獸肉中氟甲喹殘留物檢測(cè)技術(shù)探討
—— 高效液相色譜質(zhì)譜法

□ 沈 潔 葉彩平 聶榮榮 梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所

氟甲喹是屬于喹諾酮類(lèi)的一種抗菌藥物。氟甲喹抗菌譜廣，抗菌作用強(qiáng)，特別是對(duì)大腸桿菌、支原體、嗜水氣單胞菌引起的畜、禽及水生動(dòng)物疾病有較好療效。但盡管氟甲喹具有較高的安全性，如果用藥不合理，則會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)中大量存積。產(chǎn)品再供人類(lèi)使用后，會(huì)對(duì)肝、腎造成損害，危害人類(lèi)的生命健康。

目前，氟甲喹檢測(cè)方式各有不同，甚至連樣品凈化方式都各有不同。有的檢測(cè)方式增加了檢驗(yàn)的時(shí)間及難度。筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)，使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，大大簡(jiǎn)化了樣品前處理，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 儀器與藥品

1.1.1 儀器

島津超高效液相色譜串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（LCMS-8040）、電噴霧離子源、Labsolutions色譜工作站。

1.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品

氟甲喹（由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供）。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)品溶解定容，配制成適合使用的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件：

色譜柱：C18柱，2.0μm，100 mm×2.1 mm。

流動(dòng)相：乙腈、0.1%甲酸水溶液（45+55，體積比）

梯度洗脫：流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；柱溫3 ℃。梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序表

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離源（ESI）。掃描方式：多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）掃描。錐孔電壓：28 V。駐留時(shí)間：3.5 msec。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)步驟

（1）樣品前處理。稱(chēng)取2.5 g試樣于50 mL塑料離心管中，加入10 m L0.1 mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖溶液，用均質(zhì)器10 000 r/min均質(zhì)5 min后，再以10 000r/min離心5 min。收集上清液于25 mL比色管中，重復(fù)提取兩次。HLB固相萃取柱（200 mg，6 mL）依次用3 mL甲醇、6 mL水預(yù)淋洗后，將提取到的樣品液離心后移取所有樣品液上柱，棄去濾液。用3 mL 5%甲醇水溶液淋洗，棄去；再用5 mL甲醇洗脫，收集洗脫液于10 mL刻度試管中。整個(gè)固相萃取凈化過(guò)程控制流速不超過(guò)2 mL/min。洗脫液在氮吹儀上吹干。殘留物用1 mL 0.1%甲酸水溶解，過(guò)0.2 μm微孔濾膜，供測(cè)定。

圖1 氟甲喹（262.10/202.05）定性離子對(duì)圖譜

（2）優(yōu)化。對(duì)氟甲喹標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行優(yōu)化，確定母離子、子離子，挑選強(qiáng)度最大的兩對(duì)母離子與子離子作為定性離子對(duì)及定量離子對(duì)。負(fù)離子模式下優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表2。

上機(jī)：將配置好的標(biāo)準(zhǔn)系列容易按濃度由低到高的順序進(jìn)樣測(cè)定。

表2 氟甲喹定性定量離子對(duì)

圖譜如圖1、圖2、圖3所示。

圖2 氟甲喹（262.10/244.1）定量離子對(duì)圖譜

圖3 氟甲喹（TIC+）總離子流圖譜

2 結(jié)果與討論

2.1 精密度試驗(yàn)

用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣1.00 μL，重復(fù)進(jìn)樣8次，得出各組分相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），見(jiàn)表3。

2.2 添加標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率實(shí)驗(yàn)

取獸肉樣品先測(cè)出各種獸殘值，然后加入標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定其回收率，實(shí)驗(yàn)表明回收率均在85%以上，具體見(jiàn)表4。

表3 方法的精密度

表4 回收率測(cè)定結(jié)果表

3 結(jié)論

本文對(duì)獸肉樣品檢驗(yàn)儀器及方法進(jìn)行改進(jìn)，采用超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，加快檢測(cè)速度，但不影響其峰型及回收率，從而達(dá)到快速測(cè)定、提高工作效率的目的。