱取藥材3份，分別加6倍量的70%乙醇提取2次，每次1.5小時，濾過、合并濾液。通過“2.2”“2.3”項下方法分別測定其苦參堿含量和干膏得率，計算綜合得分，結果表明優選出的醇提工藝條件合理，穩定可行，重現性好。

3 討論

軟皮熱敷散中山豆根、威靈仙中主要活性成分為生物堿、黃酮類、三萜等，依據這些活性物質的性質，本試驗分別考察了50%、60%、70%乙醇提取軟皮熱敷散藥材的效果。而生物堿類成分是山豆根的主要活性物質，也是其藥效物質基礎［15］，故本醇提工藝研究以山豆根中苦參堿的含量為主要評價指標。結果發現軟皮熱敷散70%醇提液中苦參堿的含量最高，因此醇提工藝的正交試驗設計中乙醇濃度分別設置為60%、70%、80%。試驗過程中流動相的變化對苦參堿測定結果影響較高，為使測定結果穩定可靠，將流動相配制好后采用等度洗脫測定苦參堿的含量［9］。

［1］閆小寧，韓世榮，李文彬，等.“熱敷藥”對硬皮病小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量的影響［J］.中國中西醫結合皮膚性病學雜志，2011，10(6)：353-355.

［2］林俊華，蘇明武，劉穎，等.防茄軟膏的制備工藝研究［J］.首都醫藥，2014，(14)：86-88.

［3］夏晨，談戈.淺談我院中藥軟膏劑的制備工藝與質量控制［J］.北方藥學，2016，13(3)：112-113.

［4］何曉艷，周應軍，田洪.山豆根化學成分及藥理作用研究進展［J］.中南藥學，2011，9(7)：525-528.

［5］羅奎元，強宇靖，高慧琴.威靈仙化學成分及藥理作用研究進展［J］.甘肅中醫學院學報，2015，32(5)：60-63.

［6］王東東，孫蕓，周光.正交實驗法優選華佗麻藥加減方乳膏劑提取工藝的研究［J］.西部中醫藥，2017，30(2)：28-30.

［7］汪海斌，吳電彩，馬玲，等.正交試驗研究枇杷清肺顆粒的醇提工藝［J］.安徽醫藥，2015，19(2)：222-224.

［8］王少平，曾以旺，陳燕瑞，等.HPLC測定濕疹康噴劑中苦參堿與氧化苦參堿的含量［J］.西部中醫藥，2014，27(11)：25-28.

［9］李彤暉，馬久太，李曄，等.燥濕清熱顆粒中苦參堿和氧化苦參堿含量測定方法的研究［J］.陜西中醫，2013，34(7)：899-901.

［10］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：27.

［11］孫麗娜，劉小虹，劉建博，等.復方五指毛桃顆粒的提取工藝研究［J］.中國藥房，2017，28(28)：3976-3979.

［12］徐文杰，周蓉，王洛臨，等.活血化瘀顆粒提取工藝優選［J］.中藥材，2014，37(9)：1667-1672.

［13］劉軍鋒，華瑛，王紅波，等.痰飲膏劑型改進的工藝研究［J］.陜西中醫，2014，35(7)：914-916.

［14］李彩東，潘新波，張偉，等.多指標正交試驗法優選降脂復肝膠囊提取工藝［J］.西部中醫藥，2017，30(7)：49-54.

［15］程錢，王金鳳，王寶麗，等.山豆根化學成分、生物活性及質量控制研究進展［J］.遼寧中醫藥大學學報，2017，19(7)：119-125.