超高效液相色譜-串聯質譜法檢測市場中不同種類雞胸肉中的青霉素及其代謝產物

□ 史玉琴 張家口市宣化區食品和市場監督管理局

市場上以肌肉博士、4度°、肌肉小王子、泰森雞胸肉等雞胸肉銷量最為可觀，宣傳口號都是以高蛋白、低脂肪為主，真空包裝，且有不同的口味供大眾選擇，可加熱，也可直接食用。因此，采用超高效液相色譜-串連質譜法，檢測出現在市場上不同種類的雞胸肉中的青霉素及其代謝產物的成分。

1 研究背景

青霉素屬于β-內酰胺類抗生素，被應用在人體和動物的呼吸道感染以及胃腸道的疾病治療中，如果用藥不規范容易導致藥在動物組織中殘留。在食品中殘留的青霉素及其代謝產物容易對人體存在潛在的危害，也發生過相關的食用青霉素殘留食品產生的食物中毒的相關報道。在歐盟的相關標準中規定，雞胸肉中存在的青霉素殘留含量控制在50 μg/kg，阿莫西林代謝產物也同樣如此，不能超過規定的標準范圍[1]。市場中出現的雞胸肉種類繁多，基于此，對市場上不同種類的雞胸肉中的青霉素及其代謝產物進行檢測非常有必要。

2 研究方法

2.1 實驗對象與實驗儀器

針對市場中出現的肌肉博士、4度°、肌肉小王子、泰森雞胸肉等進行青霉素及其代謝產物的檢測。采用超高效液相色譜-串連質譜設備，相關的配置設備有電噴霧離子源、超聲波清洗儀以及水相濾膜等，采用乙腈、阿莫西林、青霉素等，用50∶50的方法配制成1 000 mg/L的儲備液，并將其保存在5 ℃的冰箱中。

2.2 超高效液相色譜-串連質譜的條件與參數

采 用 T3色 譜 柱（100 mm×2.1 mm），乙腈與0.15%的甲酸-5 mmol/L乙 酸 銨（pH=2.8），pH值為2.8。洗脫的程序：0～6 min在2%～70%， 流 速 為 0.25 mL/min，室內溫度為20 ℃，色譜柱的溫度為30 ℃，進樣為 10 μL。用正離子進行掃描，毛細管與射頻透鏡的電壓為3.5 kV和0.5 V，電噴霧離子源的溫度與脫溶劑的溫度分別為110 ℃和350℃，光電倍增器的電壓為650 V，碰撞氣壓為0.27 Pa，其他參數見表1。

表1 質譜參數

2.3 不同種類的雞胸肉樣品處理

對肌肉博士、4度°、肌肉小王子、泰森雞胸肉分別均勻取出5 g的雞胸肉樣品，對其進行檢測，將5 g的雞胸肉樣品放在離心試管中，然后在試管中加入青霉素G，要達到50 μg/kg的標準；1 min之后再加入3 mL的水，反應3 min之后加入20 mL的乙腈，使用勻漿機進行反應，1 min后以5 000 r/min的離心10 min，時間完成后取出10 mL的上層清液放到瓶中，在40℃的溫度中進行蒸干，然后加入2 mL的乙酸銨溶解殘余物，加入5 mL的正己烷加工1 min，然后將其轉導離心管中，以6 000 r/min的速度反應5 min，然后再使用正己烷進行去脂，最后以12 000 r/min反應10 min，等待檢測。

3 實驗結果

3.1 串連質譜優化

在離子化的模式下選擇電離方式進行掃描，分析青霉素在離子源的電離掃描方式下能夠獲得豐厚的母離子，確定后母離子后使用子離子的方式進行二次質譜分析，對其進行優化，確定定量離子。通過優化毛細管電壓、錐孔電壓、碰撞能量等質譜參數能夠分析出準分子離子的強度。

3.2 液相色譜優化

采用T3色譜柱作為實驗，分析了甲醇、乙腈與水的分離效果，兩者雖然對化合物的分離影響沒有較大差別，但是乙腈與水的效果要明顯優于甲醇與水的效果，因此采用乙腈與水作為本次實驗的流動相。檢測發現，四種雞胸肉品牌中，都存在青霉素藥物及其代謝物，在溶解后以離子的狀態存在，為了增強青霉素在色譜柱上的峰值，會在流動相中加入酸性物質，提高流動相的靈敏度與分離效果。實驗表明，甲酸濃度對流動相的靈敏度沒有較大的影響，而乙腈對流動相的影響較大。

4 結語

采用超高效液相色譜-串連質譜的方法對市場中不同種類的雞胸肉中的青霉素及其代謝產物進行檢測，有較高的靈敏性，檢測效果良好，重復性能較好，含量均低于限量標準，能夠為生物組織樣品中的青霉素類藥物代謝研究提供更高的分析基礎。