發酵乳桿菌HCS08-020抑菌功能研究

□ 張曉蕊 范翠翠 徐長隆 王雅麗 漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司

益生菌是指對人、動物有益影響的活性微生物，攝入一定數量后，對宿主產生一種或多種特殊且經論證確實存在的健康益處。目前益生菌的作用機制還在探索之中，但已經有一定的共識：益生菌分泌或代謝過程中產生的一些化學物質抑制殺死病原菌；益生菌占據腸道粘膜上皮有害菌結合位點，形成保護屏障；益生菌調節免疫應答，防止感染等。益生菌在體內和體外的發酵過程中，會產生有益的代謝產物，如抑菌蛋白類、多肽類、有機酸類、細菌素類等，這些產物對益生菌抑制有害菌增殖有其至關重要的作用。益生菌的抑菌作用在解決藥物殘留、抗藥性方面有著廣闊的應用前景。因此本文采用牛津杯法，以金黃色葡萄球菌等8種菌作為指示菌對是漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司自主分離的發酵乳桿菌HCS08-020及其代謝產物進行了體外抑菌活性的研究，以此收集相關實驗數據，為后續公司菌種產品的開發奠定基礎。

1 材料與試劑

1.1 菌種

益生菌：發酵乳桿菌HCS08-020，由漢臣氏（沈陽）兒童制品有限公司分離和保存。指示菌：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、志賀氏菌、白色念珠菌、牙齦卟啉單胞菌、變異鏈球菌、單增李斯特菌。

1.2 儀器與設備

恒溫培養箱、厭氧恒溫培養箱、冰箱、微量移液器及吸頭、無菌錐形瓶、無菌試管、無菌培養皿、 高壓滅菌鍋、涂布棒、牛津杯、恒溫水浴鍋。

1.3 培養基與試劑

LB培養基、沙堡瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、TSA + 5%脫纖維羊血、TSA-YE 培養基、BHI培養基、MRS培養基、無菌水、NAOH、HCL標定液。

2 實驗與方法

2.1 菌種發酵液濃縮

取冰箱保存的發酵乳桿菌HCS08-020凍存管1支室溫條件迅速溶化，用微量移液器取菌液以1%的接種量于MRS培養基中，37 ℃培養24 h后擴大培養至100 mL，10 000 rpm離心10 min，取上清，加熱濃縮至3倍、5倍，放4 ℃備用。

2.2 指示菌株活化處理

各個指示菌培養條件。28 ℃恒溫振蕩培養箱：培養白色念珠菌（轉速100 rpm，48 h）。30 ℃恒溫培養箱：培養牙齦卟啉單胞菌（厭氧）、乳雙歧桿菌。37 ℃恒溫培養箱：培養大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌、志賀氏菌、單增李斯特菌、變異鏈球菌（厭氧）。

2.3 牛津杯法抑菌實驗

2.3.1 制備含菌平板

制備用于培養各指示菌的固體培養基平板，將培養至對數期的各指示菌稀釋至菌液濃度為105CFU/mL，取菌懸液100 μL均勻涂布于培養基上，每株指示菌涂布3個平板（為一組）。

2.3.2 添加抑菌物質

用鑷子將無菌牛津杯豎于涂有菌液的平皿中，每皿三平行，每組平板分別加入200 μL原倍上清液、3倍濃縮和5倍濃縮上清液。

2.3.3 測量抑菌圈直徑

將平皿正置于適宜溫度的恒溫培養箱中培養相應時間，觀察抑菌圈形成情況并拍照，同時用游標卡尺計量抑菌圈直徑。

3 結果與分析

3.1 結果

發酵乳桿菌HCS08-020抑菌結果見表1。

表1 發酵乳桿菌HCS08-020抑菌結果

3.2 分析

通過試驗結果可以得出：發酵乳桿菌HCS08-020的代謝產物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌和福氏志賀氏菌有抑菌作用，且隨著發酵液濃縮倍數的遞增抑菌效果增強；但對單增李斯特菌、白色念珠菌、牙齦卟啉單細胞菌和變異鏈球菌未表現出抑制作用。

本文初步對發酵乳桿菌HCS08-0201代謝產物的抑菌效果進行了評價，由結果可以看出發酵液濃縮倍數越大對人體某些常見致病菌的抑菌效果越顯著。這可能是代謝產物中抑菌成分被濃縮引起的，之后還需要對抑菌成分進行提取分析，并提高該菌分泌抑菌成分的能力，以期對該菌種進行更好的開發。