LASP-1對(duì)不同來(lái)源成骨細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、成骨功能及細(xì)胞周期分布的影響

賈芳 賴春花 周震 高巖 郭澤鴻 徐淑蘭

南方醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院（廣州510082）

口腔種植體植入后，成骨細(xì)胞遷移并吸附至種植體表面的時(shí)效性可極大程度地影響種植體負(fù)重的時(shí)間，影響治療進(jìn)度［1-5］。影響細(xì)胞支架的LASP-1（LIM and SH3 protein）被多數(shù)研究證明可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移［6-9］。NISHIKAWA等［10］認(rèn)為L(zhǎng)ASP-1在膀胱癌中高表達(dá)，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。MG-63作為研究成骨細(xì)胞生物學(xué)行為的良好細(xì)胞模型，在各項(xiàng)研究中被廣泛使用，但其作為腫瘤來(lái)源細(xì)胞，我們推測(cè)其可能與非腫瘤來(lái)源細(xì)胞在某些生物學(xué)功能方面具有差異。因此，本研究擬比較并干擾小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSC）、人成骨細(xì)胞（hOB）以及人骨肉瘤細(xì)胞（MG-63）中LASP-1的表達(dá)，初步驗(yàn)證其在非腫瘤來(lái)源細(xì)胞（BMMSC及hOB）和腫瘤來(lái)源細(xì)胞（MG-63）的表達(dá)差異，比較其對(duì)該兩大類細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)遷移性能、成骨性能、增殖能力及細(xì)胞周期分布比例的影響，以推測(cè)LASP-1是否通過(guò)影響細(xì)胞遷移導(dǎo)致以上各性能差異。為今后研究LASP-1對(duì)在非腫瘤來(lái)源細(xì)胞的其他功能提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化

1.1.1 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSC）的分離及培養(yǎng) 采用6%水合氯醛，以濃度為0.5 mL/100 g，對(duì)6～8周裸鼠進(jìn)行麻醉，分別延雙側(cè)股骨長(zhǎng)軸行縱向切口，分離表皮、肌層及筋膜層，暴露骨端，分離股骨，采用含抗生素的無(wú)血清培養(yǎng)基浸泡。使用手術(shù)刀切去兩端骨骺端，暴露骨髓腔，采用含20%胎牛血清的培養(yǎng)基沖洗至骨質(zhì)透明，于37℃，5%CO2培養(yǎng)3 d后換液。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 本實(shí)驗(yàn)采用人骨肉瘤細(xì)胞（MG-63）及人成骨細(xì)胞（hOB）作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，均購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù)。MG-63、hOB置于37℃、5%CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行孵育。

1.2 各細(xì)胞中LASP-1 mRNA的表達(dá)檢測(cè) （1）將BMMSC的細(xì)胞密度調(diào)整為1×105個(gè)/mL，移入1 mL至6孔板，加入骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基（抗壞血酸60 mg/L，15 mmol/L磷酸甘油，12 nmol/L地塞米松，以及20%FBS的DMEM培養(yǎng)基）誘導(dǎo)分化7 d，再將BMMSC、hOB以及MG-63分別以1×106個(gè)/mL移入 10 cm2的培養(yǎng)板中，加入 Trizol（Invitrogen，15596026）進(jìn)行總RNA提取，纖維素柱（dT）（Thermo，69702）進(jìn)行mRNA分離，采用隨機(jī)引物，Super-ScriptⅢ反轉(zhuǎn)錄酶（Invitrogen，18080093）合成cDNA第一鏈；再采用核酸內(nèi)切酶H（上海君瑞）以及T4DNA ligase（Thermo Fisher，15224017）合成第二鏈cDNA，合成dsDNA使用Light Cycler H 480反應(yīng)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（Real time-PCR）。引物序列為：F：5′-ACGATCGGTACCTAAGT TCGATA-3′，R：3′-TAATACGTCTGACCGAATCAGA-5′，LASP-1的引物、探針的設(shè)計(jì)及合成由Invitrogen完成。反應(yīng)體系為：LASP-1上下游引物0.4 μL，cDNA 2.5 μL，DEPC 水 ，引 物 GAPDH 0.4 μL，Buffer（10 ×）4 μL，50 mmol/L dNTP 4 μL，Taq酶0.3 μL，MgCl22 μL，總體系 20 μL，以評(píng)價(jià) LASP-1 在BMMSC，MG-63和hOB中的表達(dá)，初始變性為95 ℃ 10 min；95 ℃ 10 s，進(jìn)行45個(gè)循環(huán)擴(kuò)增；55℃變性，30 s退火；42℃冷卻30 s，延伸72℃ 3 min。LASP-1的定量計(jì)算通過(guò)3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH：序列：F：5′GAGACCTTCAACACCCCAGC-3′；R：5′CCACAGGATTCCATACC CAA-3′）為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。反應(yīng)結(jié)束后，確認(rèn)擴(kuò)增及溶解曲線，進(jìn)行定量分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 Western Blot檢測(cè)BMMSC、hOB以及MG-63中LASP-1的表達(dá) 分別將上述經(jīng)骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的BMMSC、MG-63和hOB以1×105個(gè)/mL移入6孔板，各加入150 μL RIPA裂解液（Thermo，89901），提取總蛋白后，使用BCA蛋白定量試劑盒（ab102536，Abcam）測(cè)量蛋白濃度，按操作說(shuō)明進(jìn)行。計(jì)算各濃度蛋白標(biāo)準(zhǔn)的平均吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。提取的總蛋白，加入2×SDS蛋白上樣緩沖液（1∶1），100℃下煮沸 5 min，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｔ偻ㄟ^(guò)SDS-PAGE膠制作、電泳、轉(zhuǎn)膜、4℃封閉過(guò)夜。將膜取出放入抗小鼠單克隆LASP-1抗體（ab130109，Abcam）（1 μg/mL）中，4 ℃封閉過(guò)夜；PBST洗膜，5 min×4次；將膜轉(zhuǎn)入二抗（1∶5 000，山羊抗鼠單克隆抗體A00160，南京金斯瑞）中，37℃反應(yīng)1 h；PBST洗膜，5 min×5次；用化學(xué)發(fā)光法顯影。

1.4 shLASP-1的轉(zhuǎn)染 將1.2中獲取的cDNA采用末端轉(zhuǎn)移酶TdT（Invitrogen 16314015）進(jìn)行修飾，形成黏性末端。反應(yīng)體系為：cDNA 1 pmol/L；5 × Reaction buffer 4 μL；dATP 130 pmol；TdT 1.5 μL，加入ddH2O 至20 μL于37℃反應(yīng)20 min，5 μL 0.5 mol/L EDTA終止反應(yīng)。將質(zhì)粒載體pLV［shLASP］-EGFP（Vector builder）進(jìn)行雙酶切反應(yīng)，酶切體系包括以下試劑：10×LA Buffer（Tris-HCl pH8.5100mmol/L，KCl500nmol/L，MgCl215nmol/L）5 μL，100 × BSA 0.5 μL，pLV［shLASP］-EGFP 2 μL，限制性核酸內(nèi)切酶PvuI 1 μL，NcoI 1 μL（Takara），加入ddH2O，總體系共50 μL，于37℃反應(yīng)3 h。再將已修飾的dsDNA及經(jīng)酶切的質(zhì)粒載體于T4DNA ligase的連接反應(yīng)體系中進(jìn)行連接反應(yīng)，水浴16℃過(guò)夜。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DB3.1感受態(tài)細(xì)胞（北京華越洋），體積比均為1∶15。加入LB培養(yǎng)基（不含抗生素），于搖床上培養(yǎng)1 h，加入鏈霉素，將平板倒置，37℃培養(yǎng)24 h，篩選陽(yáng)性克隆菌群。宿主細(xì)胞篩選穩(wěn)定后，收集細(xì)菌，采用質(zhì)粒小量提取試劑盒（Invitrogen，K210002）進(jìn)行質(zhì)粒抽提，再行雙酶切反應(yīng)鑒定DNA重組是否成功，酶切體系包括以下試劑：10 × LA Buffer 2 μL，重組質(zhì)粒DNA 10 μL，限制性核酸內(nèi)切酶（同上），ddH2O 6 μL，總體系共20 μL，于37℃下孵育3 h；同時(shí)采用瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)酶切結(jié)果；將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，當(dāng)其密度為6×106個(gè)/mL，達(dá)到70%融合時(shí)，進(jìn)行轉(zhuǎn)染12 h，更換為常規(guī)培養(yǎng)基，于37℃，5%CO2中培養(yǎng)48 h，收集慢病毒顆粒后，于-80℃保存。采用10倍有限稀釋法進(jìn)行病毒滴度檢測(cè)。確定后，采用MOI=65感染BMMSC，hOB和MG-63（均達(dá)到30%匯合度）各12 h后，更換病毒液為常規(guī)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)至48 h；附以陰性LASP-1 negative control（LASP-1 NC）及陽(yáng)性對(duì)照組（shMOCK）。采用qRT-PCR進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率的檢測(cè)，剩余轉(zhuǎn)染細(xì)胞儲(chǔ)存于1 μg/mL的嘌呤霉素中（Thermo Fisher）。見(jiàn)圖1。

圖1 pLV［shLASP］-EGFP質(zhì)粒DNA結(jié)構(gòu)圖Fig.1 Structure diagram of pLV［shLASP］-EGFP plasmid DNA

1.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn) 于細(xì)胞6孔培養(yǎng)板背面標(biāo)記穿過(guò)培養(yǎng)孔圓心的水平直線，將已轉(zhuǎn)染shLASP-1的BMMSC、hOB以及MG-63細(xì)胞以2.2×104個(gè)/mL的密度加入6孔板中100 μL，形成單細(xì)胞層，采用200 μL槍頭于培養(yǎng)孔內(nèi)垂直于標(biāo)記線劃痕，加入無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)12 h，觀察細(xì)胞運(yùn)動(dòng)遷移狀態(tài)。

1.6 Western Blot檢測(cè)LASP-1對(duì)OCN表達(dá)的影響 采用成功轉(zhuǎn)染shLASP-1的BMMSC和MG-63，以1×105個(gè)/mL接種，兩種細(xì)胞均采用RIPA裂解液（Thermo，89901）及BCA蛋白定量試劑盒（Thermo，23235），提取細(xì)胞總蛋白并進(jìn)行定量檢測(cè)。常規(guī)進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，具體方法如1.3，加入抗小鼠單克隆OCN抗體（ab13420），封閉洗膜后轉(zhuǎn)入二抗（1∶5 000，山羊抗鼠單克隆抗體A00160，南京金斯瑞）中，37℃反應(yīng)1.5 h；洗膜并過(guò)夜進(jìn)行免疫反應(yīng)，顯影。

1.7 XTT法檢測(cè)LASP-1對(duì)細(xì)胞增殖性能的影響 按1.4將經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染shLASP-1的BMMSCs，hOB以及MG-63細(xì)胞密度固定為2.2×104個(gè)/mL，于96孔板中分別加入100 μL細(xì)胞懸液，于5%CO2，37℃培養(yǎng)3 d，于倒置顯微鏡下觀察，每48 h換液1次，設(shè)置空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、處理組以及調(diào)零組，每個(gè)處理組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，加入新鮮配制的XTT與電子偶聯(lián)劑的混合液（50∶1），50 μL/孔，培養(yǎng)4 h，置入酶標(biāo)儀450 nm處檢測(cè)吸光值。見(jiàn)表1。

表1 XTT實(shí)驗(yàn)96孔板各組分布情況Tab.1 Distribution of each group in 96-well plate in XTT experiment

1.8 LASP-1對(duì)細(xì)胞周期的影響 采用200 μg/mL諾考達(dá)唑（Sigma）將經(jīng)shLASP-1轉(zhuǎn)染的MG-63和hOB分別處理20 h，使細(xì)胞停留在G2/M期。PBS清洗，并采用CycleTest試劑盒（碧云天C1052）檢測(cè)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞所處的細(xì)胞周期。400×g離心5 min后，加入250 μL的A溶液（胰蛋白酶緩沖液）至細(xì)胞中，室溫下孵育10 min后，加入200 μL溶液B（胰蛋白酶抑制劑和核糖核酸酶），在室溫下孵育10 min。最后，加入200 μL溶液C（碘化丙啶染色液），避光于冰上孵育10 min。采用Accuri C6流式細(xì)胞儀分析（Becton Dickinson）檢測(cè)DNA含量。用FCS Express 4對(duì)細(xì)胞周期分布進(jìn)行定量分析。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析行整體差異比較，兩組之間的比較采用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 LASP-1在BMMSC、hOB及MG-63中的表達(dá) LASP-1在BMMSC及hOB中的表達(dá)未見(jiàn)明顯差異，而MG-63者則高于前兩者（P＜0.05）。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，經(jīng)雙酶切后的質(zhì)粒載體獲得三段分子，其大小分別為：1 198、1 897、6 812 bp，與理論值大小一致。表明重組載體構(gòu)建成功。見(jiàn)圖2、3。

2.2 經(jīng)shLASP-1轉(zhuǎn)染的各細(xì)胞遷移性能改變由圖4可見(jiàn)，經(jīng)轉(zhuǎn)染shLASP-1，BMMSC及hOB（非腫瘤來(lái)源細(xì)胞）的細(xì)胞遷移距離較MG-63（腫瘤來(lái)源細(xì)胞）者稍遠(yuǎn)，但未見(jiàn)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；細(xì)胞形態(tài)未見(jiàn)明顯差異。

2.3 shLASP-1轉(zhuǎn)染 經(jīng)轉(zhuǎn)染shLASP-1，LASP-1在BMMSC和hOB中的表達(dá)未見(jiàn)明顯變化，但MG-63者則可見(jiàn)表達(dá)降低；shMOCK組者，LASP-1在MG-63中明顯升高，但在BMMSC和hOB中仍未見(jiàn)明顯變化。圖5。

圖2 qRT-PCR檢測(cè)LASP-1在BMMSC、hOB及MG-63中的表達(dá)Fig.2 Expression of LASP-1 in BMMSC，hOB and MG-63 by qRT-PCR

圖3 Western Blot檢測(cè)LASP-1在BMMSC、hOB及MG-63中的表達(dá)Fig.3 LASP-1 expression of BMMSC，hOB and MG-63 by western blot

圖4 經(jīng)shLASP-1轉(zhuǎn)染，BMMSC、hOB以及MG-63培養(yǎng)12 h的細(xì)胞遷移狀態(tài)Fig.4 Cell migration of BMMSC，hOB and MG-63 been cultured for 12h after been transfected with shLASP-1

圖5 qRT-PCR檢測(cè)BMMSC、hOB及MG-63經(jīng)shLASP-1轉(zhuǎn)染后LASP-1的表達(dá)Fig.5 Expression of LASP-1 of BMMSC，hOB and MG-63 been transfected with shLASP-1

2.4 LASP-1對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響 經(jīng)XTT檢測(cè)顯示腫瘤來(lái)源的MG-63在經(jīng)shLASP-1轉(zhuǎn)染條件下，細(xì)胞數(shù)量降低，增殖能力下降；而shMOCK組則顯示細(xì)胞增殖能力明顯上升，細(xì)胞數(shù)量升高。而隨LASP-1表達(dá)量的改變，BMMSC的細(xì)胞數(shù)量未見(jiàn)明顯變化。見(jiàn)圖6。

圖6 XTT檢測(cè)經(jīng)轉(zhuǎn)染后BMMSC以及MG-63的細(xì)胞增殖情況（200×）Fig.6 XTT result of the cell proliferation of BMMSC and MG-63 after transfection（Amplification of 200）

2.5 LASP-1對(duì)OCN表達(dá)的影響 經(jīng)轉(zhuǎn)染shLASP-1，改變LASP-1的表達(dá)，檢測(cè)其對(duì)BMMSC以及MG-63的OCN（骨鈣素）表達(dá)的影響顯示：BMMSC的OCN表達(dá)未受影響；而MG-63者則發(fā)生明顯變化：shLASP-1組的OCN表達(dá)降低，而shMOCK組表達(dá)含量明顯升高。見(jiàn)圖7。

2.6 LASP-1對(duì)細(xì)胞周期的影響 LASP-1的表達(dá)改變對(duì)hOB及MG-63的細(xì)胞分布周期的影響見(jiàn)圖8：hOB在不同細(xì)胞周期的分布比例未見(jiàn)明顯變化，而MG-63者，shLASP-1組，處于G2/M期的細(xì)胞比例有所上升，處于G0/G1期的細(xì)胞含量下降；shMOCK組則處于G2/M期的細(xì)胞比例下降，處于G0/G1期的細(xì)胞比例明顯上升。見(jiàn)圖8。

圖7 LASP-1對(duì)BMMSC及MG-63的OCN表達(dá)的影響Fig.7 OCN expression of BMMSC and MG-63 after been transfected with shLASP-1

圖8 LASP-1對(duì)hOB及MG-63細(xì)胞周期的影響Fig.8 Affect of LASP-1 on cellcycle of hOB and MG-63

3 討論

骨組織再生修復(fù)過(guò)程主要包括：在破骨活動(dòng)進(jìn)行的前提下，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨前體細(xì)胞及成骨細(xì)胞、在骨誘導(dǎo)因子作用下遷移至骨缺損區(qū)、分泌骨基質(zhì)蛋白，并促進(jìn)后期的基質(zhì)礦化［12］。因此，骨誘導(dǎo)分化過(guò)程中，破骨細(xì)胞導(dǎo)致骨吸收，成骨前體細(xì)胞遷移至骨缺損區(qū)是成骨細(xì)胞最終分化成熟并發(fā)揮作用的重要前提［13］。

LASP-1為肌動(dòng)蛋白骨架蛋白，Targetscan數(shù)據(jù)庫(kù)分析并驗(yàn)證在乳腺癌細(xì)胞中，LASP-1對(duì)于腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲有明顯促進(jìn)作用［14-16］，并對(duì)肌動(dòng)蛋白纖維束的穩(wěn)定有重要作用［17-18］。有研究采用KEGG（京都基因及基因組百科全書(shū)）分析LASP-1可能參與的細(xì)胞通路，發(fā)現(xiàn)與之相關(guān)性很大的通路：粘附通路：KEGG（04510）［10］，表明其與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)具有重大關(guān)聯(lián)性。然而，關(guān)于其對(duì)正常組織細(xì)胞遷移影響的研究甚少，因此有必要研究其在正常組織中的表達(dá)及功能，以進(jìn)一步完善對(duì)其的了解。基于以上背景，本課題組通過(guò)對(duì)BMMSC，hOB及MG-63中LASP-1的表達(dá)變化以及其對(duì)以上各細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性能、增殖性能、OCN表達(dá)以及細(xì)胞周期分布規(guī)律影響的研究，驗(yàn)證其是否與正常骨組織的分化及功能發(fā)揮過(guò)程具有相關(guān)性，并比較其在非腫瘤細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)區(qū)別。

如圖3所示，LASP-1在未經(jīng)誘導(dǎo)的BMMSC及hOB中的表達(dá)明顯較MG-63者低，這可能與BMMSC和hOB為非腫瘤來(lái)源，MG-63為腫瘤來(lái)源細(xì)胞有關(guān)。基因水平qRT-PCR檢測(cè)與蛋白水平WB的檢測(cè)結(jié)果一致。分別轉(zhuǎn)染BMMSC、hOB及MG-63后，發(fā)現(xiàn)BMMSC和hOB的LASP-1表達(dá)未見(jiàn)明顯改變，且在不同細(xì)胞周期的細(xì)胞分布比例未見(jiàn)顯著變化；而采用shLASP-1轉(zhuǎn)染后，MG-63的細(xì)胞遷移距離較BMMSC及hOB肉眼觀下略低，但未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；在G2/M期的分布比例明顯升高，在G0/G1期的分布降低，表明其處于DNA合成前期的細(xì)胞數(shù)量降低，而處于DNA合成后期的細(xì)胞數(shù)量上升，細(xì)胞增殖分裂數(shù)量降低；但shMOCK組該細(xì)胞系在G2/M期的分布降低，G0/G1期的分布比例升高，細(xì)胞增殖分裂數(shù)量升高。即LASP-1與BMMSC的傳代、運(yùn)動(dòng)及分化無(wú)明顯相關(guān)，亦對(duì)hOB者亦無(wú)明顯影響，但對(duì)MG-63的基因表達(dá)及細(xì)胞分裂有影響，對(duì)之遷移能力未見(jiàn)明顯影響。

骨鈣素OCN可維持骨的正常礦化速率，是骨形成的重要生化標(biāo)志。通過(guò)檢測(cè)LASP-1上調(diào)及下調(diào)后對(duì)OCN表達(dá)的影響，可見(jiàn)LASP-1確可調(diào)節(jié)MG-63的成骨相關(guān)蛋白的表達(dá)，但對(duì)經(jīng)骨誘導(dǎo)培養(yǎng)的BMMSC者則無(wú)顯著影響。因此，鑒于LASP-1對(duì)該實(shí)驗(yàn)中各細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力未見(jiàn)顯著差異性影響，推測(cè)LASP-1可能參與介導(dǎo)MG-63的其他因素而影響其成骨過(guò)程，因此有待進(jìn)一步證實(shí)；而其對(duì)正常骨組織的影響則較小。因此，擬通過(guò)調(diào)整LASP-1的表達(dá)來(lái)改變?nèi)顺晒羌?xì)胞的生化功能，則不易實(shí)現(xiàn)。有必要通過(guò)對(duì)其他信號(hào)通路的進(jìn)一步研究，以探索LASP-1與非腫瘤來(lái)源組織細(xì)胞之間的關(guān)聯(lián)，證明其間是否存在相互作用。

LASP-1在腫瘤來(lái)源的MG-63細(xì)胞中表達(dá)較在非腫瘤來(lái)源的BMMSC及hOB中的表達(dá)高；通過(guò)干擾LASP-1在MG-63中的表達(dá)，可見(jiàn)LASP-1表達(dá)的改變對(duì)細(xì)胞增殖能力、成骨能力以及細(xì)胞周期的分布比例均發(fā)生明顯變化，但對(duì)細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)未見(jiàn)明顯影響；在BMMSC及hOB中無(wú)此變化。可見(jiàn)，LASP-1對(duì)腫瘤來(lái)源的成骨細(xì)胞有調(diào)控作用，而對(duì)非腫瘤來(lái)源細(xì)胞則無(wú)明顯影響。

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