梓醇對(duì)坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型神經(jīng)病理性疼痛的影響*

鄭奇輝，王迎斌，劉 偉，王書(shū)寶，黃生輝

蘭州大學(xué)第二醫(yī)院麻醉科，甘肅 蘭州 730030

神經(jīng)病理性疼痛是一種外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)受到結(jié)構(gòu)損傷或功能紊亂而出現(xiàn)的慢性疼痛，臨床常表現(xiàn)為長(zhǎng)期慢性自發(fā)疼痛、感覺(jué)異常、痛覺(jué)超敏、異常疼痛，持續(xù)數(shù)天、數(shù)月甚至數(shù)年，是一種持續(xù)頑固性疼痛疾病［1］。目前多采用阿片類(lèi)鎮(zhèn)痛藥、非甾體抗炎藥類(lèi)和抗抑郁類(lèi)藥，但總體治療效果不佳，副反應(yīng)較多。故新型鎮(zhèn)痛藥的開(kāi)發(fā)和需求顯得越來(lái)越重要。梓醇是中藥熟地黃的有效成分，具有有效的抗炎、抗糖尿病和神經(jīng)保護(hù)作用［2-3］，本研究采用大鼠慢性擠壓神經(jīng)損傷模型探討梓醇對(duì)神經(jīng)性疼痛的治療效果及其機(jī)理，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物選擇及模型制作 選用SPF級(jí)SD大鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SYXK(甘)2011-0001，雄性，體質(zhì)量180～200 g。坐骨神經(jīng)結(jié)扎(CCI)模型按照文獻(xiàn)［4-6］方法制作，腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉(400 mg/kg腹腔給藥)，達(dá)到麻醉效果后大鼠取俯臥位四肢固定，左側(cè)后肢未行手術(shù)，右側(cè)后肢實(shí)施手術(shù)，剃毛，無(wú)菌消毒后切開(kāi)，分離皮下組織及肌肉組織，在大腿中部水平暴露坐骨神經(jīng)，并用4-鉻腸線按1 mm間距松弛結(jié)扎神經(jīng)，共結(jié)扎4根，無(wú)菌手術(shù)線縫合傷口。在結(jié)扎的坐骨神經(jīng)旁埋置一根聚乙烯導(dǎo)管以預(yù)防坐骨神經(jīng)周?chē)植柯樽碇薪?jīng)皮注射或者手術(shù)暴露后注射中發(fā)生的麻醉起效時(shí)間不足等問(wèn)題。假手術(shù)組不做神經(jīng)結(jié)扎，其余實(shí)驗(yàn)操作與此相同。所有動(dòng)物術(shù)后3天傷口恢復(fù)，不進(jìn)行任何被動(dòng)運(yùn)動(dòng)和行為學(xué)測(cè)試，適量給予抗生素抗感染治療。

1.2 行為學(xué)實(shí)驗(yàn) 所有實(shí)驗(yàn)大鼠均在術(shù)前及術(shù)后給藥前、給藥后第1～7天使用電子觸覺(jué)測(cè)試裝置，按照Mitrirattanakul等［7］的方法，通過(guò)向上移動(dòng)觸覺(jué)測(cè)試長(zhǎng)絲刺激至后爪中心，直到出現(xiàn)縮足反射，測(cè)定并自動(dòng)記錄機(jī)械縮足反射閾值(MWT)。梓醇對(duì)炎性痛覺(jué)過(guò)敏的抑制率用最大鎮(zhèn)痛效應(yīng)百分率(maximal possible effect，MPE%)表示，MPE%=(給藥后閾值-給藥前閾值)/(基線閾值-給藥前閾值)×100。行為測(cè)試時(shí)間為 09∶30 至 18∶00 之間。

1.3 動(dòng)物分組 對(duì)所有實(shí)驗(yàn)老鼠進(jìn)行編號(hào)，用隨機(jī)軟件抽取編號(hào)進(jìn)行分組，分為假手術(shù)組(sham group)、溶劑組(vehicle group)、陽(yáng)性藥物組(巴噴丁，gabapentin group)、梓醇組(catalpol 1、5、25、125 mg/kg)，行為測(cè)試前動(dòng)物習(xí)慣測(cè)試房間至少30分鐘。

1.4 給藥方案 術(shù)后4日起，各組分別用溶劑(生理鹽水)、巴噴丁(50 mg/kg，購(gòu)自 Sigma，批號(hào)：24271605)、梓醇(購(gòu)自成都德思特生物，批號(hào)：110808201510)1、5、25、125 mg/kg腹腔給藥，1次 /d，連續(xù)7天。其他試劑均購(gòu)自國(guó)產(chǎn)分析純。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，組內(nèi)比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，組間比較用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CCI模型中MWT值變化情況 術(shù)前及術(shù)后假手術(shù)組大鼠MWT值曲線無(wú)明顯變化，其他各組大鼠經(jīng)坐骨神經(jīng)結(jié)扎術(shù)后，與假手術(shù)組比較MWT值顯著下降(P＜0.001)。術(shù)后第4日開(kāi)始每天腹腔內(nèi)分別注射1次溶劑生理鹽水、巴噴丁50mg/kg及梓醇1、5、25、125 mg/kg 后，發(fā)現(xiàn)梓醇和巴噴丁能明顯提升 CCI大鼠的 MWT值，并且梓醇(1、5、25、125 mg/kg)組及陽(yáng)性藥物組MWT與溶劑組比較具有顯著性差異(P＜0.001)；發(fā)現(xiàn)隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠的MWT值逐漸回升，在治療第7天達(dá)到最大值。并且隨著梓醇治療劑量的增加，MWT值也明顯升高，呈劑量依賴性，以梓醇125 mg/kg最為明顯，見(jiàn)圖1。

圖1 各組CCI大鼠MWT值變化情況

2.2 CCI大鼠MPE值的變化 巴噴丁(50 mg/kg)和梓醇(1、5、25、125 mg/kg)連續(xù) 7 天腹腔注射治療，第 7 天 MPE 值分別為(61.19±6.18)%、(31.94±5.64)%、(38.06±5.78)%、(61.94±5.14)%和(69.13±5.12)%，治療劑量越大，MPE值越高。并且梓醇各劑量組和陽(yáng)性藥物組與溶劑組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，對(duì)CCI大鼠均有明顯的痛覺(jué)抑制效果，梓醇劑量為25 mg/kg時(shí)MPE與陽(yáng)性藥物組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，梓醇劑量為125 mg/kg時(shí)的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于陽(yáng)性藥物(P＜0.001)，見(jiàn)圖 2。

圖2 CCI大鼠用藥后各組MPE值比較

3 討論

CCI模型是通過(guò)適度的結(jié)扎坐骨神經(jīng)，選擇性損傷有髓鞘的粗纖維，保留大部分傳遞痛覺(jué)的C類(lèi)纖維來(lái)研究神經(jīng)病理性疼痛的常用模型。本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后手術(shù)側(cè)后肢MWT降低，非手術(shù)側(cè)MWT無(wú)變化，說(shuō)明手術(shù)模型建立成功。手術(shù)后第4天開(kāi)始給予巴噴丁、梓醇治療 CCI，MWT值逐漸升高，炎性疼痛的抑制率(MPE)逐步回升，機(jī)械痛得到逆轉(zhuǎn)，同時(shí)梓醇的治療效果具有時(shí)間累積效應(yīng)和劑量依賴性，治療時(shí)間越長(zhǎng)，疼痛抑制率越高；藥物劑量越高(25、125 mg/kg)，鎮(zhèn)痛效果越好；且治療中未發(fā)現(xiàn)耐受性。表明梓醇可有效減少CCI模型大鼠的神經(jīng)性疼痛。

既往研究［8］表明神經(jīng)病理性疼痛與組織外周神經(jīng)免疫細(xì)胞關(guān)系密切，當(dāng)外周組織受到損傷，損傷部位的中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等大量聚集，釋放各種炎性介質(zhì)、趨化因子和防御素等，使肥大細(xì)胞具有趨化性，也使傳導(dǎo)疼痛刺激的傷害性感受器發(fā)生敏化，增加了痛覺(jué)過(guò)敏。小膠質(zhì)細(xì)胞的異常激活在神經(jīng)病理性疼痛中也發(fā)揮著重要作用，發(fā)現(xiàn)大腦和脊髓中大量分布的小膠質(zhì)細(xì)胞，在神經(jīng)損傷后的數(shù)小時(shí)內(nèi)即可被激活，并產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)，釋放大量的炎性細(xì)胞因子如IL-6、TNF-α及細(xì)胞因子等活性物質(zhì)［9］。該活性物質(zhì)又作用于周?chē)哪z質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生級(jí)聯(lián)反應(yīng)或作用于痛覺(jué)神經(jīng)元上對(duì)應(yīng)的受體或信號(hào)級(jí)聯(lián)通路，導(dǎo)致脊髓中樞敏化，促進(jìn)神經(jīng)病理性疼痛［10-11］。既往研究［3，12］證實(shí)梓醇可通過(guò)清除自由基，提高抗氧化酶活力，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化，降低腫瘤壞死因子、白介素等炎癥因子的過(guò)量表達(dá)，在抗氧化、抗炎癥和提高神經(jīng)可塑性等方面起重要作用，這可能是逆轉(zhuǎn)CCI大鼠神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)理，但具體發(fā)生機(jī)制還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

總之，梓醇對(duì)CCI模型大鼠神經(jīng)病理性疼痛有一定的鎮(zhèn)痛作用，并且隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)和治療劑量的加大，治療效果越明顯。

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